微生物与免疫实验汇报

微生物与免疫实验汇报

实验小组：第二组小组成员：麦嘉欣（汇报人）刘育宏贾晨飞指导老师：王卓娅实验一肠杆菌科细菌鉴定实验目的熟悉肠杆菌科细菌鉴定程序和方法，学会分析其实验结果，得出正确的鉴定结论。实验原理肠杆菌科细菌，尤其是埃希菌属，志贺菌属和沙门菌属的细菌，形态与染色性基本相同（都是G-短杆菌），在非选择性平板上的培养特征也难以区别。因此，鉴别它们时必须依靠生化反应特性、抗原特性与致病特性等鉴定实验。

实验方法一配制培养基二EMB平板划线分离培养三EMB表面确定可疑菌落四双糖铁琼脂斜面培养基和半固体培养基纯培养（一）生化反应鉴定（葡萄糖，乳糖，麦芽糖，甘露醇，蔗糖，吲哚，甲基红，Vp，枸橼酸盐）（二）血清学鉴定五药物敏感试验实验结果与讨论

（一）EMB平板划线紫黑色，有金属光泽单菌落可初步鉴定大肠埃希菌菌落，粉红色或无色透明的单菌落可初步定为志贺菌或沙门菌菌落。分析：产生酸性物质和伊红美蓝染料结合致使染料成紫黑色。（二）双糖铁斜面培养基

斜面与高层全部黄色（记为A/A），则此培养基接种大肠埃希菌，可利用葡萄糖和乳糖。分析：乳糖含量高，分解产生大量有机酸，不能很快挥发干净。

斜面红色而琼脂高层黄色（记为K/A），则此培养基接种的是志贺菌，可利用葡萄糖，不能利用乳糖。

分析：斜面葡萄糖含量少，只能产生少量有机酸，由于琼脂薄而极易挥发干净。

若在K/A中还出现黑色沉淀，则此培养基中接种的是沙门菌。

分析：因为沙门菌能利用葡萄糖产生H2S，与培养基中的Fe2+结合生成FeS黑色沉淀。

（三）半固体培养基（动力试验）

大肠埃希菌和沙门菌有沿接种针的插入位置向周围扩散的迹象，说明它们是有鞭毛，能运动，而志贺菌则只沿接种针插入位置生长，说明它无鞭毛，不能运动。

（四）生化反应鉴定

1.糖发酵实验

葡萄糖发酵：如右图，三种菌的培养基都由蓝变黄，所有杜氏小管都产生了气泡。分析：只有大肠杆菌能利用葡萄糖产气，另外两管可能混入大肠杆菌或产气杂菌。

（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）

乳糖发酵：如右图，大肠杆菌培养基颜色变黄，另两支依旧蓝色。另外，也只有大肠杆菌培养基中的杜氏小管产生气泡。分析：只有大肠杆菌能利用乳糖产酸产气，达到预期。

（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）

麦芽糖发酵：如右图，三只试管都由蓝变黄，并且都产生了气泡。分析：大肠杆菌利用麦芽糖产酸产气，沙门菌只产酸，志贺菌则是都不产。该现象可能是三种菌相互混杂或者受污染。

（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）

甘露醇发酵：如右图，三支试管也是由蓝变黄，都出现气泡。分析：三种菌均可利用甘露醇产酸，但其中只有大肠杆菌能利用它产气。另外两管出现气泡最有可能是混入大肠杆菌。

（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）

蔗糖发酵：如右图，三支试管都是蓝色，都产生了少量气泡。分析：三种菌都不可利用蔗糖产酸产气。因此少量气泡的出现可能是混入产气杂菌。

（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）2.吲哚试验如右图，蛋白胨水培养基培养过后加入吲哚试剂，发现大肠杆菌试管上层出现红色的游离带，其余两管上层则是黄色的游离带。分析:只有大肠杆菌可分解蛋白质中的色氨酸产生靛基质（吲哚）。达到预期。

（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）3.甲基红试验三支试管都变成了红色。分析：甲基红指示剂PH小于4.4红色。三种菌都可利用葡萄糖产酸降低PH到4.4以下。达到预期。

（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）4.伏一普试验（VP试验）三支试管保持原色，无一变红。分析：若生成红色化合物，反应阳性。三种菌均不可发生此类生化反应，反应阴性。

（从左到右依次是志贺菌，沙门菌，大肠杆菌）5.枸橼酸盐利用试验右图中，大肠杆菌培养基依旧绿