高三生物《血红蛋白的提取与分离2》(课件)

血红蛋白的提取与分离2用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？二实验操作用鸡的红细胞提取DNA，用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。二实验操作蛋白质的提取和分离一般分为四步：1.样品处理样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定二实验操作血液有哪些成分？血液血

浆水分其他

物质血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等血

细胞白细胞血小板红细胞(最多)血红蛋白(90％)两个α－肽链两个β一肽链四个亚铁血红素基团血液有哪些成分？血红蛋白①目的：去除()②方法：

()离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的()，将下层()的红细胞液体倒入烧杯，再加入用()的()洗涤。(1)红细胞的洗涤①目的：去除()②方法：

()离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的()，将下层()的红细胞液体倒入烧杯，再加入用()的()洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白①目的：去除()②方法：

()离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的()，将下层()的红细胞液体倒入烧杯，再加入用()的()洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间①目的：去除()②方法：

()离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的()，将下层()的红细胞液体倒入烧杯，再加入用()的()洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆①目的：去除()②方法：

()离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的()，将下层()的红细胞液体倒入烧杯，再加入用()的()洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色①目的：去除()②方法：

()离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的()，将下层()的红细胞液体倒入烧杯，再加入用()的()洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色五倍体积①目的：去除()②方法：

()离心(速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果)，然后用胶头吸管吸出上层透明的()，将下层()的红细胞液体倒入烧杯，再加入用()的()洗涤。(1)红细胞的洗涤杂质蛋白低速短时间黄色血浆暗红色五倍体积生理盐水初次离心后的结果3次洗涤后的结果加()到()体积，再加40％体积的()(溶解细胞膜)，置于()上充分搅拌10分钟(加速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)血红蛋白的释放加()到()体积，再加40％体积的()(溶解细胞膜)，置于()上充分搅拌10分钟(加速细胞破裂)，细胞破裂释放出血红蛋白。(2)血红蛋白的释放原血液甲苯磁力搅拌器蒸馏水将搅拌好混合液转移到离心管内，以2000r/min的速度离心10min，试管中的溶液分为4层:(3)分离血红蛋白溶液有机溶剂无色透明的甲苯层脂类物质白色脂溶性物质沉淀层血红蛋白溶液红色透明液体红细胞破碎物沉淀暗红色沉淀物分离血红蛋白溶液(4)透析取()ml的血红蛋白溶液装入()中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/L的()中，pH为()，透析12小时，目的是()或用于更换样品中的()。透析袋一般用硝酸纤维素制成，又称玻璃纸。除去样品中分子量较小的杂质透析袋磷酸缓冲液7.0缓冲液(4)透析1利用透析袋透析2.凝胶色谱制作1）凝胶色谱柱的制作①取长40厘米，内径1.6厘米的玻璃管，两端需用砂纸磨平。②底塞的制作：

②底塞的制作：打孔→挖出凹穴→安装移液管头部→覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好。

③顶塞的制作：④组装：⑤安装其他附属结构。底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。注意2）凝胶色谱柱填料的处理2）凝胶色谱柱填料的处理计算凝胶量配置凝胶悬浮液装填洗涤平衡凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在：因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。注意缓冲液液面不要低于凝胶表面，否则可能有气泡混入，影响液体在柱内的流动与最终生物大分子物质的分离效果。不能发生洗脱液流干，露出凝胶颗粒的现象，否则重新填装。注意装配好的凝胶柱在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？思考在提取血红蛋白实验中用的缓冲液是什么？它的目的是什么？使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和材料的科学研究。思考你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？思考如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成无效的空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱洗脱液的流动次序，影响分离的效果。你能从凝胶色谱的分离原理分析为什么凝胶的装填要紧密、均匀吗？思考3）样品加入与洗脱50cm高3）样品加入与洗脱①缓冲液缓慢下降50cm高②加透析样品注意正确的加样操作：①不要触及破坏凝胶面②贴壁加样③使吸管管口沿管壁环绕移动注意3）样品加入与洗脱①缓冲液缓慢下降50cm高③样品渗入凝胶床：④洗脱：⑤收集：②加透析样品收集得到的纯化后的蛋白AVSEQ08.DAT1.你是否完成了对血液样