临床微生物学检验：9-弧菌科

弧菌科共性：G-,有极鞭毛,动力＋,O/F(F＋型),氧化酶＋。

弧菌科分为8个菌属：

弧菌属：目前至少66种，致霍乱（烈性传染病）和食物中毒。弧菌属弧菌属是一群氧化酶＋（除麦氏弧菌外），O/F（F+型），对弧菌抑制剂O/129（150μg）敏感，Na+能刺激生长，有的为嗜盐菌株。本属菌共66种，其中12种使人致病。

分类：1.O1群霍乱弧菌：包括古典生物型（classacalbiotype和爱尔托生物型（EITorbiotype)根据O抗原的ABC抗原因子组合分为三个型别：小川型、稻叶型、彦岛型。

2.非O1群霍乱弧菌：其生化与O1群霍乱弧菌相同，属同种系，但不被O1群多价血清凝集，可用血清学和分子生物学技术区别。污染食物或水源引起爆发流行，既能引起胃肠炎，又能引起肠道外感染，可从血、伤口、中耳、痰、脑脊液和尿中分离到本菌。多发生于免疫功能低下患者。3.O139型霍乱弧菌：这种新血清型可能是EITor菌株的O抗原的突变型。该菌先后在印度、孟加拉和泰国出现。在印度其流行已有取代EITor型霍乱之势。O139型霍乱弧菌在临床上与O1群EITor霍乱无法区别。临床症状为严重水样便、呕吐，并迅速出现脱水。

4.副溶血弧菌：是一种有嗜盐性的细菌。常存在于近海海水、海底沉积物、海产品与腌渍食品中，是夏秋季沿海地区食物中毒和急性腹泻的主要病原菌。

本菌偶尔尚可引起肠道外感染（中耳炎、外伤感染）。本菌具有嗜盐性。NaCl最适生长浓度为3.5%。在无盐培养基中不能生长。霍乱弧菌V.cholerae

霍乱弧菌是烈性传染病霍乱的病原菌。霍乱在人类历史上曾发生过7次大流行。前6次（1917－1923）起源于印度恒河三角洲，由古典生物型引起，第7次起源于印度尼西亚西拉威西岛，由EITor生物型引起从1961年至今尚未停止。已波及五大州140余个国家和地区，发病人数数以百万计。我国以EITor小川型流行为主。屋顶上的轻骑兵《中华人民共和国传染病防治法》规定管理的传染病分甲类、乙类、丙类三类，共37种。

甲类传染病是指：鼠疫、霍乱。（一）生物学性状1.形态染色：自病人体内新分离的霍乱弧菌呈G－弧菌或逗点状，经人工培养后可行成杆菌，取“米泔样”大便涂片镜检呈鱼群状排列，菌体一端有单鞭毛，运动活泼呈穿梭状运动。2.培养和生化兼性厌氧，营养要求不高，在普通培养基上生长良好。最适温度37℃，最适Ph7.2－7.4，耐碱性。在Ph9.2的碱性蛋白水中仍能生长。初次分离常用pH8.5的碱性蛋白胨水增菌培养（可抑制杂菌），经6－9h可在液体表面呈菌膜生长。常用的选择培养基为TCBS，在TCBS平板上形成较大的黄色菌落（发酵蔗糖产酸所致），在亚碲酸钾平板上菌落中心呈灰褐色。在平板上菌落较大。在EITor生物型可形成乙型溶血。耐碱不耐酸霍乱弧菌的主要生化特性见表11－2。两种生物型的鉴别见表11－3。

3.抗原构造OAg－耐热，100℃，24h不被破坏。特异性高，具有型和群特异性两种抗原，是霍乱弧菌分群和分型的基础。HAg－－不耐热，100℃，24h即被破坏，为本属共同Ag,特异性低。

