顾莹药物检测分析校内实训报告

福建农林植物保护学院（黑体，字号小三）药物检测分析校内实训报告（黑体，字号小二）（以下黑体，字号小三）姓名：学号：成绩：指导老师：廖金英实习地点：福建农林大学制药工程专业实验室（下安实验楼3号楼6楼）实训时间：2014.6.27～7.111目的与意义（1）掌握高效液相色谱的基本原理、实验操作方法及注意事项；（2）学会如何分析液相色谱图及如何处理实验数据；（3）掌握饮料中的苯甲酸、山梨酸等的分离纯化方法，了解饮料中的成分，做的少喝饮料，更好的促进身体健康。2实训内容2.1样品预处理2.1.1试样制备（正文部分宋体，字号体小四，行距固定值20磅，段落首行缩进2字符）A、汽水类准确称取5.00-10.00克试样，精确至0.0001克，放入小烧杯中，微温搅拌除去其中的二氧化碳气体，加少量水稀释，用0.2mol/L的NaOH调pH为7，用玻璃棒小心将样品转移至25ml容量瓶中，并加水定容至刻度，摇匀，经0.45微米水洗膜过滤，待测。B、饮料类准确称取5.00-10.00克试样，精确至0.0001克，放入小烧杯中，加少量水稀释，用0.2mol/L的NaOH调pH为7，用玻璃棒小心将样品转移至25ml容量瓶中，并加水定容至刻度，摇匀，经0.45微米水洗膜过滤，待测。2.1.3净化1、配制20%的乙酸铵作为流动相，并且进行了过滤。2、在上样之前用过滤器对样品进行了过滤。2.2添加回收实验操作步骤精密称取超纯水5份，各10ml,加入0,01mg/ml的溶液1ml,按同样品前处理的方法处理后测定其回收率，计算其回收率和ＲＳＤ。2.3高效液相色谱检测2.3.1高效液相色谱仪工作原理HPLC由泵、进样器、色谱柱、检测器、馏分收集器、数据工作站、流动相溶剂瓶、梯度设备（萃取机）构成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出）由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。2.3.2高效液相色谱仪操作流程过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。进入HPLC控制界面主菜单设置相应参数。进样：A、进样阀在INJECT模式，插入进样针。B、将阀转到LOAD模式，注入样品。C、将进样针留在阀上，将阀转回到INJECT模式。D、取出进样针，清洗进样阀。使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡。数据采集及分析A、数据采集：建好文件后，将进样阀转在INJECT模式即开始采集数据。B、积分：在采集数据过程中或是已保存的数据都可以进行积分，选择“积分”页。C、校正：结束积分后，可以通过“校正”页来进行校正。D、生成报告：在“校正”页，选择“打印报告”，编辑报告或是将报告转为word格式等。关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关2.3.3高效液相色谱仪使用注意事项（1）操作泵应该注意的问题必须对溶剂进行脱气勿空转使用缓冲溶液之后一定要用水清洗检查溶剂间的可混合性启动泵之前要灌泵控制脉冲检查泵压（2）使用进样阀的注意点使用进样针前要清洗干净，并去除气泡清洗进样针:选择样品易于溶解的溶剂附加清洗方法:使用过的溶剂→丙酮→二氯甲烷使用自动进样器针管清洗溶液时要格外注意连接管线越短越好（3）样品处理注意的问题通常都是将样品溶解在流动相中，流动相中样品的溶解度是最好的，通常进样前，我们用0.45um的过滤膜过滤样品。如果预先知道样品很脏，可以在进样前用0.2um的过滤膜过滤（4）色谱柱操作中的注意事项作为新色谱柱，最好在使用前，低于分析流速下（0.2-0.3ml/min）过大约30分钟。色谱柱如果长时间没有使用，再次投入使用前，也要做相似的工作。