不同方剂对热解表的药效学研究

不同方剂对热解表的药效学研究

药物动力学研究包括药物动态成像和药代动力学研究，对了解药物作用和合理临床用药发挥着重要作用。测定药代动力学参数,一般以血药浓度或以尿或其他组织中药物浓度检测作手段,但对于有效成分不全清楚或混合成分的中药和中药复方则很难适用。近年来,有人提出了以药物累积法、微生物法、药理效应法等作手段,来探讨中药复方的药代动力学参数,取得了一定进展,但主要还是利用动物急性死亡率测定蓄积性的方法,在方法学上尚需作进一步探索。我们试图用退热的药理效应为指标,探讨了麻黄汤和银翘散等四个辛温和辛凉解表代表方剂的药物动力学参数,并就其方法学的有关问题作了讨论。实验动物及给药剂量及方法一、方剂与药物所用药材均用同一批购入的饮片,并经生药学鉴定。麻黄汤:麻黄10g(EphedrasinicaStapf.)、桂枝7g(CinnnamomumcassiaPresl.)、杏仁10g(PrunusarmeniacaL.),炙甘草4g(GlycyrrhizauralensisFisch.)。桂枝汤:桂枝10g、芍药10g(PaeonialactifloraPall.)、炙甘草7g、生姜10g(ZingiberofficinaleRosc.)、大枣10g(ZizyphusjujubaMillvar.inermis(Bunge)Rehd.)。银翘散:金银花30g(LonicerajaponicaThunb.)、连翘30g(Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl)、桔梗18g(Platycodongrandiflorum(Jacq.)DC).、薄荷18gCMenthahaplocalyxBriq.)、竹叶12g(LophatherumgracileBrongn.)生甘草15g、淡豆豉12g(Glycinemax(L.)Merr.)、荆芥穗15g(SchizonepetatenuifoliaBriq)、牛蒡子18g(ArceiumLappaL.)。桑菊饮:杏仁7g、连翘5g、薄荷3g、桑叶8g(MornsalbaL.)、菊花3g(ChrysanthemummorifoliumRamat.)、桔梗7g、生甘草3g、芦根7g(Phragmitescommunis(L.)Trim.)。药材混合。加10倍量水浸泡1小时后煮沸半小时,共两次,过滤,均浓缩成每ml为2g生药,冰箱储存,按动物和人公斤体重比例换算出它们的相当于人的临床等效剂量,依次是3.5g/kg、5g/kg、9g/kg和5g/kg,作为测定时间一效应曲线的灌胃给药剂量。二、致热用新鲜酵母购自北京食品厂,贮于4℃,贮存使用期不超过5天。致热前以灭菌生理盐水配制成20%溶液,皮下注射大白鼠背部,1ml/100g体重,以上海医用仪表厂生产的715型半导体温度计测定肛温。三、动物本院动物室饲养的Wistar大鼠,体重120±20g:雄性,每个剂量组或时间点各为10只。四、方法按孙瑞元等所述,步骤如下:1.绘制剂量一效应曲线:在酵母致热动物的同时,口饲给予相当于4、2、1、1/2及1/4倍临床等效剂量的麻黄汤等,每隔1小时测肛温一次,求得发热峰值时作为效应测定点,以发热抑制率对数剂量[(对照组的平均升温值一给药组的平均升温值)/对照组的平均升温值×100%]得出剂量一效应方程。或在发热峰值前1小时给药,得出另一剂量一效应方程。2.绘制时间一效应曲线:在致热前不同间隔时间或在发热峰值时的效应测定点前不同时间间隔,分别给予相当于临床等效剂量的各汤,以时间和对数发热抑制率,求出时间一效应消除方程。3.绘制时间一体存生物相当药量曲线:在时一效实验中,将各测定时间的发热抑制率代入量一效方程,求出相应的剂量值,作为体存的生物相对药量,得出时间一相当药量消除方程。4.通过下列公式,计算药物动力学等参数一室模型,以残数法,通过时间一相当药量方程式的斜率b,求消除速率常数k=-2.303b,效量半衰期t1/2(ED)=0.693/k;产生可测药理作用的最小给药剂量X*min=log-1A/b,(A,b分别为量效方程中的截距和斜率),作用期td=2.303/klogX。-2.303/klogx*min(K为时一效消除方程的斜率b.(-2.303))。