髓过氧化物酶

髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)又称过氧化物酶，是一种重要的含铁溶酶体，存在于髓系细胞(重要是中性粒细胞和单核细胞)的嗜苯胺蓝颗粒中，是髓细胞的特异性标志，随着对MPO研究的进一步，人们发现MPO基因多态性造成个体对某些疾病易感性的差别，与人类多个疾病的发生、发展亲密有关，因此越来越受到国内外学者的重视。髓过氧化物酶MPO研究1.MPO的构造髓过氧化物酶(MPO)是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族组员之一。MPO是I相代谢酶。每个酶分子有两个铁素基团，顺磁共振波谱表明血红素中的铁是在甲酰基血红素部分。MPO的合成是粒细胞进入循环之前在骨髓内合成并贮存于嗜天青颗粒内，外界刺激可造成中性粒细胞聚集，释放髓过氧化物酶(MPO)。在成熟的粒细胞中，MPO是含量最丰富的糖蛋白，约占外周血多形核中性粒细胞(PMNs)内总蛋白质含量的5%，血液中95%的MPO来源于PMNs。MPO的相对分子质量为150×103，是由2个亚单位聚合而成的二聚体，每个亚单位又由一条重链(α链,相对分子质量约60×103)和一条轻链(β链,相对分子质量约15×103)所构成。2个亚单位在α链处由1个二硫键相连。重链含有亚铁卟啉基团，阐明MPO是铁依赖性的。MPO以3种亚形存在于髓系细胞中，分别为MPOⅠ、Ⅱ、Ⅲ。3种亚型重要是重链有差别，轻链的差别较小，造成它们在相对分子质量及疏水性等方面不同，3种亚型在功效上的差别还不明确，有待进一步研究。2.MPO基因及其多态性人髓过氧化物酶基因位于染色体17q23?q24，含有12个外显子和11个内含子，长约14638bp，调控其基因体现的是生长因子。MPO的mRNA在早幼粒细胞的体现水平最高，另首先是原始粒细胞、幼稚和原始单核细胞；当细胞分化到成熟时期，MPO基因体现水平快速下降。现已知MPO基因首先体现的是一条相对分子质量为89×103的前体蛋白(precursorprotein)，通过翻译后加工，切割成α和β两种亚基，再聚合为成熟的MPO分子，加上糖链，最后形成有功效的MPO。MPO在基因体现过程中存在的缺点，造成MPO基因DNA序列发生变化，影响其活力。MPO基因的多态性影响其基因的转录和体现，对机体的疾病易感性有一定的影响。Chevrier等发现了外显子11处和启动子区域的V53F、A332V、I642L和IVS11?2A→C4个新的基因多态性位点，它们的作用与功效需要进一步研究。Piedrafita等研究发现与疾病有关的位点有5个：463G/A，R569W，Y173C，M251T和外显子9的碱基缺失。现在研究最多的是MPO基因启动子区第463位核苷酸G/A的突变，该位点位于SP1转录因子识别结合的顺式作用元件中，内含4个Alu重复序列。G/A的突变造成位于Alu反映元件的SP1转录因子结合位点消失，从而使MPO转录水平明显下降。也有报道发现外显子10的密码子569存在C被T替代，使CGG→TGG，造成遗传性MPO缺点性疾病。尚有研究报道在MPO基因129位点存在G被A取代，使MPO基因的体现水平明显减少。另外，据有关文献报道，MPO基因463A等位基因与某些癌症的风险减少有关。3.MPO的生物学作用MPO是中性粒细胞的功效标志和激活标志，其水平及活性变化代表着嗜中性多形核白细胞(PMN)的功效和活性状态。