药物鉴别技术-色谱鉴别法（药物质量检测课件）

色谱鉴别法色谱法是以试样组分在固定相和流动相间的溶解、吸附、分配、离子交换或其他亲和作用的差异为依据而建立起来的各种分离分析方法。加入石油醚分层胡萝卜素叶黄素叶绿素A、B原理:基于物质在不同相之间具有不同的分配系数引起的分离1906，俄国植物学家茨维特固定相（stationaryphase）：色谱法中，填入柱管内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相。流动相(mobilephase)：携带样品流过固定相的流体（一般是气体或液体）称为流动相。色谱柱(chromatographycolumn)：装有固定相的管子称为色谱柱。流动相（MobilePhase）固定相（StationaryPhase）样品（溶解于流动相中的溶质）分离是一个物理的过程

任何色谱法都存在两个相，即流动相和固定相；流动相可以是气体或液体，固定相为固体或涂渍在固体表面的高沸点液体；流动相对固定相作相对运动，它携带样品通过固定相；被分离样品中各组分与色谱两相间具有不同的作用力，这种作用力一般表现为吸附力或溶解能力，正是这种作用力的差异导致通过各组分通过固定相时达到彼此分离。色谱法的共同特点色谱鉴别法是利用药物在一定的色谱条件下，产生特征色谱行为，利用其特征参数（比移值或保留时间）进行鉴别。比较药物的色谱行为及特征参数的检验结果是否与药品质量标准要求的一致，以此来验证药物真伪的方法。

柱色谱法平面色谱法高效液相色谱法highperformanceliquidchromatography（HPLC）气相色谱法gaschromatography（GC）色谱鉴别法薄层色谱法thin-layerchromatography(TLC)纸色谱法paperchromatography（PC）薄层色谱鉴别法色谱鉴别法是将供试品及规定的对照品按相同的方法，控制相同的条件点样与同一薄层板上，经展开、检视所得的色谱斑点做对比，进行药物的鉴别。一般采用对照品（或标准品）比较法，要求供试品与对照品主斑点的颜色与位置应一致。一种物质在固定的条件下有固定的Rf值，不同物质在相同的条件下可有不同的Rf值。因此，未知物与已知物（标准物质）在相同条件下比较Rf值可提供定性依据。薄层色谱鉴别法常用的鉴别法

①同等条件下，供试品与对照品在同一块薄层板比较②供试品与对照品等体积混合在同一块薄层板比较③供试品与和其化学结构相似对照品比较④将③下两溶液等体积混合点样、比较对照品样品混合薄层色谱鉴别法常用的鉴别法对照品样品混合①同等条件下，供试品与对照品在同一块薄层板比较——供试品所显的主斑点颜色（或荧光）与位置（Rf）应与对照品所显的主斑点一致，而且主斑点大小与颜色深浅也应大致相同；②供试品与对照品等体积混合在同一块薄层板比较——应显单一、紧致的斑点；③供试品与和其化学结构相似对照品比较——主斑点应显两个不同（Rf）的斑点薄层色谱鉴别法色谱鉴别法薄层色谱法具有专属性强、操作简便、实验成本低等优点。在鉴别试验中，薄层色谱法是色谱法中应用最广的一种方法高效液相色谱、气相色谱法色谱鉴别法高效液相色谱法是特指一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典色谱理论的基础上，采用了高压泵、化学键合固定相高效分离柱、高灵敏专用检测器等新实验技术建立的一种液相色谱分析法。气相色谱法是特指一种用气体为流动相的色谱分离分析方法。

在色谱条件及操作条件一定的情况下，被测物质（药物）在色谱柱上的保留值（保留时间或保留体积）是一定的，要求与对照品的一致。流动相

泵色谱柱检测器

泵输液分离

检测

记录AEGBCDF进样阀进样液相色谱组成溶剂真空脱气机色谱泵自动进样器色谱柱及柱温箱检测器载气进样系统色谱柱检测器柱温箱数据处理系统气相色谱组成分析对象的区别：HPLC：适于溶解后能制成溶液的样品（包括有机介质溶液），不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测用途广泛，占有机物的80%。GC：适于能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品；但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品，尤其对大多数生化样品不可检测，占有机物的20%。高效液相色谱、气相色谱法色谱鉴别法流动相的区别：GC采用流动相是惰性气体，它对组分没有亲和力，即不产生相互作用力，仅起运载作用.HPLC中流动相可选用不同极性的液体，选择余地大，它对组分可产生一定亲和力，并参与固定相对组分作用的剧烈竞争。

因此，流动相对分离起很大作用，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数，这为选择最佳分离条件提供了极大方便。试验条件的区别气相色谱一般都在较高温度下进行的高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。高效液相色谱、气相色谱鉴别法色谱鉴别法高效液相色谱法(HPLC)——在色谱条件及操作条件一定的情况下，被测物质（药物）在色谱柱上的保留值（保留时间或保留体积）是一定的，要求与对照品的一致。气相色谱法(GC)——同HPLC要求高效液相色谱、气相色谱鉴别法色谱鉴别法色谱谱鉴别法小结

适用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴别，具有分离、分析同时进行的特点。