4.分群和分型（1）血清学分群与分型：依据OAg的特异性，可将霍乱弧菌分成140个血清群。其中O1群霍乱弧菌依ABC三种抗原（A为群特异Ag,B、C为型特异Ag），分为AC－－稻叶型；AB－－小川型；ABC－彦岛型（2）生物型古典和EITor生物型，血清型相同。（3）噬菌体分型：具有高度的种、型特异性，但操作复杂，应用有一定的局限性，一般医院不列入常规检测项目。其中第Ⅳ组裂解古典生物型，第Ⅴ组裂解EITor生物型。故这两组phage有助于鉴别这两个生物型。5.变异性（1）形态变异：反复人工传代，弧形变成直杆状，多形态，动力也可消失。（2）菌落变异：S-R变异。人型－油煎蛋样菌落。（3）溶血性变异：溶血性菌株（EITor—β溶血）与非溶血菌株互变。（4）毒力变异：当S型变成R型时常伴有毒力的减弱和消失。6.抵抗力对湿热、干燥、日光及化学消毒剂敏感，怕热耐碱，对庆大霉素敏感，可用于制备选择培养基，有利于霍乱弧菌分离，多粘菌素能抑制古典生物型而不能抑制EITor生物型，可作为分型的依据。随作抗生素的广泛应用，霍乱弧菌耐药性菌株也大大出现。应做药敏选药治疗。（二）临床意义1.致病因素（1）侵袭力－－依靠其动力、菌毛和分泌粘液的能力穿过小肠粘膜表面的粘液层，并粘附于小肠粘膜上上皮细胞刷状缘的微绒毛上大量繁殖（2）霍乱肠毒素（choleraenterotoxinCEorCT）：CE是Mw80000－90000的蛋白质毒素。由A、B两个亚单位构造，A亚单位中，A1为MW23000的多肽，是CE的毒性成分。A2为MW50000的多肽。B单位（4－6个）是结合亚单位，可与小肠粘膜上皮细胞上的神经节苷脂受体（GM1）结合，使CE分子变构，A亚单位脱离B亚单位进入细胞膜，随着二硫键的降解。A1肽链活化（酶）－腺苷酸环化酶，使细胞内ATP—cAMP增加－肠粘膜细胞的分泌功能大量增加－肠液大量分泌－严重的腹泻、呕吐。致使体内水分和电解质大量丧失，临床上呈现严重的脱水，外周循环衰竭，代谢性酸中毒，甚至休克、死亡。霍乱肠毒素（CE）:

B亚单位A亚单位与小肠粘膜上皮细胞GM1神经节苷脂受体结合，介导A亚单位进入细胞（结合亚单位）（毒性亚单位）使细胞内cAMP水平升高，主动分泌Na+、K+、HCO3-和水，导致严重的腹泻与呕吐1A+5BCE是目前已知致腹泻毒素中最为强烈的毒素，是典型的肠毒素代表。霍乱弧菌除CE外，还有“新”霍乱毒素ZOT（zonulaoccludenstoxin）、蛋白酶（毒素激活因子）。EITor弧菌产生的溶血毒素也可能与腹泻有关。

剧烈腹泻和呕吐（米泔水样腹泻物，大量水分和电解质丧失，低容量性休克及心力不齐和肾衰竭（死亡率高达60%）烈性肠道传染病，为我国的甲类法定传染病传播途径通过污染的水源或食物经口摄入—粪-口途径2.所致疾病传染源临床表现霍乱病人、无症状感染者上吐下泻2.所致疾病－霍乱典型霍乱的临床表现分为四个期：前驱期、吐泻期、脱水虚脱期和恢复期。近年来临床所见的多为不典型的轻型病例。1.标本采集：应尽可能在发病早期，使用抗生素之前进行。可采集米泔样水样便、呕吐物、尸体肠内容物，一般就地接种或用卡－布运送培养基或碱性蛋白胨水，37℃，6－8h增菌－菌膜－进一步分离培养。2.检验程序：（三）微生物学检查粪便增菌培养（碱性胨水）TCBS或其他选择培养基破片凝集实验，盐水对照不凝集初步报告快速诊断送CDC最后鉴定3.检验方法

（1）直接镜检：涂片2张，干后乙醇或甲醇固定，G-弧菌，呈鱼群样排列。（2）动力和制动试验：动力＋，呈穿梭状似流星状运动，阳性菌，再用霍乱多价诊断血清（效价≥1：64），其活泼的运动停止并发生凝集。（3）分离培养：接种TCBS平板，挑选可疑菌落（较大黄色菌落），进一步鉴定。

1）初步鉴定：血清凝集（O1群和O139群抗血清，多价至单价）。菌体形态、菌落特征、氧化酶试验等进行初步鉴定。2）最后鉴定：全面生化、血清学与分型。①初筛试验：霍乱红试验＋、粘丝试验＋、O/129敏感试验＋

②鉴定试验多粘B敏感试验鸡RBC凝集试验第Ⅳ组phage裂解试验古典生物型敏感－裂解EITor生物型不敏感＋不裂解防治原则改善社区环境，加强水源管理疫苗预防接种及时补充液体和电解质预防大量失水导致的低血容量性休克和酸中毒治疗霍乱的关键控制传染源切断传播途径提高易感者免疫力隔离病人，治疗无症状携带者副溶血性弧菌嗜盐，5%的盐培养基中生长副溶血性弧菌大面积食物中毒产生耐热直接溶血素，TD