人体组织解剖学生理实验

一、坐骨神经——腓肠肌标本制备目的要求：1、学习生理学实验基本的组织分离技术2、学习蛙类动物双毁髓的实验方法。3、学习蛙类坐骨神经-腓肠肌标本制备基本操作技术实验原理：

蛙类的某些基本生命活动和生理功能与哺乳动物有近似之处，若将其离体组织器官放在任氏液中，其兴奋性可以在室温下，于一段时间内保持不变，其实验条件较易控制，来源也较丰富。因此，在实验中常用坐骨神经-腓肠肌标本观察神经、肌肉的兴奋性、刺激以及反应的规律以及肌肉收缩的特点等。实验动物及器材：

牛蛙、蛙板、玻璃板、粗剪刀、手术剪、探针、玻璃分针、蛙钉、镊子、线、滴管、培养皿、Zn-Cu弓、任氏液实验步骤：1、双毁髓：枕骨大孔处，向前毁脑，向后毁脊髓。2、去皮和制作下肢标本：于腋窝下处横断脊柱，并将头及前肢连同所有内脏一起剪去,由断面将皮肤及肌肉分离，去皮。3、分离两后肢：用粗剪刀沿脊柱和耻骨联合的中线，将标本纵剖为两半。4、分离坐骨神经：用玻璃分针沿脊柱游离坐骨神经并向下分离，挑开背侧梨状肌，再循坐骨神经沟纵向暴露并分离坐骨神经，勿牵拉神经。5、游离腓肠肌：分离腓肠肌的跟腱，结扎跟腱，于结扎以下剪断，剪去小腿骨和其上肌肉，再剪去股部肌肉，留长约1~2cm的股骨。6、检验标本兴奋性：用蘸任氏液Zn-Cu弓的两端轻触及坐骨神经，若腓肠肌收缩，则此标本的兴奋性良好，说明标本制备成功。注意事项：1、不可将剥皮的标本与内脏等弃物放一起。2、剥皮的后肢不可用自来水冲洗。3、凡标本只能用玻璃分针。4、制备标本过程中随时用任氏液润湿标本。实验结果及分析：思考题：1、剥皮的后肢能用自来水冲洗吗？为什么？2、如何检查脊髓是否毁彻底？二、血红蛋白含量测定及血型的鉴定（一）血红蛋白含量的测定目的要求：掌握测定血红蛋白含量的基本方法——比色法实验原理：测定血红蛋白的方法很多，种沙里（sahli）比色法是其中一种。血红蛋白本身的色泽，常随所结合的氧量多少而改变，不便于比色。沙里比色法是用少许稀盐酸加入一定量血液中，酸不仅使红细胞膜破坏，而且使原来位于红细胞内亚铁血红素转变成高铁血红素，后者呈较稳定的棕色。将其用蒸馏水稀释后与血红蛋白测定计的标准色进行目测比色，即得每100ml血液所含的血红蛋白数或百分率。实验器材：血红蛋白计、采血针、蒸馏水、0.1MHCL、一次性20ul定量毛细取血管、滴管、玻璃棒、75%酒精棉球、乙醚实验方法与步骤：1、了解血红蛋白计的构造：

a、标准比色架

b、血红蛋白稀释管2、用蒸馏水将血红蛋白（Hb）稀释管洗净，干燥备用。

3、用滴管加0.1MHcl于血红蛋白稀释管内，到刻度“2%”或“10%”处。

4、采血：常规消毒指尖，用一次性刺血针刺破无名指尖。拭去第一滴血，待第二滴血流出一大滴时，用一次性毛细取血管吸血至刻度20ul（0.02ml即20mm3）处。

5、血液与盐酸完全反应：使Fe2+Fe3+(置10分钟)。6、透光比色7、加蒸馏水至颜色同标准色柱注意事项：1、吹血液入稀释管及洗净吸管时，应插入液面内，吹时不宜用力过猛，以免产生气泡。2、蒸馏水逐滴加，以免过量稀释，玻璃取出比色。3、一定要准确掌握进入稀释管内血液量（20ul）。不可将剥皮的标本与内脏等弃物放一起。实验结果及分析：附：我国成年人Hb正常值：男：120~160g/L或12~16g/100ml血液女：110~150g/L或11~15g/100ml血液新生儿含量可达20g/100ml以后减少，2~3个月最低，达9.5g.

