黄精质量标准的研究

黄精质量标准的研究

黄精是百合科黄精属植物的云南黄精。它有几种花黄精。干燥的根系被称为“大黄精”、“鸡头黄精”和“姜黄精”。黄精能够补气养阴,健脾,润肺,益肾,用于脾胃虚弱,体倦乏力,口干食少,肺虚燥咳等症。黄精主要含有多糖和皂苷类化合物,其中的皂苷类化合物可能是其降血糖、降血脂、增强免疫力、抗肿瘤和改善学习记忆等作用的活性成分。黄精的现行质量标准中,仅以葡萄糖的含量作为控制黄精药材质量的指标,专属性、实用性差,不能准确可靠的控制药材黄精的质量。为此,本实验首次以薯蓣皂苷元和菝葜皂苷元为指标建立黄精的薄层鉴别方法,并采用HPLC法测定黄精酸水解前后薯蓣皂苷元的含量。结果表明,该方法简便、快捷,可靠,为黄精质量控制提供依据,也为下版药典的增订提供参考。1-皂苷元试剂十万分之一电子分析天平(AUW220,SHIMADZU);高效液相色谱仪(LC-10Avp泵,SPD-10Avp紫外检测器,CTO-10ASvp柱温箱,SHIMADZU);KQ5200型超声波清洗器(上海必能信超声有限公司);硅胶GF254(青岛海洋化工有限公司);乙腈(色谱纯);水为纯净水;其他试剂均为分析纯;薯蓣皂苷元对照品(江苏中医药研究院提供,HPLC测定纯度达98%以上);菝葜皂苷元(中国药品生物制品检定所,批号:110744-200407);黄精对照药材(中国药品生物制品检定所,批号:121341-200402);4批黄精药材样品除南京为产地采集之外,其余均购自各地药材公司,经南京医科大学都述虎教授鉴定为正品。2方法和结果2.1薄层鉴别法取薯蓣皂苷元、菝葜皂苷对照品适量,用甲醇溶解配成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法试验,吸取“2.2.3”项下供试品溶液及上述对照品溶液各10μl分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以苯-丙酮(83∶10)为展开剂,展开,取出,晾干,喷10%磷钼酸乙醇溶液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。2.2hplc测量2.2.1流动相及灵敏度色谱柱:Shim-PackVP-ODSC18(150mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(94∶6);检测波长:203nm;灵敏度:0.04AUFS;流速:1ml/min;柱温:25℃;进样量:20μl。2.2.2对照溶液的制备精密称取薯蓣皂苷元对照品10.13mg,置25ml的量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为对照品溶液。2.2.3供试品溶液及方法取60℃干燥至恒重的黄精药材粉末约2g,精密称定,置茄形烧瓶内,精密加入乙醇50ml,摇匀,称重,加热回流4h,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密取续滤液20ml,蒸干,残渣用甲醇转移至1ml容量瓶中,定容至刻度,摇匀,进样前用0.45μm的微孔滤膜过滤,作为供试品溶液(1)。另同法取20ml续滤液,蒸干乙醇,残渣加80ml、3mol/L的盐酸溶液溶解,沸水回流水解4h,冷却,移至分液漏斗中,加氯仿40ml(20ml、10ml、10ml)萃取3次,合并氯仿液,用水洗涤2次,每次20ml,减压回收氯仿至干,残渣加甲醇使溶解,移至1ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。进样前用0.45μm的微孔滤膜过滤,作为供试品溶液(2)。2.2.4标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液1.0,2.0,4.0,6.0,8.0,10.0ml,分别置于10ml量瓶中,加甲醇定容,摇匀,分别吸取不同浓度对照品溶液20μl,进行分析测定。以对照品峰面积值为纵坐标,对照品进样量为横坐标,绘制标准曲线。薯蓣皂苷元回归方程和相关系数为:Y=2548X-7635,r=0.9999,薯蓣皂苷元在0.81-8.10μg范围内,其绝对进样量X(μg)与峰面积Y之间呈良好的线性关系。2.2.5仪器精密度试验精密吸取薯蓣皂苷对照品溶液,按上述色谱条件,重复进样六次,每次20μl,测定薯蓣皂苷元峰面积的相对标准偏差RSD为1.96%,表明仪器精密度良好。2.2.6进样稳定性测定取同一供试品溶液(1)和(2),分别于0、2、4、8、12h进样测定,其峰面积RSD为1.45%和0.69%,表明供试品溶液在12h内稳定。2.2.7黄精药材水解前后薯皂苷元含量测定取同一产地(安徽)样品六份,按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液(1)和(2),并按上述色谱条件测定,测得黄精药材水解前后薯蓣皂苷元含量分别为0.01%和0.04%,RSD为2.15%和1.92%。2.2.8供试品溶液制备取已知含量的药材粉末1g(水解前后薯蓣皂苷元含量分别为0.01%和0.04%),精密加入对照品溶液适量,按“2.2.3”项下的方法操作,制备供试品溶液(1)和(2),并进样测定。结果水解前后的黄精样品回收率分别为98.16%(RSD为2.61%)和100.38%(RSD为2.07%)。2.2.9峰面积及峰面积测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液,在上述色谱条件下进样,记录各色谱峰的峰面积,每个样品重复2次,峰面积取平均值,按外标法计算含量。含量测定结果见表1。3讨论3.1提取方法的比较在参考有关文献的基础上,对样品的提取方法进行了考察。比较了先用盐酸水解、后用氯仿提取法和先用乙醇提取,后用盐酸水解法以及两相溶剂的直接水解提取法,结果表明先用乙醇提取,再用盐酸水解,最后用氯仿萃取的方法最优。3.2样品提取溶剂的选择取同一产地样品分别精密加入50ml无水乙醇、甲醇、50%甲醇,以及分别加热回流2、4、6h,比较不同溶剂、不同时间的提取效果。结果乙醇可较好去除干扰杂质,且提取完全,易回收。故选择乙醇作为样品提取溶液。样品提取4h含量最大,说明提取时间增加,可能造成薯蓣皂苷脱水等副反应的增加,最终确定提取时间为4h。3.3盐酸加热水解对马铃薯皂苷元结构的影响参考文献,分别用2mol/L、3mol/L、4mol/L盐酸水解2、4、6h,结果3mol/L盐酸加热水解4h效果最好,酸度过大和时间过长均能破坏薯蓣皂苷元结构。萃取条件的考察中分别用氯仿、石油醚、醋酸乙酯直接萃取,以及氯仿回流萃取,结果表明以氯仿30ml直接萃取3次的效果最优。3.4马铃薯皂苷元用量测定对南京、大连、河南等5个产地或商品的黄精药材进行了分析,结果表明,黄精药材酸