关机时，最好逐步降低流速，不要突然降低压力，这样对色谱柱以及系统都会有影响。当使用缓冲溶液时，切记要先用水冲洗系统，再改用有机溶剂，这样可以避免结晶现象出现，堵塞柱子。使用前，最好过滤流动相及样品，避免颗粒物产生堵塞。样品最好溶解在流动相中，如果不是，最好也要接近流动相的组成。这样会减少样品在流动相中的不溶物沉淀在柱子中。日常使用后，可用强溶剂冲洗色谱柱。例如：ODS柱每天使用完后，可用乙腈冲洗色谱柱，以除去柱子中强吸收的样品。（5）溶剂的条件1）HPLC等级（水：18兆欧）2）粘度低3）溶剂的可混合性4）不可以改变固定相5）溶解性6）透过波长下限2.3.4标准曲线的制作（三级标题小四号黑体，段前0行，段后0行）（正文部分宋体，字号体小四，行距固定值20磅，段落首行缩进2字符）2.3.5色谱条件色谱柱：C18柱（250mm*4,6m）流动相：0.02mol/L乙酸铵：甲醇=15:85流速：1.0ml/min柱温：30℃检测波长：230nm进料量：10微升2.4结果分析2.4.1药物的液相色谱图柠檬水绿茶2.4.1药物标准曲线2.4.2添加回收率苯甲酸峰面积标准曲线对应浓度山梨酸峰面积标准曲线对应浓度0.0002151.46050.3067593680.000212.25710.0023118920.000458.00260.1182829830.000414.96320.002350050.000827.87120.0575170410.000828.91310.0025467520.5ml苯甲酸添加回收率=0.306759368/0.0002*100%=153379%1ml苯甲酸添加回收率=0.118282983/0.0004*100%=29570%2ml苯甲酸添加回收率=0.057517041/0.0008*100%=7189%0.5ml山梨酸添加回收率=0.002311892/0.0002*100%=1156%0.5ml山梨酸添加回收率=0.00235005/0.0004*100%=587.5%2ml山梨酸添加回收率=0.002546752/0.0008*100%=318.3%2.4.3样品中药物浓度检测结果结果分析：由于理论回收率范围在80%~120%,但是实验结果均不符合要求，所以实验失败。3实训小结与心得HPLC是非常重要的药物分析检测仪器，掌握HPLC的工作原理，熟练对其进行操作，是我们制药专业的学生必备的一项技能。实训两天，时间有限，虽说不能熟练操作HPLC，但是在廖老师耐心认真地讲解下，我还是掌握了一些简单的操作。在实验等待时间，廖老师给了我们很多生活学习方面的指导，也让我受益匪浅。同时，由于系统问题和我们操作的问题，延长了试验时间，廖老师忍受着疲惫和饥饿在那边一直在那边指导我们，这种敬业的精神和对学生的负责态度让我们十分感动和感激。实验方面：熟练进行了称量、配置溶液、调ｐＨ值、定容等操作，但是也暴露出一些问题，例如调pH值时，没有耐心的一滴一滴加NaOH,导致过碱，因此重新配制溶液，浪费了时间和精力。不管事做实验还是其它事，一定要脚踏实地，切不可急于求成，否则只会徒增烦恼，欲速则不达。定容时，为了省事，没有进行检漏，在混匀时有少量液体损失。虽然，在这次实验中，没有什么影响，但是其它实验就不一定了，因此必须有严谨的态度，不可偷工减料。对于HPLC,掌握了其原理，了解装置的各个部分，掌握了一些简单的操作以及操作中应该注意的问题。但是由于时间有限，对一些操作还是不够熟练。建议以后学院以后加大实验设备的投入，多设实验课程，让指导老师更好的知道我们操作实验仪器，增强我们的实验技能，更好的走上工作岗位。其他：廖老师给我们讲了很多她的生活感悟，其中我感受最深的是：自信的说自己是福建农林大学植物保护学院制药工程系的。虽然说，我们不是985、211高校，但是只要我们努力认真地学习生活工作，在大学期间学好我们的专业课知识掌握实验技能，努力提升各方面的素质，我们没有什么比别人差。有一句话我很喜欢——再“垃圾”的大学