纯化的人MPO活性为25～35IU/mg，水溶性好，底物H2O2浓度>0.8mmol时酶受克制，酶反映最佳pH为4.5～5.5，当pH≥10，或≤2时酶失活。MPO的重要功效是在吞噬细胞内杀灭微生物，运用过氧化氢和氯离子产生次氯酸盐，并形成含有氧化能力的自由基。构成MPO–H2O2–卤素系统。许多研究发现，MPO不仅能杀灭吞噬于细胞内的微生物，并且可释放到细胞外，破坏多个靶物质，如肿瘤细胞、血小板、NK细胞、原虫、毒素等，对机体产生和调节炎症反映等多方面发挥作用。然而，在特定条件下，MPO催化反映生成过量的氧化剂(HOCl、3–氯化酪氨酸、酪氨酰基、硝基酪氨酸等)，超出局部抗氧化剂的防御反映时，就会造成氧化应激和氧化性组织损伤。MPO还参加调节炎症反映的许多过程，MPO缺点的中性粒细胞因过量的注入炎症部位而发生氧化反映，大量的超氧化物和氧化物形成，造成炎症部位组织细胞损伤。另外尚有学者发现MPO能与DNA牢固结合形成复合物，有效保护DNA避免其在氧化过程中受损，从而确保髓系细胞的正常分化成熟及功效。编辑本段髓过氧化物酶(MPO)与有关疾病1.MPO与心血管疾病1.1MPO与冠状动脉疾病。冠心病是心血管系统中最常见的疾病，而动脉粥样硬化(AS)又是形成冠心病的重要病理基础。AS发病过程中普通出现氧化低密度脂蛋白，进而巨噬细胞吞噬脂质变成泡沫细胞，泡沫细胞的形成在AS的发生机制中起核心作用。研究发现MPO有增进AS病变形成的作用，MPO通过产生自由基和多个反映性物质，增进斑块形成和不稳定性增加，加速AS进展，进而引发多个并发症如急性冠脉综合征(ACS)。研究发现，MPO缺点的个体罹患心血管疾病的危险性明显下降。MPO水平的升高不仅与患冠状动脉疾病易感性有关，还能够预测早期患心肌梗死的危险性。1.2MPO与急性冠脉综合征(ACS).MPO增进ACS病变形成，并影响粥样斑块的稳定性，通过增大氧化应激而引发ACS。现在的研究表明，MPO是预测ACS患者发生不良心血管事件的一种新的预测因子，特别是在肌钙蛋白T(TnT)水平较低的患者，MPO能够识别那些将来发生心血管事件危险性较高的患者。2.MPO与肿瘤2.1MPO与肺癌在肺部受微生物侵袭、职业暴露以及吸烟时，MPO会随中性粒细胞的聚集释放到炎症部位。MPO可代谢激活多个与肺癌有关的环境致癌物，能将前致癌物如多环芳烃类的苯并芘(BaP)转化成含有高度反映性和致癌性的活性产物二醇环氧化苯并芘(BPDE)，BPDE能与DNA形成加合物并造成姐妹染色体交换，从而造成肺癌。2.2MPO与白血病白血病是累及造血干细胞的造血系统恶性肿瘤，其病因尚不完全清晰。3.MPO与地方性砷中毒3.1近年来，随着分子生物学领域的不停发展，发现MPO在砷中毒所致皮肤病变的发生发展中起着重要作用。MPO现在被研究者认为可能是砷中毒新发现的一种易感标志物，将在慢性砷中毒的早期诊疗和危险评定中含有重要的意义，但国内就这方面的研究还没有涉及到，国外对其进一步的影响机制的研究也不是诸多，因此还很难在现有的研究基础上建立起砷中毒易感性与MPO及其多态性的明确关系，还需要进一步的研究证明。4.MPO与其它疾病4.1MPO在现阶段的研究也拟定了它在疾病早期诊疗与危险评定中含有重要的意义。MPO通过不同的途径可造成某些疾病，同时其基因多态性也会减少机体对某些疾病的易感受性，从而对机体产生保护作用，但其作用机制仍不清晰，随着分子生物学领域的不停发展，MPO的作用机制研究将不停进一步，可能会发现其它某些与疾病易感性有关的多态性位点，从而使人们更清晰的认识其有关疾病的发生、发展，方便对这些人群采用有效的防止和治疗方法髓过氧化物酶

