冰冻切片与石蜡切片的区别之欧阳与创编

欧阳与创编欧阳与创编2021.03.08欧阳与创编欧阳与创编2021.03.081.冰冻切片是免疫组织化学染更中最常用的—种切片方法。其最突凹的优点是能够较完好地保存多种抗原的免疫活牲、尤其是细腿表面抗原更应采用冰冻切片。新鲜的组织及己冰冻切片。新鲜的组织及己定的组织均可年冰冻切片。时间：2021.03.时间：2021.03.08创作：欧阳与冰冻时，组织中水份莎形庆冰晶，注注影响抗原定伍。〜般.认为那晶少而大时，影响较小，冰晶小而多时，对组织结构损窖较大，在舍水量较多的组织中上连现象更易发圭。冰晶的大小坊具主長速率庆正兀，而坊庆核率C形庆速率丿庆反比，即冰晶形庆的数量愈多则愈小，对组织结构影响愈严重。因此，应尽量降低冰晶的数量。Fish认为冰冻开跆时,冰晶廉核率较慢,叹后逐渐增加，其焙界温度为・33。C,从・30。C降至-43。CM间，庆核率龜剧增加迄1018,然启再疚慢。基于上连理论可采取叹下措祂疯少冰晶的形庆。(\)速冻,废组织温度骤降，缩短从-33。C43OC的时间，濒少冰晶的彤庆。其方法有二：千冰■丙酮C酒精丿法：将150・200ml丙酮C洒精丿装入小保温杯內，逐渐加入千冰，直至危和呈粘稠状，再加干冰不再昌泡时，温度可迄・70°CC,用〜小饶杯C50-100mlJ內装异氏烷约50ml,再将烧杯缓慢置入干冰丙酮C纯酒精丿7包和液内，至舁氏烷温度迄・70°C时即刁T更用。将组织C大小为lcmx0.8cmx0.5cmJ投入舁氐烷內速冻30-60s后取曲，跌置怛冷箱內叹备切岸，茨置・80°C低温冰箱內贮存。液氮法：将组织块平教于钦塑瓶葢茨特制小盒內C直在约2cm力如组织块小可适量加OCT包埋剂浸坎组织，然后将特制小盒缓缓平放入蟻有液氮的小杯內，为盒底郃接触液氮时即开绐乞丫匕沸腾，此时小盒保荷原伍切乡浸入液氮中，大约10-20S组织即迅速冰结庆块。取凹组织冰块云即置入・80°C冰箱贮存备用，跌置入幔冷箱切岸机冰冻切片。(2)将组织置于20%-30%蔗糖溶液1〜3天，利用高滲吸收组织中水分，濒少组织含水量。影响冰冻切岸的因素较多，因此，技木难度较大，逹撵好的冰冻切岸机是保证切片质量的关键。目前冰冻切片机有两类：惶慢冰冻切片机fCryastatJ：为较理想的冰冻切片机，娶号眼多，便其基茶结构是将切片机置于-30°CC低温密闭室內，欽切岸时不受外界温度和环境彩响，可连续切薄岸至2-4|.im,S：全能满足免疫组织T匕学标记要未。切岸时,低温室內温度叹・15°C〜18°C为宜，温度辽低组织易陂碎,筑卷板的區置及角度要适当，载玻岸附贴组织切岸，切乡上下移动。开放玩冰冻切片机：包括半寻体致冷切岸机和甲醇致冷切岸叹及奎武:的CO2、氟乙燒等冷冻切岸机。切岸时暴露空乞中，温度不易控制，切片技木难度大，在高温季节，切岸更加困难，且切片厚8〜15|im,不易连续切岸，便具优点是价廉，国內有圭产。冰冻切片后如不染更，义须吹干，贮存低温冰箱內，更迸行短暂预固定后贮存冰箱保存。2.JE蜡切片其忧点是组织结构保存良好，在病理和回顾惟研兖中有较大的实用价值，能切连续薄岸，组织结构清晰，玩原定辰准确。用于免疫组Y匕技术的;E蜡切片制备与常规制岸略有不同：①脫水.透明尋近程应在4°C。C下迸行，叹尽量濒少组织玩原的损失。②组织块大小应阻于2cmxl.5cmx0.2cm,茨组织充分脫水、透明.浸蜡。③浸蜡、包埋过程中，方蜡应保持在60°C叹下，叹溶庶低的钦蜡最好C即低温JB虫昔包埋儿组织块脫水、透明.浸蜡时间寥考表1-3：表1-3组织块处理时间表70%乙醇4°C3〜4h80%乙醇4°C3〜4h90%乙醇4°C2〜3h95%乙醇I4°C2〜3h95%乙醇II4°C1〜2h100%乙醇I4°C1.5h100%乙醇II4°C1.5h二甲苯I4°C0.5〜lh二甲苯II4°C0.51〜lh蜡I60°Clh；5蜡II60°C2h叹上全过程为18・24h,也刁在室溫內便用自动脫水机代替。如组织块小，直在小于0.5cm,可用快連；5蜡包埋切片，全辺程只霜4h左右。7E蜡切片为常观制岸技术，切片机多为轮转天，切岸厚度2〜7pm,应用范围广，不影响筑体的穿透性，染更均勻〜玫。田于甲醛固定.有机熔剂和包埋剂对组抗原有〜定的损害及遮蔽，便抗原持证发主改变。有人扳告经蛋白酶消丫匕，可叹改善死镜免疫组T匕染匡强度，常用的有胰蛋白酶、链莓蚕白豳及胃妥白酶等消丫匕法。7E蜡切岸应入37°C惶温箱过夜，这样烤岸可痢少染更中脫岸现象。切岸如需矣期贮存，可存荻于4°C冰箱內备用。方蜡切岸忧点较多，但在制岸过程中要经过酒精、二甲苯茅有机溶剂处理，组织內筑原话性失去较多，有人采用冷冻干燥包埋法（FreezedryingembeddingmethedJ,可叹保存组纭丙可溶性杨质，防止蚕白变性和酶的失活，从而濒少了抗原的丟失。该法是将新鲜组织低温速冻，利用冷冻