结果一、单次给药剂量各方实验表明,鲜酵母致热大白鼠后6小时,为发热的峰时。在致热的同时,一次口饲给予各方后6小时测定,得量一效方程(表1图1)。从产生可测解热作用的最低给药剂量分析,解热作用强度依次为麻黄汤>桂枝汤>银翘散>桑菊饮。如以相当于临床等效剂量时的解热作用强度来看,依次为麻黄汤>桑菊饮>银翘散>桂枝汤。二、成岩制率的拟合于鲜酵母致热前不同时间间隔给药,于发热峰时测发热抑制率,化成自然对数,得时一效方程(表2)。从时一效方程中求得的作用期和效应半衰期来看,以麻黄汤的作用时间最短,桑菊饮作用时间最长,银翘散和桂枝汤介于其间。三、算法:时间一体存量通过量效方程,将时一效实验中各时间点的体温升高抑制率换算成药物在体内的生物相当剂量(以下简称体存量),绘制成时间一体存量曲线。从曲线的图形分析,所试四方均属一室模型特性。表3列出了它们的消除相方程,消除速率常数(K)和表观效量半衰期(t1/2ED)。从表中可知,四方中体内消除最快的为麻黄汤,依次为银翘散、桂枝汤,最慢的为桑菊饮,即使是半衰期最长的桑菊饮,仍属短半衰期的药剂。四、发酵剂的热效应1.致热同时一次给药,不同时间间隔连续测定体温升高抑制率:在鲜酵母致热的同时,一次给动物口饲相当于临床等效剂量的药剂,以后每隔1小时测体温一次,连续10～12小时。通过发热峰值时的量一效、时一效方程和时一量曲线的绘制和计算,它们的体内生物相当药量的消除参数列于表4。结果表明,它们的参数与表3数据大体一致。2.致热后不同时间给药,发热峰值时测定体温升高抑制率:先以发热峰值前1小时口饲给药,测得了银翘散和桑菊饮的对数剂量和发热抑制率的量一效方程,继而于致热后不同时间间隔口饲给予相当于临床等效剂量的银翘散或桑菊饮,通过量一效、时一效的换算,得到了有吸收相、消除相的一室模型特征的时间一体内生物相当药量的曲线,它们的有关参数列于表5。3.在时一效实验中,给药剂量不同对药物动力学参数的影响:在致热同时一次给予不同剂量的银翘散,以后每隔1小时测体温,得所用不同剂量的量一效曲线,求消除半衰期(表6),从表中可以看出,所用剂量小,消除半衰期长,剂量大,消除半衰期短。4.发热过程中不同时间作药效判定点对药动学参数的影响:鲜酵母致热大鼠,其体温曲线大体为:在致热后2小时内,先有体温下降,后逐渐上升,第3小时才有体温明显升高,一般在第6小时达高峰,持续10小时以上。以相当于临床等效剂量的麻黄汤于酵母致热前不同时间一次口饲给药,在致热后的不同时间点测发热抑制率,作时一效和时一量曲线,结果如表7所示,在不同药效判定点所获消除半衰期数值有一定波动。在致热后4小时内似乎波动较大,在发热峰值时前后,数值较为接近。受给药剂量的影响中药复方内含组分复杂,具有多种活性成分尚未确知,很难用常规的血药浓度法测定药代动力学参数。八十年代初,赫梅生等提出用体内毒性累积法求药动学参数以来,已有10余种复方作了测定。然而此法主要以毒性为指标,反映的是有毒成分的药动学参数,不一定与药效平行,且用药剂量显著大于临床实际用量,也会干扰药动学参数的测定。应用药理效应法,可能是较为可取的途径,但研究报道尚少。我们以解热作用为指标,在大鼠中测定了麻黄汤等四个解表代表方剂口饲后的药动学参数,它们基本上是一室模型特征,半衰期在1.1～2.2小时之间,均属短半衰期药剂,作用期在6～12小时之间,口服后的药峰时间在2小时以内,说明所试方剂具有吸收快、起效快、排泄迅速、作用维持时间短等特点,符合解表剂的应用特征。按传统理论,辛温解表的麻黄汤解表发汗力强于桂枝汤;辛凉解表的银翘散解表清热作用强于桑菊饮。从我们测定的最低起效剂量看,麻黄汤小于桂枝汤,银翘散小于桑菊饮,似亦相一致。从清除半衰期和作用维持时间看,麻黄汤、银翘散分别较桂枝汤、桑菊饮为短,提示它们的作用强而短促。从理论上说,用血药浓度测定药代动力学参数不受给药剂量、途径等影响。以药效法测定药动学参数,可否受方法学等影响呢?我们就鲜酵母致热大鼠为模型,探讨了不同效应测定点的不同给药剂量,从给药到效应测定点不同的间距对主要药动学参数半衰期的影响,发现:(1)致热前不同时间给药、致热同时给药后连续观察,致热后不同时间给药从时效曲线计算时一量所得的t1/2(ED),虽各有波动,但数值仍较接近,提示给药到效应测定点的不同时间间距,对半衰期的影响不大。从节约、方便来说,