食品快速检测方法-微生物快速检测技术

食品中有害微生物的快速检测概述食品中微生物检验流程图常规的食品中有害微生物检验方法：形态检查生理生化试验血清学试验弊端费时费力，效率低食品中有害微生物的快速检测方法二食品中有害微生物的快速检测意义一食品中有害微生物的快速检测意义2.社会发展需要快速检测食品开发、生产、销售的迅速发展食品卫生安全越来越受到大家的重视概述食品中有害微生物的快速检测意义2.常规的检验方法存在弊端培养分离：耗时、费力例如：菌落总数测定所采用的平板计数法至少需要２４ｈ才能获得结果。致病菌的检测耗时则更长，包括前增菌、选择性增菌、镜检以及血清学验证等一系列的检测程序需要５～７ｄ。概述食品中有害微生物的快速检测意义概述快速检测，势在必行！食品中有害微生物的快速检测方法从技术层面主要有：传统计数改良方法免疫学方法分子生物学方法概述食品中有害微生物的快速检测方法传统计数改良方法螺旋平板计数法、滤膜法、纸片法和其他方法概述螺旋平板接种仪自动菌落计数器纸片法即用胶滤膜法改良MPN产品食品中有害微生物的快速检测方法免疫学方法酶联免疫吸附技术、免疫胶体金技术、免疫磁珠分离技术和乳胶凝集法概述Mihi-Vidas全自动免疫分析仪沙门氏菌胶体金检测条食品中有害微生物的快速检测方法分子生物学方法基因探针法PCR方法概述ZYD-S1恒温荧光分子检测仪小结食品中有害微生物的快速检测意义一食品中有害微生物的快速检测方法二食品中有害微生物的快速检测内容致病菌检验二常规指示菌检验一常规指示菌检验内容常规指示菌菌落总数大肠菌群霉菌和酵母常规指示菌检验内容菌落总数1.概念：指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1mL检样中形成的细菌菌落总数。以 CFU/g（mL）来表示。2.意义：作为判别食品被污染程度的标志。观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。常规指示菌检验内容大肠菌群1.概念：指一群在37℃、24h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。2.意义：反映了食品是否受粪便污染，同时间接指出食品是否受肠道致病菌污染的可能性。常规指示菌检验内容霉菌和酵母1.概念：属于真菌，既可制造食品，也可污染食品。2.意义：以霉菌和酵母菌数判断食品污染程度。致病菌检验内容1.概念：致病菌指能够引起人们发病的细菌。2.意义：致病菌是可以引起食物中毒，产生食品安全问题的重要原因，也是评价食品卫生质量及其重要的指标。3.种类：种类繁多，食品中常见致病菌验主要有沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等。致病菌检验内容4.限量：

沙门氏菌在各类食品中的限量值均为0，也就是说，样品中不得检出这类病菌。

金黄色葡萄球菌在各类食品中的限量值均为100CFU/g小结常规指示菌检验一致病菌检验二内容菌落总数测定（ATP生物荧光法）

—结构和原理使用原理二结构特点一ATP荧光检测仪结构特点测定样品中微生物污染程度的快速检测设备。在检测过程中使用该仪器配套使用的ATP拭子，可以快速检测食品、饮料、餐饮业生产环境中的细菌，10秒检测一个样本。ATP荧光检测仪结构特点该仪器体积小，可以单手手持操作。内置锂电池，可连续使用10小时。ATP荧光检测仪结构特点ATP荧光仪由两部分组组成：液晶显示屏和功能按键。ATP荧光检测仪结构特点拭子插口：容纳ATP采样拭子数据接口：通过数据线可将数据传输到电脑上ATP荧光拭子结构特点使用原理结构和原理

细胞数量微生物ATP光（RLU）荧光素酶O2+Mg2+氧化荧光素PPi+AMP荧光光度计测量D-虫荧光素小结结构特点一使用原理二

结构和原理菌落总数测定（测试片法）检测原理二测试片的结构一操作步骤三结果判读四测纸片的结构菌落总数测定（测试片法）检测原理菌落总数测定（测试片法）利用了特异性酶与特异性显色底物反应的原理。TTC为显色物质。操作步骤菌落总数测定（测试片法）1.样品处理操作步骤菌落总数测定（测试片法）2.接种操作步骤菌落总数测定（测试片法）3.培养透明膜朝上叠放在一起，水平放置于培养箱内，36℃下培养48±2小时。结果判定菌落总数测定（测试片法）计数范围：30—300。10-3的测试片：138和136，平均值为137。菌落计算：137×1000=137000结果报告：140000CFU/g注意事项菌落总数测定（测试片法）1.测试片的保存与使用保存：未开封，2-15℃；开封，密封2-8℃。使用：10-3的测试片：138和136，平均值为137。菌落计算：137×1000=137000结果报告：140000CFU/g小结检测原理二测试片的结构一操作步骤三结果判读四菌落总数测定（测试片法）菌落总数测定（ATP生物荧光法）

