一种利用拟青霉降低农药残留和联合杀虫的方法与流程

一种利用霉降农药残留合杀的方与流本发明属于生物复和害虫防治领，具体涉及用拟霉来降低化学农药留的同时发挥联合制害虫虫口密度方法。背技：目前，化学农药然是世界各国使的主要杀虫剂，由于化学农药的三“”问题（农药残留害虫抗药、害虫生猖獗），世界国都在努力使用生农药，其中，真菌物农药主要从害体表入侵，防治害虫种类多，目前用呈快速增长趋势然而，真菌杀虫的杀虫速度还不人意，特别是虫口度过大时，真菌杀剂虽然能够使害逐渐死亡，但在虫死亡过程中，其农作物的危害还在续，导致农作物收。为减少农作损失，人们不得不害虫虫口密度大时应用化学农药防，也有将化学农和生物农药混合使，这样可在一定程上减少化学农药用量，如：目前有将白僵菌和有机类农药混合后应用农作物、林业和场的蝗虫防治。但是，该合使用方法仍有很多问题：首化学农药的浓度低后不能完全压高密度的害虫虫口第二，化学农药所成的三“r”问题没有解决；三，有些农药与僵菌等杀虫真菌杀虫剂不相，会导致真菌死，实际上起不到菌生物防治作用。本发明申请的前研究发现，有些青霉能够分解化农药，因此发明了种先用化学农药降虫口密度，后用青霉低农药残留同时，用拟青霉杀具有抗药性的害虫由于真菌能够在壤中定殖，因此持续将害虫虫口控在较低的范围，从可减少化学农药施用频度，降低虫防治成本。技实要素：为了解决化学农存在的三“r”问题（农药残、害虫抗药、害再生猖獗），本发明提一种利用拟青霉低农药残留和联杀虫的方法。一种利用拟青霉低农药残留和联杀虫的操作步骤下：（1）菌种活化将拟青霉接种到sday斜面养基中，温度20-30℃培养8-16天，到斜面菌种；（2）扩大培养6692将所述斜面菌种种到sdy液体培养基中，支斜面菌种接种300-1000ml的液体培养基，温20-30℃、转速110-250rpm/分钟条下摇瓶培养3-5天；按照1-10%的体积量比（v/w）接种到小麦固培养基、或大米固培养基、或麦麸固体培养基或谷糠固体培养中，20-35℃培养培养8-16天，到扩大培养物；（3）收集孢子将扩大培养物-50-40℃干燥，用收孢机取孢子；用含0.05%吐温的将孢子配制成浓度1×10-1×10个孢子/ml的拟青霉溶液；（4）化学农药杀和拟青霉联合处在害虫爆发的农，根据化学农药用剂量说明，将学农药均匀喷洒在虫爆发的植物上，18-60h；在植物上喷洒所拟青霉溶液，喷洒为每hm洒30-600l；喷洒化学农药一，农残降低80%及以上；合防治的田地中药虫的产生和害虫再生猖獗的率降低90%及以上。步骤（1）中，所sday培养基配方为：40g葡萄糖10g蛋白胨、10g酵母浸粉和15g琼脂，加至1000ml。步骤（1）中，所pda培养基配方为：200g去皮马薯、20g葡萄糖15g琼脂，加水至1000ml步骤（2）中，按量比1：0.2-1.0将小麦、大米、或麦麸、或糠加水浸泡0.5小时，常规压灭菌，得到小固体培养基、或大固体培养基、或麸固体培养基、谷糠固体培养基另一种利用拟青降低农药残留和合杀虫的操作步如下：（1）菌种活化将拟青霉接种到pda斜培养基中，温20-30℃、培养8-16天得到斜面菌种；（2）扩大培养将所述斜面菌种种到pdb培养基中，每支面菌种接种到300-1000ml的液体培养基，温度20-℃、转速110-250rpm/分钟件下摇瓶培养3-5天；按照1-10%的体积比v/v）接种到sdy或pdb液培养基中，于温20-30℃、在转速为110-250rpm/分的摇床中或在通量为体积比1:1（v/v的发酵罐中培养5-12天，者，得到液体培物；（3）化学农药杀和拟青霉联合处22在害虫爆发的农，根据化学农药用剂量说明，将学农药均匀喷洒在虫爆发的植物上，18-60h时；将所述液体培养匀浆稀释50-500倍均喷洒到喷洒过化学农的植物上，喷洒为50-800l/hm。喷洒化学农药一，农残降低80%及以上；合防治的田地中药虫的产生和害虫再生猖獗的率降低90%及以上。步骤（1）中，所sdy液体培养基配方为：萄糖40g、酵母浸粉10g、蛋白胨10g加水至1000ml步骤（1）中，所pdb培养基配方为：去皮铃薯200g、葡萄糖20.0g加水至1000ml。所述拟青霉(paecilomycessp.)括蛹拟青霉（）细脚拟青霉（）、拟青霉（、环链拟青霉（paecilomycescateniannulatus）、紫拟青霉（）和尼拟青霉（）的一种。