思考题：1、测定Hb含量实际意义？Hb具有什么功能？

（二）血红蛋白含量的测定目的要求：1、学习鉴定血型的方法2、观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理实验原理：

血型是指红细胞的血型，是根据存在于红细胞膜外表面特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上特异性糖蛋白）来确定的，这种抗原或凝集原由遗传基因决定。血清中抗体或称凝集素，可与红细胞膜上不同的相应抗原结合，产生凝集反应，最后发溶血。由于这种现象，临床上在输血前必须进行鉴定血型，以确保安全输血。人类红细胞上已发现20多种血型系统。其中最常用最重要的是ABO血型系统，其次为Rh系统。本次实验介绍ABO血型鉴定。

实验器材：采血针、双凹玻片、记号管、75%酒精棉球、牙签、A型和B型标准血清、生理盐水、显微镜实验步骤：玻片法

1、先取双凹玻片，标好姓名、A、B，然后滴加抗A、抗B血清各一滴，取牙签一支，用其两头蘸血分别在A、B血清中搅拌，置0~15分钟后观察凝血现象。A抗BB抗A

姓氏第一字母结果：抗A凝集抗、B不凝集A型血因红细胞上有A抗原抗B凝集、抗A不凝集B型血因红细胞上有B抗原抗A、抗B凝集AB型血因红细胞上有A、B抗原抗A、抗B不凝集O型血因红细胞上无抗原注意事项：1、注意消毒，防止穿刺部位皮肤感染。2、肉眼看不清楚凝集现象时，应在低倍显微镜下观察。3、红细胞悬液和血清应新鲜，因污染可产生假凝集现象。思考题：1、已知某人为A型（或B型）血，在无标准血清情况下，可否对其他人进行ABO血型鉴定？如何进行？2、如何区别血液中凝集与凝固，其机理是否一样？参考：许多学者调查表明：中国人血型分别O型30.77%、A型27.07%、B型32.48%、AB型9.67%三坐骨神经腓肠肌标本制作、骨骼肌单收缩及收缩总和目的要求：1、观察不同刺激频率的阈上刺激引起肌肉收缩形式的改变2、观察骨骼肌收缩总和现象实验原理：蛙的坐骨神经—肌肉标本单收缩时程为0.11S，其中潜伏期、缩短期共占0.05S，舒张期占0.06S，若给标本相继两个最适刺激，使两次刺激间隔小于该肌肉收缩总时程时，则会出现一连续的收缩，称复合收缩（或收缩总和）。若两个Sti的时间间隔短于肌肉收缩总程，而长于肌肉收缩潜伏期和缩短期时程，使后一个刺激落于前一个Sti引起肌肉收缩的舒张期内，则出现一次收缩尚未完全舒张又引起一次收缩，

若两次Sti间隔短于肌肉收缩缩短期，使后一次Sti落在前一次刺引起收缩的缩短期内，则出现一次收缩正在进行接着又产生一次收缩，收缩的幅度高于单收缩幅度。根据这个原理，若给予标本一连串的最适Sti，则因Sti频率不同会得到一连串单Sti，不完全强直收缩或完全强直收缩的复合收缩。实验动物及器材：蛙的在体腓肠标本，常用手术器械、BL-420E+生物机能实验采集系统，张力换能器、双针形露丝Sti电极、支架、培养皿、滴管、任氏液、丝线实验步骤：1、双毁髓：枕骨大孔处，向前毁脑，向后毁脊髓。2、腓肠肌的分离：将蛙腹位平放蛙板上，固定四肢，剪开一侧下肢皮肤暴露腓肠肌，用玻钩分离，在跟健下穿一丝线并结扎，在远端剪断跟腱，用丝线将腓肠肌提取，将腓肠肌与胫骨分离，用任氏液经常湿润标本，以保持肌肉兴奋性。在股骨部，用蛙钉固定，标本制备完备

。3、仪器及标本连接：

将蛙板放于换能器下方，垂直提起腓肠肌上结扎线，连于换能器敏感染上，调节换能器高度，Sti电极固定于铁架台上与腓肠肌接触，应保持Sti电极与肌肉接触良好。4、Sti频度与反应关系实验现象：

1）将腓肠肌连在换能器上，其将机械能转化为电信号，该信号从BL—生理机能实验系统输入计算机，该系统的输出通过Sti电极对腓肠肌进行Sti，实验开始，从BL—NEWCentury软件菜单上选择刺激频度与反应关系实验项。

