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文档简介

电泳技术及其应用电泳原理及其分类SDS电泳技术等电泳聚焦电泳双向电泳技术1电泳原理及其分类原理：带电颗粒在作用下电场，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳(electrophoresis,EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。电泳分类：1依据支持物的性状：纸质电泳、粉末电泳、凝胶电泳、缘线电泳2依据支持物的装置形式：平板电泳、垂直板电泳、柱状（管状）电泳3依据pH的连续性：连续pH电泳（无浓缩胶）、非连续pH电泳常用的电泳技术：聚丙烯酰胺凝胶电泳等电聚焦电泳双向电泳琼脂糖电泳（大分子核酸、病毒类物质）2丙烯酰胺凝胶电泳原理：聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂N，N，N

，N

—四甲基乙二胺(TEMED)和催化剂过硫酸铵(AP)或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。分子量与凝胶浓度的关系丙烯酰胺浓度（%）线性分离范围（kD）

1512～431016～687.536～945.057～212SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）：如果在丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS)，则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量，而与所带电荷和形状无关。因此可以利用SDS测定蛋白质分子量。

当蛋白质的分子量在15KD—200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。依据分子量的大小确定浓缩胶和分离胶的浓度及标准蛋白。加入分离胶溶液pH8.8封水或饱和正丁醇溶液制备分离胶封水的目的是使分离胶上表面平直，并排除气泡。凝胶聚合好的标志是胶与水层之间形成清晰的界面。倒出水或正丁醇，并用滤纸吸干分离胶pH8.8加入浓缩胶溶液pH6.8制备浓缩胶插入样品梳样梳需一次平稳插入,梳口处不得有气泡,梳底需水平。加入电极缓冲液pH8.3浓缩胶pH6.8通电分离胶pH8.8加入样品开始电流恒定在10mA，当进入分离胶后改为20mA，溴酚蓝距凝胶边缘约5mm时，停止

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