医学实验室校准与比对(浦春)

医学实验室校准与比对

皖南医学院弋矶山医院浦春

philipcpu@163.com卫生部规定卫生部《医疗机构临床实验室管理办法》第三章医疗机构临床实验室质量管理第二十四条医疗机构临床实验室应当保证检测系统的完整性和有效性，对需要校准的检验仪器、检验项目和对临床检验结果有影响的辅助设备定期进行校准。安徽省等级医院评审标准中相关条例二级医院评审标准三级医院评审标准ISO15189

5.3实验室设备

注：适用时，在本准则中实验室设备指仪器设备、参考物质、消耗品、试剂和分析系统。5.3.4应保持影响检验性能的每件设备的记录，至少应包括：h)项中提到的性能记录应包括所有校准和/或验证报告/证明的复件，内容包括日期、时间、结果、调整、可接受标准以及下次校准和/或验证的日期，在两次维护/校准之间的核查频次.5.6检验程序的质量保证5.6.2适用且可能时，实验室应确定检验结果的不确定度。5.6.3应设计并实施测量系统校准和正确度验证计划，a)参加适当的实验室比对计划CLIA’884、化验结果的比较如果实验室对某一项目的测定采用两种相似的方法，则所在组室的负责人必须每年两次对有关的化验结果进行比较工作，步骤如下：一、选择适当数量的标本二、确定可接受的标准三、进行两种方法测定结果的比较，如达不到标

准，要有解决措施四、记录全过程，并保存两年

校准比对一.几个基本概念

1.溯源2.标准品3.检测系统4.不确定度5.校准和校准确认1.溯源溯源（traceability）:通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准（通常是与国家标准或国际标准）联系起来的特性。［VIM：1993，定义6.10］溯源目的对病人的标本进行检验并报告可靠的结果。医学检验的传统：对收集的患者标本只做一次检验，就发出报告。因此，发出报告的可靠性必须体现两个基本要求:精密度：重复性好；准确度：和参考方法具有可比性。溯源性临床检验始终以分析过程准确度度量结果的准确度。分析过程准确度：检测均值和作为真值的可接受值间的一致性。度量分析过程准确度的方法称方法学比较。溯源性在方法学比较中，“真值”即是参考方法对患者标本的检测结果。因此，常用检测系统对患者标本的检测结果，在计量单位相同的前提下，若能使结果的量值和参考方法的结果量值一致，说明结果准确。所以在溯源性和标准化中，传递结果可靠性的最重要方法为方法学比较。实现溯源性的必备条件

1．建立“公司一级参考品”，由公司选择国际上知名的参考实验室委托定值。2.设立公司内部使用的“一级校准品”。3.需要建立公司生产用的商品应用校准品（WorkingCalibrator），日常供应的校准品为商品校准品（BusinessCalibrator）。2.校准品1．衡量一个检测系统（检验方法）的基本分析性能有4点：不精密度、不准确度、病人结果可报告范围、分析灵敏度。校准品2．标准品传统的临床检验，要使检验结果可靠或有依据，往往有一个标准品(Standard)。校准品3．校准品和定值为了克服因纯标准液和病人样品间的基体差异，对检验结果的严重误差，20年前开始引用具有与病人样品基体相似的校准品替代标准品，用于日常工作。校准品使用了自动化分析仪，日常检验的精密度得到了显著的提高；在优良试剂盒的配合下，病人结果的可报告范围也可以满足临床要求；大多常规检验项目没有对极低浓度的临床要求。这样，结果的可靠性的关键是准确度。因此，实现新鲜病人标本结果的溯源性，成为使校准品值实现溯源性。常规临床化学测定的

校准品定值过程SI制单位定义一级校准品二级校准品生产应用校准品

产品校准品

常规样品二级参考检测方法一级参考检测方法厂商选择的检测方法厂商常备的检测方法

用户常规的检测方法结果不确定度理解校准品可是，尽管校准品的主要来源是人的血清，为了使校准品内的一些分析物水平达到某个程度，而且形成稳定的产品，所有的校准品、控制品、室间调查品等都是处理过的血清。和原来的天然血清间又产生了新的基体差异。理解校准品使用校准品的目的，是使检测系统对病人标本检测结果，实现溯源性。校准品定值在系列标准化内容中，是一个最突出的课题。实现病人结果的溯源性，必须在校准品定值过程中，自始至终使用病人新鲜标本。坚持使用方法学比较实验，验证结果的可靠性。理解校准品新鲜病人标本是最佳校准品须明确的，所有用于检验中的检测方法、仪器、试剂等都是用来检测病人新鲜标本的，不是用来检测校准品这样的处理过样品。标准化1972年，由ISO出版T．R．B．Sanders主编的《标准化的目的与原理》一书对标准化下的定义是：“在所有有关方面的协作下，进行有秩序的特定活动所制定并实施各项规则的过程。”