myeloperoxidase过氧化物酶含血红素辅基,重要存在于过氧化酶体,运用H2O2以氧化酚类及胺类化合物。...动物的肝、肾中只有微弱的活性，在牛乳中已分离出过氧化物酶，在白细胞中含有髓性过氧化物酶，这就是脓含有过氧化物酶活性的因素。红细胞也含过氧化物酶，极少量...更多解释>>

与"髓过氧化物酶"有关的文献前10条\o"更多\“髓过氧化物酶\”有关文献"更多文献>>1.髓过氧化物酶在急性冠状动脉综合征患者近期预后判断中的作用目的探讨血浆髓过氧化物酶水平对急性冠状动脉综合征患者近期心脏事件的预测作用。办法采用酶联免疫吸附法分别测定急性冠状动脉综合征组、稳定型心绞痛组和非冠心病组患者的血浆髓过氧化物酶浓...详情>>中国动脉硬化杂志

08期

内科学;血浆髓过氧化物酶;急性冠状动脉综合征;中性粒细胞;酶联免疫吸附法;冠状动脉造影;预后;下载下载2.非糖尿病维持性血液透析患者髓过氧化物酶与颈动脉硬化的有关性目的探讨非糖尿病维持性血液透析患者髓过氧化物酶与颈动脉硬化有关指标的关系。办法酶联免疫吸附法测定非糖尿病维持性血液透析患者同一次透析前后血浆髓过氧化物酶和血清弹性蛋白酶水平变化,...详情>>中国动脉硬化杂志

11期

维持性血液透析;髓过氧化物酶;颈动脉粥样硬化;下载下载3.巨噬细胞髓过氧化物酶与低密度脂蛋白氧化关系的研究目的从低密度脂蛋白(LDL)诱导巨噬细胞髓过氧化物酶活性升高的角度探讨体内LDL氧化的可能机制,为动脉粥样硬化(AS)的抗氧化治疗提供新的思路。办法以体外培养的大鼠...详情>>免疫学杂志

01期

巨噬细胞;髓过氧化物酶;低密度脂蛋白;牛磺酸;下载下载4.探讨颈动脉粥样斑块超声造影显像特性及血浆髓过氧化物酶水平与脑梗死的关系目的探讨颈动脉斑块实时超声造影的显像特性及血浆髓过氧化物酶水平对脑梗死事件的预测作用。办法对73例颈动脉硬化患者的89处斑块进行超声造影检查,观察斑块的显像特点。将他们分为斑块造...详情>>中国超声医学杂志

08期

超声检查;造影剂;颈动脉硬化;血浆髓过氧化物酶;脑梗死;下载下载5.光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死肿瘤坏死因子α体现及髓过氧化物酶活性的变化目的:分析光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死模型脑组织肿瘤坏死因子α体现和髓过氧化物酶活性的变化规律及其有关性。办法:实验于-07/-07在泰山医学院脑微循环实验室完毕...详情>>中国临床康复

40期

脑梗塞;光化学;肿瘤坏死因子;过氧化物酶;下载下载6.冠状动脉病变与2型糖尿病及髓过氧化物酶关系的探讨目的:探讨冠状动脉病变与2型糖尿病和髓过氧化酶的关系。办法:对9月至9月在我院就诊的210例胸痛临床怀疑患冠心病的患者进行冠状动脉造影,将其中冠状动脉狭窄不不大于...详情>>泸州医学院学报

04期

冠状动脉疾病;2型糖尿病;髓过氧化物酶;冠状血管造影术;下载下载7.唾液过氧化物酶正过氧化物酶含有多个生理功效,无论在细胞代谢调节还是在防御方面催化许多重要反映,是重要的细胞氧化还原体系.1944年Dempsey首先在甲状腺中发现甲状腺过氧化物酶(TPO)....详情>>生命的化学(中国生物化学会通讯)

1987年06期

下载下载8.胱抑素C与髓过氧化物酶在冠心病严重程度评定中的应用目的研究分析冠心病病变程度与白细胞计数、超敏C反映蛋白(CRP)、纤维蛋白原(FG)、髓过氧化物酶、胱抑素C、肌酐(Scr)、肾小球滤过率(eGFR)之间的关系。办法收集121例...详情>>检查医学与临床