2）以波宽为1ms，从最小Sti强度开始逐渐增加刺激强度对肌肉进行Sti,找到刚刚引起肌肉最大收缩Sti强度，即为该标本的最适强度，整个实验过程中均固定在此Sti强度上。3）用单Sti作用于肌肉，可记录肌肉单收缩曲线。4）用双Sti作用于肌肉，使两次Sti间隔为0.06~0.08S，记录复合收缩曲线5）将刺激方式置于“连续”其余参数固定不变，用频度为1、6、10、15、20、30HZ的连续刺激作用于肌肉，可记录单收缩，不完全强直收缩和完全强直收缩曲线注意事项：1、经常给标本滴加任氏液，保持标本良好兴奋性。2、连续Sti时，每次Sti持续时间要保持一致，不得超过3~4S，每次刺激后休息30S，以免标本疲劳。3、可根据实验需要调整Sti频度。【可能出现的问题与解释】1、随着刺激频率增加，肌肉复合收缩的幅度不是逐渐升高而是下降。这是由于标本保护不当，肌肉受损伤或疲劳，或刺激频率过高造成的。２、单收缩曲线忽高忽低标本在任氏液浸泡时间不够,兴奋性不稳定;肌肉上液体堆积过多,造成短路使刺激强度不稳。

实验结果及分析：思考题：1、引起组织兴奋的刺激必须具备哪些条件？2、何谓阈下刺激、阈刺激、阈上刺激和最适刺激?在阈刺激和最适刺激之间为什么肌肉的收缩随刺激强度增加而增加?

实验过程中标本的阈值是否会改变?为什么?

实验二离体肠段运动的描记

实验目的：

通过观察各种因素对离体小肠平滑肌运动的影响，加深对平滑肌生理特性的了解。实验原理：

本实验将小肠平滑肌置于模拟内环境中，观察当模拟内环境因素发生变化时，离体小肠平滑肌运动的变化。

材料与设备：

兔、台氏液、1:10000肾上腺素、1mol·L-1HCl溶液、1mol·L-1NaOH。麦氏浴皿、多功能生理信息采集系统、手术器械、注射器、棉线、万能支架、螺旋夹、双凹夹、温度计、细塑料管、缝针、手术刀

方法与步骤：

1.实验的准备

A麦氏浴皿准备：向麦氏浴皿内加入台氏液至浴皿高度的2/3处。外部容器为水浴锅加自来水，恒温工作点定在38℃(图)。

B标本制备

动物致死；取肠段，清洗；肠段的固定；实验项目研究2.实验项目

A观察、记录38℃台氏液中的肠段节律性收缩曲线。

B观察、记录25℃台氏液中的肠段节律性收缩曲线。

C加1:10000肾上腺素1～2滴于中央标本槽中，观察肠段收缩曲线的改变。

D加1:10000乙酰胆碱1～2滴于中央标本槽中，观察肠段收缩曲线的改变。

E向中央标本槽内加入1mol·L-1HCl溶液1～2滴，观察肠段收缩曲线的改变。

结果与分析：

1.剪贴实验记录曲线，并做好标记、注释。

2.分析各种因素对小肠运动的影响，并简要说明机制。实验七家兔呼吸运动的调节一、实验目的

1、学习和掌握哺乳类的麻醉和解剖方法。

2、学习测定家兔呼吸运动的方法。

3、观察并分析影响呼吸运动的各种因素二、原理高等动物的呼吸运动受到神经系统、体液成分变化的调节，以适应代谢和环境的变化。肺牵张反射也参与呼吸运动的调节。三、试剂与器材

微机、生物信号处理系统、张力换能器、刺激输出线、保护电极、家兔、兔体手术台、圆头手术镊、手术剪、手术刀、止血钳、弯剪、气管插管、橡皮管（长1m以上，短10~20cm）、玻璃勾针、20mL注射器、50mL注射器、针头、20%氨基甲酸乙酯、棉花、棉线、5％乳酸。实验的基本程序麻醉－气管切开术－颈部神经分离术－连接实验装置－实验观察。四、实验内容讲解—观看多媒体示范—细节提醒（一）麻醉兔耳缘静脉注射：20%氨基甲酸乙酯（1）注射液剂量5ml/kg体重，实验用家兔<2kg，注射约10ml即可；抽吸麻醉液时先取下针头，多吸一部分；（2）进针—注射姿势调整选择耳缘静脉从远心端开始；左右耳针头扎进1/3至1/2，并用拇