这些拟青霉有些归入棒束孢属（isaria）如粉棒束孢（isariafarinosa）和细脚棒束孢isariatenuipes）等甚至它科属，本发明2015年前出版的中国真菌志分类的拟青霉和棒束为准。本发明的有益技效果体现在下述个方面：1.本发明采用喷化学农药，可速降低虫口，将害的危害降低到最点。同时，本发明发有些拟青霉可以效降解化学农药因而，在化学农药虫后及时施用拟青，降解化学农药避免农药残留。发明的拟青霉不仅以有效降解化学农，更主要的是可杀虫，特别是可有抗药的害虫杀死从而避免了抗药害的产生以及害虫生猖獗。2.本发明既利了化学农药的优杀虫活性，又避免三“r”问题，其效果超过目前任何所有虫防治策略。首，优于将化学农与拟青霉混合喷洒方法，因为该方法能解决农残问题第二，优于喷洒学农药后用芽孢杆等微生物降低农残方法，因为该方不能解决抗药虫产生以及害虫再生獗的问题。3.由于拟青霉以在环境中自行存和繁殖，因此可续控制害虫，降化学农药的施用频度并持续降低环境药污染，修复污土地，降低害虫防成本，提高农林产质量。具体实施方式下面结合实施例对发明作进一步述。实施例1一种利用蛹拟青降低农药残留和合杀虫的操作步如下：6626621.1菌种活化将蛹拟青霉（）接到sday斜面培养基上温度20℃培养8天，得到斜菌种。sday斜面培养配方为：40g葡萄糖、10g白胨、10g酵母浸粉和15g琼脂，加水至1000ml1.2扩大培养将所述斜面菌种种到sdy液体培养基中，支斜面菌种接种300ml液体培养基，于三角瓶在20℃、110rpm/分钟摇培养3天，然后，按照1%体积重量比（v/w）接种小麦固体培养基中进行培养。小麦先按重量比1：0.2加水浸泡0.5小时常规高压灭菌。sdy液体培养基即葡萄糖40g、酵母浸粉10g及蛋白10g加水至1000ml。1.3收集孢子接种到小麦培养后继续培养8天，将小麦养物在-50℃干燥，然用收孢机收取孢子。用含0.05%温的水将孢子配成浓度1×10个孢子/ml的拟青霉溶液。1.4化学农药杀和蛹拟青霉联合处在害虫爆发的农，根据化学农药用剂量说明，将学农药均匀喷洒在虫爆发的植物上，18h，将浓度1×10个孢子/ml的拟青霉溶液均匀喷洒植物上，每hm喷洒30l。喷农药一周后，残降低80%；联合防治的地中抗药虫的产和害虫再生猖獗的几率降低90%实施例2一种利用细脚拟霉降低农药残留联合杀虫的操作骤如下：2.1菌种活化将细脚拟青霉isariatenuipes）接种到sday斜培养基中，在30℃养16天。sday斜面培养配方为：40g葡萄糖，10g白胨，10g酵母浸粉和15g琼脂，加水至1000ml2.2扩大培养992992将上述的活化的脚拟青霉斜面菌接种到sdy液体培养基中，每支面菌种接种到1000ml体培养基，于三瓶中在30℃、250rpm/分钟摇瓶培养5天，然后，按照10%积重量比（v/w）接种到大固体培养基基中进培养。大米预先按重量比11.0加水浸泡12小时后常高压灭菌。2.3收集孢子接种到小麦培养后继续培养16天，将小麦培物在40℃干燥，然后用收机收取孢子。用0.05%吐温的水将孢子配成浓度1×10个孢子/ml的拟青霉溶液。2.4化学农药杀和细脚棒束孢联合理在害虫爆发的农，根据化学农药用剂量说明，将学农药均匀喷洒在虫爆发的植物上，60h，将浓度1×10个孢子/ml的拟青霉溶液均匀喷洒植物上，每hm喷洒600l。喷农药一周后农降低90%；联合防治的田中抗药虫的产生害虫再生猖獗的几率降低98%实施例3一种利用古尼拟霉降低农药残留联合杀虫的操作骤如下：3.1菌种活化将古尼拟青霉）接到pda斜面培养基中，25℃培养12天。pda斜面培养基方为：200g去皮马铃薯，20g葡糖和15g琼脂，水至1000ml。3.2扩大培养将上述的活化的尼拟青霉斜面菌接种到pdb液体培养基中，每支面菌种接种到600ml液体养基，于三角瓶在25℃、180rpm/分钟摇瓶培养4天，然后，按照1%积比（v/v）接种到sdy液培养基中，温度20℃在速为110rpm/分钟的摇中培养5天，得到液体培物，即降低农残杀虫的生物制剂。pdb液体培养基方为：去皮马铃薯200g及葡萄糖20.0g加水至1000ml。sdy液体培养基方为：葡萄糖40g、酵母浸粉10g及蛋白胨10g加水至1000ml。3.3化学农药杀和古尼拟青霉联合理2222对虫口密度大的虫首先喷洒化学药杀虫，根据化农药使用剂量说明将化学农药均匀喷在害虫爆发的植上，待48h，将前面收取的液体养物匀浆后稀释50倍匀喷洒到喷洒过药的植物上。