—使用注意事项三取样检测二检测前准备一检测前准备使用将ATP荧光拭子从冰箱取出，放置10-20分钟左右，使其恢复到室温。打开仪器的开关按键，开机，仪器自动校正。按set键进行相关参数设定，主要是设定此次的检测限值：下限为30，上限为50；然后设定检测时间。取样检验使用取样检验使用1球管吸阀棉拭棒棉拭子检测管涂抹拭抹表面以获取标本,如需获得清洗水溶液标本，则将棉拭子浸入水中3到4秒钟。取样检验使用折断和挤压将拭子插入检测管，用拇指和中指捏住球管，从吸阀处折断；轻挤球管两次，挤出球管内液体。取样检验使用插入和检测将检测管放入ATP荧光检测仪中，盖上盖子，倒计时开始并检测。注意事项使用使用：拭子棉签不要触摸人和非检物，以免影响检测结果；拭子内试剂与样本反应后，需尽快放入配套ATP仪器实验舱，并于60秒内完成检测。储藏：ATP荧光拭子需保存在2-8℃，保存期限为2个月；注意避光保存，放于铝膜袋中，密封保存。超过保质期的试剂勿使用。小结使用注意事项三取样检测二检测前准备一大肠菌群的快速测定操作步骤二检测原理一结果判定三检测原理大肠菌群的快速测定大肠菌群中的特异性酶降解显色底物，打破底物原有结构，释放出显色因子，从而使大肠菌群显示为蓝绿色菌落，然后进行计数。操作步骤大肠菌群的快速测定1.样品处理操作步骤大肠菌群的快速测定2.接种操作步骤大肠菌群的快速测定3.培养透明膜朝上叠放在一起，水平放置于培养箱内，36℃下培养24小时。结果判定大肠菌群的快速测定大肠菌群菌落：蓝绿色。选择菌落数在15—150的测试纸片进行计数。1.结果判读结果判定大肠菌群的快速测定2.结果计算与报告计数范围：15—150。10-1的测试片：6和4，平均值为5。菌落计算：5×10=50结果报告：50CFU/mL小结操作步骤二大肠菌群快速测定检测原理一结果判定三霉菌和酵母菌的快速测定操作步骤二检测原理一结果判定三检测原理霉菌和酵母菌的快速测定利用了特异性酶与特异性显色底物反应的原理，使目标菌与非目标菌呈现可明显区别的不同特异性颜色，从而使酵母菌、霉菌的菌落为蓝绿色或蓝紫色，然后分别进行酵母菌、霉菌计数。操作步骤1.样品处理霉菌和酵母菌的快速测定操作步骤2.接种霉菌和酵母菌的快速测定操作步骤3.培养透明膜朝上叠放在一起，水平放置于培养箱内，26℃下培养48小时。霉菌和酵母菌的快速测定结果判定霉菌的菌落：红色。1.结果判读霉菌和酵母菌的快速测定结果判定2.结果计算与报告霉菌和酵母菌的快速测定计数范围：10—150。10-3的测试片：88和90，平均值为89。菌落计算：89×1000=89000结果报告：89000CFU/mL或8.9×04CFU/mL。小结操作步骤二检测原理一结果判定三霉菌和酵母菌的快速测定金黄色葡萄球菌的快速测定

（测试片法）金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌的快速测定（测试片法）操作步骤二检测原理一结果判读三结果报告四检测原理金黄色葡萄球菌的快速测定（测试片法）金黄色葡萄球菌测试片适用于各类生、熟食制品，饮料，糕点类，调味品，奶制品等金黄色葡萄球菌的检测。检测原理金黄色葡萄球菌的快速测定（测试片法）执行标准：食品安全国家标准食品微生物检验金黄色葡萄球菌检验（GB4789.10）。检测原理金黄色葡萄球菌的快速测定（测试片法）金黄色葡萄球菌测试片含有选择性培养基和专一性的酶显色剂，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品，一步培养15～24h就可确认是否有病原菌的存在，大大地简化了检测程序。操作步骤1.样品处理金黄色葡萄球菌的快速测定（测试片法）操作步骤2.接种金黄色葡萄球菌菌的快速测定（测试片法）操作步骤3.培养透明膜朝上叠放在一起，水平放置于培养箱内，36℃下培养15—24小时。金黄色葡萄球菌的快速测定（测试片法）结果判读金黄色葡萄球菌菌落：紫红色。其他菌群菌落：蓝色。金黄色葡萄球菌的快速测定（测试片法）结果报告金黄色葡萄球菌的快速测定（测试片法）计数范围：20—200。10-1的测试片：162和160，平均值为161。菌落计算：161×10=1610结果报告：1600CFU/g或1.6×103CFU/g。小结操作步骤二检测原理一结果判读三金黄色葡萄球菌的快速测定（测试片法）结果报告四金黄色葡萄球菌的快速测定

