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文档简介

酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂准备将试剂盒及血清样本复温。标准品：1ml标准品稀释液(standarddiluent)重悬标准品(standard),轻微震荡10min,避免形成泡沫，此时，标准品液的浓度为0pg/ml。B：6ml液的浓度为0pg/ml。B：6ml双蒸水将6ml2X分析稀释液A、B稀3.分析稀释液A、释至12ml，稀释后的工作液不能冻存。4.检测试剂A、B：点动离心检测试剂A、B,用分析稀释液A、B分别以1:100将检测试剂A、B稀释成工作浓度。5.洗液：用双蒸水将20ml30X洗液稀释成600ml。注意事项：不要在96孔板里面做梯度稀释实验。实验前15min制备标准品溶液，不要直接在37°C溶解试剂。小心重悬标准品和检测试剂A、B至沉淀完全溶解，避免形成气泡。重悬后的标准品、检测试剂A、B只能使用一次。如果洗液中有沉淀形成，复温至室温，至沉淀完全溶解。建议使用双蒸水来稀释试剂盒样本。实验过程：实验设计：7个标准品孔、1个空白孔。向96孔板的每个孔中加入100ul标准品及样本，贴上封板胶，37°C孵育2h。弃孔中液体，不要洗。每孔中加入100ul检测试剂A的工作液，贴上封板胶，37C孵育1h。弃孔中液体，350ul洗液清洗孔三次，每次1~2min。每孔中加入100ul检测试剂B的工作液，贴上封板胶，37C孵育30min。按照步骤4重复洗板5次。每孔中加入底物溶液90ul，贴上封板胶后，37C避光孵育15~25min（不超过30min），溶液颜色变蓝。每孔中加入50ul终止液，溶液颜色变黄，轻轻拍打板的边缘确保液体混匀。去除板底的液体，立即在酶标仪上450nm检测。注意事项：准备工作：使用合适数量的孔，其余孔于-20C保存。每一步加样时间不要超过10min，加样时轻轻混匀并避免形成泡沫。实验过程中保持孔湿润。

清洗过程中尽量去除所有的液体，尤其在清洗的最后一步。控制反应时间：加入TMB底物后每10min观察颜色变化，避免反应过度。TMB底物溶液容易污染，请避光保存。结果计算：对数作图，横轴为OD值的对数，纵轴为浓度的对数作规程：『ASSATPROCEDURESUMWIAFt¥1Add1DDpLstandardorsampletoeachwell.Incubate2hoursat37°C;Add1DOpLpreparedDetectionReagentA.Incubate1hourai37°C;Aspirateandwash3times;Add100pLpreparedDetectionReagentB.Incubate30minutesat37°CAspiratearidwash5time

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