实验七 植物染色体标本制作和组型分析

植物染色体标本制作和组型分析综合性实验6h一、实验目的1.学习植物染色体制片的基本原理和方法。 2.了解细胞周期中染色体的动态变化。3.掌握植物染色体组型分析的方法；了解染色体组型分析的意义二、实验原理常规压片染色体常不能完全散开,容易重叠、变形、断裂，影响显带结果，核型分析较困难。20世纪70年代以来，参照动物染色体标本制备技术，对植物细胞去壁、低渗、火焰干燥方法，取得了很好的结果。分散良好的标本片用于染色体计数、组型分析、显带、显微操作、原位杂交等分子细胞遗传学研究领域。染色体作为遗传物质——DNA的载体，对生物的遗传、变异、进化和个体的发生，以及细胞增殖和生理过程的平衡控制等都具有十分重要的意义。染色体组在细胞分裂中期的表型称为染色体组型或称核型，包括染色体数目、形态、大小、着丝粒位置及带型等等。染色体组型分析就是通过对染色体标本或其照片进行测量、对比分析、配对、分组、排列，对组内各染色体的形态进行测量、描述，从而阐明生物染色体组成的过程。进行染色体组型分析主要依据一下几个参数：1、相对长度：指单个染色体的长度与包括X染色体在内的单倍体染色体总长度之比，即相对长度=单个染色体的长度*100%/(单倍常染色体+X染色体)的总长度2、臂指数=长臂长度（q）/短臂长度（p）3、着丝粒指数=短臂长度*100%/整个染色体长度4、染色体臂数：端部着丝粒染色体，臂数为1，其他为2三、实验材料器具：显微镜，恒温培养箱试剂：0.02％秋水仙素溶液，70%酒精，改良苯酚品红染色液，1mol/LHCl材料：常用分生区组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。可用大麦(2ｎ=14)、黑麦(2ｎ=14)、玉米(2ｎ=20)、蚕豆(2ｎ=12)、洋葱(2ｎ=16)根尖。四、实验方法一）根尖培养和预处理取材：将玉米/蚕豆种子/洋葱鳞茎放在25℃温箱中发芽，待根长到1cm左右。前处理：剪下根尖用0.05％秋水仙素溶液处理3～4h。或将剪下的根尖放在0～3℃蒸馏水中，置冰箱中24小时，使分裂的细胞尽可能集中于分裂中期。固定：用水洗净处理过的根尖，经（乙醇）甲醇—冰醋酸（3:1）固定2～24小时。使细胞的分裂活动处于停滞状态。二）压片法制片解离：取出根尖，用蒸馏水洗净，切取根冠组织0.5～1mm长，放入1mol/LHCl室温解离12、14、16、18min，软化去除细胞壁及果胶物质，使细胞易于分散。再用蒸馏水洗净。染色：清水漂洗去除残留盐酸后，用改良苯酚品红染色液染色5～10min。压片：取组织，用镊子捣碎，盖上盖玻片，覆以吸水纸，轻轻敲打盖片，使细胞和染色体分散。镜检。附：去壁低渗火焰干燥法制片酶解：倒去固定液，用蒸馏水充分洗干净，切取分生区放到青霉素小瓶中，加入混合酶液（2.5%纤维素酶+2.5%果胶酶），25℃酶解1-2h（28℃，20min）。低渗：倒去酶液，用蒸馏水慢慢冲洗2次，然后在蒸馏水中浸泡30min。制备细胞悬液：倒去蒸馏水，用镊子将材料夹碎。向细胞液中加入2～3ml新鲜固定液，吹打制成细胞悬液。去组织块：静置片刻，使大块组织沉淀，吸取上层细胞悬液静置30min左右，使细胞沉淀，轻轻吸去上清液，留约1ml左右细胞悬液制备标本。冷冻滴片—染色—镜检。四）染色体组型分析1、根据染色体的长短和形态特征进行同源染色体的目测配对。在显微镜下找出染色体分散良好、姐妹染色单体清楚的中期分裂相进行显微拍摄。选取显微照片上的一个细胞的全部染