（显色培养基法）金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌的快速测定（显色培养基法）金黄色葡萄球菌检测方法（国标法）金黄色葡萄球菌的快速测定（显色培养基法）操作步骤二检测原理一结果判定三检测原理金黄色葡萄球菌的快速测定（显色培养基法）蛋白胨、大豆胨和酵母膏粉提供氮源和微量元素；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；显色剂与金黄色葡萄球菌具有的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在无色透明平板上，金黄色葡萄球菌产生紫红色、红色或粉红色菌落，滴加盐酸后菌落周围产生透明圈。操作步骤金黄色葡萄球菌的快速测定（显色培养基法）第一步：称取8.45g显色培养基干粉于盛有100毫升蒸馏水的锥形瓶中加热煮沸灭菌，然后将该锥形瓶放在水浴锅中冷却至50℃。第二步：将冷却至50℃的显色培养基倒入几个灭菌培养皿中，冷却凝固后备用。操作步骤金黄色葡萄球菌的快速测定（显色培养基法）操作步骤

1.样品处理：首先在无菌室中称取25g奶粉，置于盛有225毫升7.5%氯化钠肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打一到两分钟。2.增菌：将上述样品匀液于36℃培养18至24小时。3.接种：将增菌液划线接种于金葡显色培养基平板中。4.培养：36℃培养18至24小时。金黄色葡萄球菌的快速测定（显色培养基法）结果判定金黄色葡萄球菌菌的快速测定（显色培养基法）菌落为无色菌落。根据说明书，说明待检奶粉样品中没有金黄色葡萄球菌。计数原则及报告方式金黄色葡萄球菌的快速测定（显色培养基法）选择菌落数在20～200个之间的纸片进行计数。结果如下：所有稀释度的测试片上的菌落数都小于20，则计数稀释度最低即1:10的测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告。小结操作步骤二检测原理一结果判定三金黄色葡萄球菌的快速测定（显色培养基法）沙门氏菌的快速测定（测试片法）操作步骤二检测原理一结果判定三注意事项四检测原理沙门氏菌的快速测定（测试片法）沙门氏菌测试片含有选择性培养基、沙门氏菌特有辛酯酶的显色指示剂和高分子吸水凝胶，运用微生物测试片专有技术，做成一次性快速检验产品，一步培养15～24h就可确认是否带有沙门氏菌。检测原理沙门氏菌的快速测定（测试片法）执行标准：食品安全国家标准食品微生物检验沙门氏菌检验（GB4789.4）。操作步骤1.样品处理沙门氏菌的快速测定（测试片法）操作步骤2.接种沙门氏菌的快速测定（测试片法）操作步骤3.培养透明膜朝上叠放在一起，水平放置于培养箱内，36℃下培养15—24小时。沙门氏菌的快速测定（测试片法）结果判定沙门氏菌菌落：紫红色。其他菌群菌落：蓝色。沙门氏菌的快速测定（测试片法）结果报告：在25g奶粉样品中未检出沙门氏菌。判定标准：注意事项沙门氏菌的快速测定（测试片法）1.使用过的测试片上带有活菌，需及时按照生物安全废弃物处理原则进行处理。2.该测试片需存放在4℃～10℃冰箱中，保质期为一年，铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好，放到冰箱中，一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水，最好在拆封前将整包回温至室温。小结操作步骤二检测原理一结果判定三沙门氏菌的快速测定（测试片法）注意事项四沙门氏菌的快速测定（测试片法）沙门氏菌的快速测定（胶体金速测卡法）沙门氏菌纯培养的光镜下形态（革兰染色阴性）沙门氏菌沙门氏菌的快速测定（胶体金速测卡法）成熟度不够普及率不高检测设备价格昂贵沙门氏菌的快检方法荧光免疫技术ELISAPCR不足之处胶体金速测卡的原理二胶体金速测卡的结构一胶体金速测卡的使用三注意事项四胶体金速测卡的结构沙门氏菌的快速测定（胶体金速测卡法）外部结构内部结构胶体金速测卡的原理沙门氏菌的快速测定（胶体金速测卡法）免疫层析技术胶体金速测卡的原理双抗体夹心法反应原理C阴性B阳性沙门氏菌的快速测定（胶体金速测卡法）沙门氏菌的