f级近交系wisar大鼠血常规值的影响因素研究

f级近交系wisar大鼠血常规值的影响因素研究

wistar大鼠在20世纪20年代在wistar研究所获得了成功。现广泛分布于世界各地。1979年从美国国立医学研究所引到英国牛津实验动物场(OLAC)。1985从OLAC引到中国医学科学院实验动物研究所(IMLAS)。这种大鼠对各种营养物质敏感,适用于各种营养、代谢性疾病研究;垂体肾上腺系统发达,应激反应灵敏,适用于神经-内分泌实验研究,还用于药物、肿瘤、传染病、关节炎、肝外科等医学研究领域。Wister大鼠是生物医学研究中使用历史最长的大鼠品系。本中心于2002年从国家啮齿类种子中心上海分中心引进5♂和5♀近交系Wistar大鼠进行饲养繁殖,并已经建立起核心群、血缘扩大群和生产群,至今已达到F5代,已经取得广东省实验动物微生物监测所颁发的SPF级微生物检测合格证(合格证号粤2005A014)。为了掌握本中心近交系Wistar大鼠不同周龄的血常规值,我们对本群大鼠进行血常规值的测定,为采用该大鼠从事生物医学研究的科研人员提供基础数据。1材料和方法1.1血常规值测定时间由本中心所饲养的近交系Wistar大鼠生产群中分别选取出生3周龄、6周龄、13周龄和52周龄老年鼠各100只,雌雄各半用于血常规值的测定(合格证号粤2005A014)。1.2饲料与饲料制备饲养于屏障系统中。室内空气经初效、中效和高效三级过滤,洁净度达到国标1万级标准。温度控制在20℃~25℃,相对湿度在60%左右,光照周期为12h∶12h(光照起始时间为:6:00),换气次数20~50次/h。所用饮水、垫料均经132℃,10min高压蒸汽灭菌,饲料为本中心配制加工的全价颗粒饲料,并经121℃,30min高压蒸汽灭菌。水和饲料自由饮食。1.3主要实验设备和试剂1.3.1主要实验设备CelltacEMEK-7222K血液分析仪:日本NIHONKOHDEN。1.3.2仪器试剂dh—主要试剂:溶血剂(DH—910、DH—680)、清洗剂(DH—520、DH—620)、稀释液(DH—640),由上海市东湖仪器试剂有限公司生产。1.4血常规指标检测从该近交系Wistar大鼠生产群中随机抽取3周、6周、13周和老年鼠(52周)各100只大鼠,雌雄各半,动物空腹19h后在乙醚麻醉的状态下从眼眶静脉丛采血1mL,EDTAK2抗凝,采用全血检测以下血常规指标:白细胞总数(WBC)及白细胞分类(DLC)、红细胞总数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、平均红细胞体积(MCV)和血小板总数(PLT)等。1.5统计方法实验所得数据采用SPSS11.0统计软件进行双因素方差分析。2周龄对中性细胞、血小板细胞及红细胞血色素量的影响双因素方差分析表明(表1),SPF级Wistar大鼠周龄对体重(F=3525)、白细胞(F=26.8)、淋巴细胞(F=7.34)、单核细胞(F=5.31)、血红蛋白(F=9.00)、红细胞压积(F=9.07)、血小板(F=13.34)、血小板压积(F=50.81)、血小板分布宽度(F=65.41)有极显著影响(P<0.01),周龄对中性粒细胞(F=3.60)、血小板平均体积(F=3.18)有显著影响(P<0.05),周龄对嗜酸性细胞(F=1.46)、嗜碱性细胞(F=1.32)、红细胞(F=0.80)、红细胞平均体积(F=2.09)、平均红细胞血色素量(F=1.07)无显著影响(P>0.05)。SPF级Wistar大鼠性别对体重(F=93)、白细胞(F=7.11)、血小板分布宽度(F=13.40)有极显著影响(P<0.01),性别对嗜碱性细胞(F=5.69)有显著影响(P<0.05),性别对中性粒细胞(F=0.18)、淋巴细胞(F=2.30)、单核细胞(F=0.19)、嗜酸性细胞(F=0.33)、红细胞(F=0.31)、血红蛋白(F=0.20)、红细胞压积(F=0.55)、红细胞平均体积(F=0.12)、平均红细胞血色素量(F=0.84)、血小板(F=0.003)、血小板压积(F=3.17)、血小板平均体积(F=0.14)无显著影响(P>0.05)。续表13fps级近交系wist大鼠血常规测定结果实验动物被称为生命科学领域中的活试剂,既是生命科学研究的对象,又是科学研究的载体,其各项生理数据、血液指标的准确性对生命科学研究具有重要意义。大量资料显示,血常规值受品种品系、性别、年龄、营养因素的影响,这些因素的微小变化都会引起测定值的变化,因此应该对不同品种、不同年龄段、不同性别等的实验动物血液学指标进行分别测定,以便掌握更为准确客观的实验动物基础数据,便于科研工作者参考查阅。本实验分别对不同年龄段和性别的SPF级近交系Wistar大鼠血常规进行测定,结果显示动物在幼龄期3周龄、生长期6周龄、成年期13周龄和老年期52周龄的血常规值数据比较,有极其显著的差异,雌雄性别也有显著的差异。同时与詹纯列等报道的SPF级远交系Wistar大鼠青年和老年鼠血常规值进行比较,结果发现WBC、NE%、MO%、红细胞平均体积MCV(fl)、平均红细胞血色素量MCH(pg)、血小板记数PLT(×109/L)比詹纯列等报道稍微高、红细胞RBC(×1012/L)、血红蛋白HGB(g/L)、红细胞压积HCT(%)比较低,PCT(fl)、血小板平均体积MPV(fl)、血小板分布宽度PDW(fl)比较一致。结果的不尽相同一方面可能是由于采样方法、饲养环境等因素所致;另一方面动物品种、品系对血常规值的影响是主要因素。近交系动物遗传上稳定,不受近交、选择和遗传突变的影响。不同近交系之间由于近交而固定的基因不同,因此遗传差异很大。这提示广大科技工作者在科研工作中,有必要根据自己开展课题的具体情况,按照动物品种(品