临床免疫学实验：2单扩、对流免疫电泳_第1页
临床免疫学实验：2单扩、对流免疫电泳_第2页
临床免疫学实验：2单扩、对流免疫电泳_第3页
临床免疫学实验：2单扩、对流免疫电泳_第4页
临床免疫学实验：2单扩、对流免疫电泳_第5页
已阅读5页，还剩9页未读， 继续免费阅读

付费下载

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

原理：将一定量抗体混浇于琼脂内，制板、打孔、加样，置于孔中的定量抗原向四周扩散，与相应抗体,在比例合适的部位形成白色沉淀环。沉淀环的大小与抗原的浓度成正相关。技术要点：将抗体混入1.5%琼脂糖内（56℃），未凝固前倾注成平板，凝固后打孔（直径3～5mm），孔中加入抗原溶液和不同浓度的标准品，置湿盒内37℃,24～48h观察孔周围是否出现沉淀环。定量试验三、单向扩散试验（平板法）抗体+琼脂沉淀环抗原倾注平板打孔加样放置37℃

24～48h观察沉淀环

单向扩散试验（平板法）上排为5个不同浓度的参考品；下排为患者血清，下排右2为异常病理血清

实验三单向琼脂扩散试验检测人血清IgG浓度制板

56℃预热Ab加入5ml1.5%NS琼脂后，颠倒混匀后注板，凝固后按纸样打孔。加样 参考血清（Ag）——标准IgG分别作不同程度稀释后（1:20；1:25;1:50;1:100;1:200)分别加入前5孔，待测血清1:50稀释后加入第6孔。3.扩散标记后置于湿盒，37C24h，观察结果。4.数据处理测量6孔沉淀环直径，做标准曲线，（以IgG含量为横坐标，沉淀环直径为纵坐标）；在曲线上查出并计算出病人血清中IgG含量。明天中午结果观察【实验方法】结果判定1：201：251：501：1001：2001：50待测AgRIgG浓度沉淀环直径（R）(mm)待测Ag直径浓度×50结果：人血清IgG浓度在10-20mg/ml之间用途：用于HBsAg、AFP等检测；＝双扩＋电泳优点：耗时短，反应敏感性好。PH：8.6Ag：-，向正极走；Ab：-少，分子又大，因电渗反而向负极运动。四、对流免疫电泳二者相向移动，孔间相遇，比例合适出形成沉淀线。1.5%巴比妥缓冲液实验四对流免疫电泳检测人血清白蛋白HSA（Ag）的滴度【实验材料】

1．电泳缓冲液：1.5%巴比妥缓冲液琼脂（pH8.6）。

2．Ag：人血清白蛋白(HSA）

Ab：抗人白蛋白（抗HSA）。

3．NS、电泳仪、电泳槽、载玻片、打孔器、针头滴管、刻度吸管、洗耳球、搪瓷方盒、试管、电磁炉、铝锅。制板打孔3ml预热1.5%BB缓冲液琼脂倾注玻片，凝固后打双排12孔。稀释Ag

将HSA作对倍稀释（1：2、1：4、1：8、1：16）3.加样 阴极孔侧分别加入待测Ag原液、1：2、1：4、1：8、1：16、NS；阳极孔侧分别加入Ab（抗HSA）。4.电泳标记后置于湿盒，40V,50min电泳后观察结果。【实验方法】结果判定标记孔AbAbAbAbAbAb—+待测Ag1:21:41:81:16NS结果判断：以出现沉淀线的抗原最高稀释度为抗原的有效稀释度。故Ag（HSA）的有效稀释度是1:8。【注意事项】

1．打孔无裂痕，孔中琼脂挑干净。

2．孔勿接近琼脂的边缘。

人人文库> 全部分类> 行业资料 > 医学制药

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论