07期

急性冠脉综合症;稳定性心绞痛;胱抑素C;超敏CRP;纤维蛋白原;髓过氧化物酶;下载下载9.联合测定免疫球蛋白M和髓过氧化物酶对新生儿细菌感染的早期诊疗意义目的探讨血清免疫球蛋白(immunoglobin,Ig)M和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)联合测定对新生儿细菌感染的早期诊疗意义。办法随机选择7...详情>>中华妇幼临床医学杂志

06期

免疫球蛋白M;髓过氧化物酶;细菌感染;新生儿;下载下载10.髓过氧化物酶基因G-463A多态性与肺癌易感性关系的meta分析背景与目的有关髓过氧化物酶基因G-463A多态性与肺癌易感性关系已有广泛研究,但研究成果不一致。本研究运用meta分析的办法探讨髓过氧化物酶基因G-463A多态性与肺癌易感性的相...详情>>中国肺癌杂志

02期

肺肿瘤;髓过氧化物酶;多态性;meta分析;人髓过氧化物酶(MPO)ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用

实验原理：MPO试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知MPO浓度的原则品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将MPO物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再通过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中MPO的活性浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制试剂盒成分（2-8℃96孔配备48孔配备配制96/48份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型原则品：400ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按阐明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型原则品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的MPO抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按阐明书进行稀释底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

自备材料1．

蒸馏水。2．

加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。3．

振荡器及磁力搅拌器等。

安全性1．

避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2．

实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3．

不要用嘴吸取试剂盒里的任何成分。

操作注意事项1．

试剂应按标签阐明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的原则品应丢弃，不可保存。2．

实验中不用的板条应立刻放回包装袋中，密封保存，以免变质。3．

不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4．

使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5．

使用干净的塑料容器配备洗涤液。使用前充足混匀试剂盒里的多个成分及样品。6．

洗涤酶标板时应充足拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反映孔中吸水。7．

底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完毕后应立刻读取OD值。8．

加入试剂的次序应一致，以确保全部反映板孔温育的时间同样。9．

按照阐明书中标明的时间、加液的量及次序进行温育操作。

样品收集、解决及保存办法1、

血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞快速小心地分离。2、

血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、

细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、

保存------如果样品不立刻使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免重复冷冻。尽量的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37

试剂的准备1．

原则品：原则品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将原则品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：400ng/ml（6号原则品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul。200ng/ml（5号原则品）100ul的原倍原则品加入100ul的原则品稀释液100ng/ml（4号原则品）100ul的5号原则品加入100ul的原则品稀释液50ng/ml（3号原则品）100ul的4号原则品加入100ul的原则品稀释液25ng/ml（2号原则品）100ul的3号原则品加入100ul的原则品稀释液12.5ng/ml（1号原则品）100ul的2号原则品加入100ul的原则品稀释液0ng/ml（空白对照）原始浓度不用稀释直接加入50ul。

2．

洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

操作环节1．

使用前，将全部试剂充足混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2．

根据待测样品数量加上原则品的数量决定所需的板条数。每个原则品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3．

加入稀释好后的原则品50ul于反映孔、加入待测样品50ul于反映孔内。立刻加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃4．

甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5．

每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃6．

甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7．

每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃8．

取出酶标板，快速加入50ul终止液，加入终止液后应立刻测定成果。9．

在450nm波优点测定各孔的OD值。

性能1.敏捷度：最小的检测浓度不大于1号原则品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度有关系数R值为0.990。2.特异性：不与人其它细胞因子反映。3.重复性：板内、板间变异系数均不大于10%。4.局限性：6号原则品以上的成果为非线性的，根据此原则曲线无法得到精确的成果。

成果判断与分析1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），对应的MPO原则品浓度为横坐标（X），做得对应的曲线，样品的MPO含量可根据其OD值由原则曲线换算出对应的浓度。