标准品是标准化必备条件和临床检验的实践和需求结合起来，可以简单理解为：为了实现临床检验结果的溯源性，检测系统的生产厂商的所有努力，进行有秩序的特定活动所制定并实施各项规则的过程为标准化。

理解校准品如果先用公认的参考方法检测病人标本，再以具有参考值的病人标本去校准某检测系列（包括方法、试剂、仪器），此时该检测系列再检测其他新鲜病人标本时，被检测的病人标本结果的溯源性可上溯至公认的参考方法。也即用新鲜病人标本是校准检测系列的最佳校准品。由于新鲜病人标本的局限性，加工的稳定血清将成为商品化的校准品材料。

标准化的各要素校准品试剂分析仪检测系统的要素3.检测系统完成一个检验项目检测所涉及的仪器、试剂、校准品、操作程序、质量控制、保养计划等的组合，称为检测系统。若是手工操作，还必须包括具体的操作人员。检测系统仪器试剂校准品检测方法的分类检测方法分类大致上可以分为三类：确认方法（Definitivemethod）；参考方法（Referencemethod）；常规方法（Routinemethod）。参考方法示例总胆固醇测定确认方法为同位素稀释质谱（ID-MS）法；参考方法为硫磷铁法（皂化-抽提-浓硫酸、磷酸显色）；常规方法为酶法（胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、Trinder显色终点法）。美国NIST建立的标准参考品有：纯胆固醇SRM911；冻干人血清SRM909。常用的参考品代码1．CRM＝欧洲共同体认可的参考品，2．SRM＝美国的标准参考品3．ID-MS＝同位素稀释－质谱分析4．CDC=疾病控制中心5．NIBSC＝英国的国家生物标准和控制研究院通过方法学比较确定定值仪器校验公司组合的检测系统和初步校准品定值（·）方法学比较标准化过程信号Ctar为具有参考值血清在公司组合的检测系统上的检测结果。Cref为参考血清的参考值。校准品的溯源性依据（示例）火焰光度法

K〔钾（ISE）〕

SRM927ProteinTotal〔总蛋白〕

一级标准（称量法）

Lactate〔乳酸〕

WHO，SP1-01Apo-A1〔载脂蛋白A1〕

ID-MSAbellKendallCHOL〔胆固醇〕

电量滴定法Cl〔氯（ISE）〕

Doumas方法TBIL〔总胆红素〕

IFCC1983

手工方法

ALP〔碱性磷酸酶〕

CRM470Alb〔白蛋白（BCP）〕

参考方法或参考品项目（分析物）检测系统性能基本内容六大性能：不精密度（总不精密度）不准确度（方法学比较结果）病人结果可报告范围分析灵敏度（检测限）分析特异性参考范围4.不确定度不确定度(uncertaintyofameasurement)：表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数。

1999年:我国发布《测量不确定度评定与表示》在国家标准GB/T15481-2000中，5.4.6明确规定：“校准实验室应具有并应用评定测量不确定度的程序。”不确定度可较好表明基准、校准的水平，产生测量不确定度的原因1.测量过程中随机效应及系统效应均会导致测量不确定度，数据处理中的修约也会导致不确定度。2.测量结果的不确定度反映了对被测量之值的认识不足，借助于已查明的系统效应对观测结果进行修正后，所得到的只是被测量的估计值，而修正值的不确定度以及随机效应导致的不确定度依然存在。测量不确定度应用批内变异【CV(w)】批间变异【CV（b）】偏倚变异【CV(bias)】不确定度【CV(syst)】其他原因的不确定【CV(oth)】

U=（√CV(w)2+CV（b）2+CV(syst)2+CV(oth)2

）×25.校准和校准确认

校准:是检测和调整仪器或检测系统读数的过程,以建立检测分析物的仪器测量和分析物的实际浓度间的关系.

校准确认:是对已知浓度的材料,和患者标本一样的方式作检测,用于确保检测系统在可报告范围内能准确地检测患者样品.--择自C