液体酵物匀浆稀释液用量为50l/hm。喷农药一周后农降低85%；联合防治的田中抗药虫的产生害虫再生猖獗的几率降低95%实施例4一种利用粉拟青降低农药残留和合杀虫的操作步如下：4.1菌种活化将粉拟青霉（isariafarinosa接种到pda斜面培养基，在26℃培养10天。pda斜面培养基方为：200g去皮马铃薯，20g葡糖和15g琼脂，水至1000ml。4.2扩大培养将上述的活化的拟青霉斜面菌种种到pdb液体培养基中，每支斜菌种接种到600ml液体培基，于三角瓶中26℃、200rpm/分钟摇瓶培养3天，然后，按照10%体比（v/v）接种到sdy液体养基中，温度30℃在气量为体积比1:1（v/v的发酵罐中培养12天，得液体培养物，即于降低农残和杀虫的生物制剂pdb液体培养基方为：去皮马铃薯200g及葡萄糖20.0g加水至1000ml。sdy液体培养基即葡萄糖40g、酵母浸粉10g及蛋白10g加水至1000ml。4.3化学农药杀和粉棒束孢联合处对虫口密度大的虫首先喷洒化学药杀虫，根据化农药使用剂量说明将化学农药均匀喷在害虫爆发的植上，待36h后，将前面收取液体养物匀浆后稀释500倍，匀喷洒到喷洒过药的植物上。液体酵物匀浆稀释液用量为800l/hm。喷农药一周后农降低87%；联合防治的田中抗药虫的产生害虫再生猖獗的几率降低96%技特：1.一种利用拟霉降低农药残留联合杀虫方法，其征在于操作步骤下：6692（1）菌种活化将拟青霉接种到sday斜面养基中，温度20-30℃培养8-16天，到斜面菌种；（2）扩大培养将所述斜面菌种种到sdy液体培养基中，支斜面菌种接种300-1000ml的液体培养基，温20-30℃、转速110-250rpm/分钟条下摇瓶培养3-5天；按照1-10%的体积量比（v/w）接种到小麦固培养基、或玉米固培养基、或麦麸固体培养基或谷糠固体培养中，20-35℃培养培养8-16天，到扩大培养物；（3）收集孢子将扩大培养物-50-40℃干燥，用收孢机取孢子；用含0.05%吐温的将孢子配制成浓度1×10-1×10个孢子/ml的拟青霉溶液；（4）化学农药杀和拟青霉联合处在害虫爆发的农，根据化学农药用剂量说明，将学农药均匀喷洒在虫爆发的植物上，18-60h；在植物上喷洒所拟青霉溶液，喷洒为每hm洒30-600l；喷洒化学农药一，农残降低80%及以上；合防治的田地中药虫的产生和害虫再生猖獗的率降低90%及以上。2.一种利用拟霉降低农药残留联合杀虫方法，其征在于操作步骤下：（1）菌种活化将拟青霉接种到pda斜培养基中，温20-30℃、培养8-16天得到斜面菌种；（2）扩大培养将所述斜面菌种种到pdb培养基中，每支面菌种接种到300-1000ml的液体培养基，温度20-℃、转速110-250rpm/分钟件下摇瓶培养3-5天；按照1-10%的体积比v/v）接种到sdy或pdb液培养基中，于温20-30℃、在转速为110-250rpm/分的摇床中或在通量为体积比1:1（v/v的发酵罐中培养5-12天，到液体培养物；（3）化学农药杀和拟青霉联合处22在害虫爆发的农，根据化学农药用剂量说明，将学农药均匀喷洒在虫爆发的植物上，18-60h时；将所述液体培养匀浆稀释50-500倍均喷洒到喷洒过化学农的植物上，喷洒为50-800l/hm；喷洒化学农药一，农残降低80%及以上；合防治的田地中药虫的产生和害虫再生猖獗的率降低90%及以上。3.根据权利要1或2所述的一种利用拟霉降低农药残留联合杀虫方法，其特征在于：所拟青霉为蛹拟青（）、脚拟青霉（）或粉拟青霉（）或环链拟青霉（paecilomycescateniannulatus）或淡紫拟青霉（）或尼拟青霉（）的一种。4.根据权利要1所述的一种利拟青霉降低农药残和联合杀虫方法其特征在于：步骤1）中，所述sday培养基方为：40g葡萄糖、10g蛋白胨、10g酵母浸粉和15g琼，加水至1000ml。5.根据权利要1所述的一种利拟青霉降低农药残和联合杀虫方法其特征在于：步骤1）中，所述pda培养基配为：200g去皮马铃薯、20g葡萄和15g琼脂，加水1000ml。6.根据权利要1所述的一种利拟青霉降低农药残和联合杀虫方法其特征在于：步骤2）中，按重量1：0.2-1.0将小麦、或大米、或麸、或谷糠加水浸泡0.5小，常规高压