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实验五病原性球菌的检验(二）

目的要求：3学时熟悉病原性球菌的分离鉴定程序及临床意义；掌握血琼脂平板的制备方法；掌握常见球菌的形态特点和鉴定方法；熟悉鉴定细菌的动物试验；实验内容：1.细菌菌落观察；2.培养物涂片革兰染色显微镜观察；3.培养物生化试验；（1）肺炎链球菌的Optochin敏感试验；（2）胆汁溶菌试验（平板法）；（3）触媒试验（玻片法）；（4）凝固酶试验（玻片法）；4.肺炎球菌、淋球菌的形态特点观察1.肺炎链球菌的Optochin敏感试验结果观察测量抑菌圈直径（mm），判断对Optochin的敏感性（>14mm为敏感（+），≦14mm不敏感（-）甲型溶血性链球菌抑菌圈直径？敏感否？肺炎链球菌抑菌圈直径？敏感否？

2.细菌的菌落、形态染色性观察（1）描述菌落特征：

A溶血环；

B色素；

C菌落大小、形态、干湿、表面光滑、突出或凹陷等（2）革兰染色观察每种菌形态、染色性和排列3.细菌培养物生化试验3.1胆汁溶菌试验（平板法）：先做

原理：胆汁或胆盐加速了肺炎链球菌本身自溶过程，促使细菌发生自溶。

方法与步骤：取10％去氧胆酸钠溶液2-3接种环，滴加于被测菌的菌落上，置35℃30min后观察结果。菌落被溶解为阳性。肺炎链球菌多为阳性

结果？

3.2触媒试验（玻片法）：

原理：又称过氧化氢酶试验。具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生氧而出现气泡。

方法与步骤：取1-2接种环细菌与玻片上，然后滴加新鲜配置的3%的H2O2，在半分钟内出现气泡者为阳性。多见于葡萄球菌、微球菌等

结果？

3.3血浆凝固酶试验（玻片法）：

原理：血浆凝固酶主要由致病性的金黄色葡萄球菌产生的，能使含有肝素或枸橼酸钠等抗凝剂的人或兔血浆发生凝固的物质。它是鉴定葡萄球菌有无致病性的重要指标。

游离凝固酶结合凝固酶

方法与步骤：（1）讲台取一张玻片.（2）划分3个位置.（3）挑取3-5环兔血浆到1、2位置，3-5环生理盐水到3位置.（4）无菌操作，挑取1环细菌(金葡、表葡）在相应位置，均匀涂开，观察细菌团块物出现否。结果？凝固酶试验阳性阴性阴性4.肺炎链球菌与淋球菌观察G+C，成双排列，G-C，成双排列，肾型矛尖状，荚膜荚膜金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌草绿色链球菌化脓性链球菌肺炎链球菌淋球菌菌落金/中/光溶血环白/中/光柠/白无/灰/小a溶血无/灰/小B溶血无/灰/小a溶血无/灰/小革兰染色++++++_胆汁溶菌+触酶试验+++___+凝固酶试验+------肺炎链球菌观察+

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