3、检测值范畴：0-400ng/ml

4、敏感度：1.0ng/ml品型号：96T/48T产品名称：人髓过氧化物酶(MPO)ELISA阐明书产品报价：产品特点：人髓过氧化物酶(MPO)ELISA价格公道、品质确保，售后服务完整，并提供免费代检测服务！本试剂盒用于测定人血清，血浆及有关液体样本中髓过氧化物酶(MPO)的活性。

96T/48T人髓过氧化物酶(MPO)ELISA阐明书的具体资料：人髓过氧化物酶(MPO)ELISA阐明书目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及有关液体样本中髓过氧化物酶(MPO)的活性。注意事项：1．

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．

浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响成果。3．

各步加样均应使用加样器，并经常校对其精确性，以避免实验误差。一次加样时间最佳控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．

请每次测定的同时做原则曲线，最佳做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值不不大于原则品孔第一孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。5．

封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．

底物请避光保存。7．

严格按照阐明书的操作进行，实验成果鉴定必须以酶标仪读数为准.8．

全部样品，洗涤液和多个废弃物都应按传染物解决。9．

本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文阐明书有异，以英文阐明书为准。实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人髓过氧化物酶(MPO)水平。用纯化的人髓过氧化物酶(MPO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入髓过氧化物酶(MPO)，再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，通过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。颜色的深浅和样品中的髓过氧化物酶(MPO)呈正有关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过原则曲线计算样品中人髓过氧化物酶(MPO)的浓度。试剂盒构成：试剂盒构成48孔配备96孔配备保存阐明书1份1份

封板膜2片(48)2片(96)

密封袋1个1个

酶标包被板1×481×962-8℃原则品：900U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃原则品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃

样本解决及规定：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(-3000转/分)。认真收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2.血浆：应根据标本的规定选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(-3000转/分)。认真收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应当再次离心。3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(-3000转/分)。认真收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参考实施。4.细胞培养上清：检测分泌性的成分时，用无菌管收集。离心20分钟左右(-3000转/分)。认真收集上清。检测细胞内的成分时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达成100万/ml左右。通过重复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成分。离心20分钟左右(-3000转/分)。认真收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮快速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充足。离心20分钟左右(-3000转/6.标本采集后尽早进行提取，提取按有关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能立刻进行实验，可将标本放于-20℃保存，但应避免重复冻融7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3克制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作环节1.

原则品的稀释与加样：在酶标包被板上设原则品孔10孔，在第一、第二孔中分别加原则品100μl，然后在第一、第二孔中加原则品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加原则品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加原则品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加原则品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加原则品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为600U/L，400U/L，200U/L，100U/L，50U/L)。2.

加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其它各步操作相似)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最后稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3.

温育：用封板膜封板后置37℃温育304.

配液：将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。5.

洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.

加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.

温育：操作同3。8.

洗涤：操作同5。9.

显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.

终止：每孔加终止液50μl，终止反映(此时蓝色立转黄色)。11.

测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。计算：以原则物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出原则曲线，根据样品的OD值由原则曲线查出对应的浓度；再乘以稀释倍数；或用原则物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度有关系数R值为0.92以上。2.批内与批间应分别不大于9%和15%保存条件及使用期：1.试剂盒保存：2-8℃2．使用期：6个月人髓过氧化物酶（MPO）酶联免疫分析

试剂盒使用阐明书

本试剂盒仅供研究使用

检测范畴：7.8ng/ml-500ng/ml

最低检测限：1.95ng/ml

特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人MPO，且与其它有关蛋白无交叉反映。

使用期：6个月

预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它有关生物液体中MPO含量。

阐明

1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文阐明书可能会有不一致之处，请以英文阐明书为准。

4．刚启动的酶联板孔中可能会含有少量水样物质，此为正常现象，不会对实验成果造成任何影响。

实验原理

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗MPO抗体的微孔中依次加入标本或原则品、生物素化的抗MPO抗体、HRP标记的亲和素，通过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。颜色的深浅和样品中的MPO呈正有关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒构成及试剂配制

1.酶联板（Assayplate）：一块（96孔）。

2.原则品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3.样品稀释液（SampleDiluent）：1×20ml/瓶。

4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。

5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。

6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。

9.浓洗涤液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.终止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。

需要