中药制剂的鉴别技术-中药制剂的理化鉴别

中药制剂的鉴别技术－分光光度鉴别法鉴别中药制剂目录

基础知识1必备知识2拓展知识3紫外-可见分光光度法：中药制剂中有些化学成分在可见紫外光区有选择性吸收，显示特征吸收光谱，在一定条件下利用这些吸收光谱的特征，以鉴别制剂中的某些成分。基础知识一、紫外-可见分光光度法测定方法规定吸收波长法对照品对比法规定吸收波长和吸光度比值法多溶剂光谱法必备知识二、注意事项：分光光度计应进行准确度检定后使用；使用配对吸收池，若使用不配对吸收池，应在所测量波长范围内进行基线校正；设定的参数应合理；测定时应将样品室盖关严。必备知识紫外-可见分光光度法实例：1、规定吸收波长法：样品经适当处理后，测定吸收光谱，在一定波长处有最大吸收。复方丹参滴丸中丹参的鉴别：在283nm的波长处有最大吸收。拓展知识紫外-可见分光光度法实例：2、对照品对比法：取对照品或对照药材及供试品经处理后，制成对照品及供试品溶液，分别测定吸收光谱，比较二者吸收光谱的一致性。大山楂丸的紫外光谱鉴定：样品与山楂对照品在280±2nm处皆有最大吸收，在254±4nm处皆有最小吸收。大山楂丸的紫外光谱拓展知识中药制剂的鉴别技术－高效液相色谱法鉴别中药制剂目录

基础知识1必备知识2拓展知识3

高效液相色谱法（HPLC）主要是比较化合物与对照品在同一色谱条件下，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，对样品进行定性鉴别。特点：高速、高效、高灵敏度、应用广泛；较少单独用于定性鉴别，多与含量测定结合进行；指纹图谱鉴别正在逐渐增多。基础知识利用保留值作为定性参数；利用在样品中加入对照品，通过峰值增高来确认；利用LC-MS联用仪，通过被分离物的质谱图与谱库的谱图对比来定性；利用二极管阵列检测器给出UV光谱与对照品相比较，结合保留时间来确认。一、高效液相色谱鉴别法方法必备知识高效液相色谱仪十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（C18）微孔滤膜（0.45μm）紫外检测器等流动相（甲醇-水、乙腈-水等）二、仪器与试剂必备知识开机前准备：根据需要选择合适的色谱柱，在容器中放入已滤过脱气好的流动相，把吸滤头放入容器中开机：打开仪器的电源开关，仪器自检通过后，打开色谱工作站设置仪器参数样品分析与数据采集：待色谱柱平衡，基线稳定后，设置好样品信息，开始样品分析与数据采集报告输出关机：冲洗色谱柱，排出流路中可能存有的缓冲液，并用水冲洗泵的柱塞杆；泵停止，退出工作站，关闭仪器电源，在记录本上记录使用情况三、操作方法必备知识进样前，色谱柱应用流动相充分冲洗平衡，待压力基线稳定后方可进样。流动相需经脱气用微孔滤膜（0.45μm）滤过，才可使用，打开冲洗键进行泵排气。测试溶液需用微孔滤膜（0.45μm）滤过。使用键合硅胶柱，流动相的pH应控制在2～8，否则色谱柱易损坏。操作完毕，应先后用水和甲醇充分冲洗液路系统，尤其是使用了含盐的流动相，更应充分冲洗。四、注意事项必备知识比较供试品与对照品色谱图，供试品呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，则判断为符合药品标准规定。五、检验记录与结果判断必备知识液相色谱鉴别法实例：四君子丸中甘草酸和六味地黄丸中芍药苷的鉴别甘草酸HPLC图芍药苷HPLC图拓展知识

HPLC主要是比较化合物与对照品在特定的色谱柱上的色谱行为，采用保留时间比较的方法。一般较少单独用于定性鉴别，多与含量测定结合进行。拓展知识中药制剂的鉴别技术－化学反应法鉴别中药制剂目录

基础知识1必备知识2拓展知识3

中药制剂的理化鉴别是利用制剂所含化学成分的理化性质，如通过化学反应法、光谱法和色谱法等分析方法和技术检测有关成分是否存在，从而判断制剂的真伪。应用注意：

1.处方分析，首选主药、辅药、贵重药和毒性药作为鉴别重点；2.排除干扰，可采用阴性和阳性对照。基础知识化学反应鉴别法是利用化学试剂与制剂中的指标成分发生化学反应，根据所产生的颜色、沉淀或气体等现象，来判断某些药味或成分的有无，并以此鉴别制剂真伪的方法。基础知识一、操作方法1、供试液的制备固体制剂：适当的溶剂提取；液体制剂：直接取样检识或经有机溶剂萃取分离后检测。2、操作方法试管反应：取供试液于试管中，加入试剂或试药进行反应；蒸发皿或坩埚：供试液置蒸发皿或坩埚中，挥去溶剂，滴加试剂于残留物进行检识。必备知识二、注意事项避免附加成分的干扰：如注射剂、颗粒剂及糖浆剂；慎重使用专属性不高的分析反应：如泡沫反应、三氯化铁显色反应；对样品进行分离、精制：除去干扰分析反应的物质，借此改善鉴别方法的专属性；采用阴性及阳性对照方式，对拟定的鉴别方法进行反复验证：防止出现假阳性。必备知识实例——大山楂丸的化学鉴别操作(鉴别山楂的黄酮类成分)本品由山楂、六神曲（麸炒）、麦芽（炒）制成的大蜜丸。取本品9g，切碎，加乙醇40ml，置水浴上加热回流10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，加热使溶解，加正丁醇15ml振摇提取，分取正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，滤过。取滤液1ml，加少量镁粉与盐酸2～3滴，加热4～5分钟后，即显橙红色。拓展知识中药制剂的鉴别技术－气相色谱法鉴别中药制剂目录

基础知识1必备知识2拓展知识3

适用范围：含有挥发油或挥发性成分的制剂；大分子或不挥发性成分可分解或制成衍生物。

原理：利用保留值进行鉴别，即在同一色谱条件下，供试品应呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，对样品进行定性鉴别。基础知识分别以试样和标准物进样分析——各自的色谱图；对照：如果试样中某峰的保留时间和标样中某峰重合，则可初步确定试样中含有该物质；通过在样品中加入标准物，看试样中哪个峰增加来确定。一、鉴别方法必备知识气相色谱仪：载气源（氢气、氮气或氦气作为载气）进样系统色谱柱（填充柱或毛细管柱）柱温箱检测器（氢火焰离子化检测器、电子捕获检测器等）温度控制系统数据处理系统二、仪器必备知识色谱系统适用性试验：药品标准规定的理论板数（n）分离度（R）应大于1.5信噪比应不小于10（定量测定时）或不小于3（定性测定时）峰面积相对标准偏差（RSD）或平均校正因子相对标准偏差（RSD）均不应大于2.0%除另有规定外，拖尾因子（T）应在0.95～1.05之间。配制对照品和供试品溶液，在同一色谱条件下，分别进样，绘制相应的色谱图。三、操作方法必备知识四、测定注意事项先通载气，再加热；进样时，注射器操作应快速；一般色谱图应于30分钟内记录完毕；测试完毕，先关闭各加热电源以及氢气和空气开关，待检测器和柱箱温度降100℃以下时，关闭载气。必备知识五、检验记录与结果判断必备知识五、检验记录与结果判断比较供试品与对照品色谱图，供试品呈现与对照品保留时间相同的色谱峰，则判断为符合药品标准规定。气相色谱鉴别法实例——安宫牛黄丸中麝香的鉴别

【处方】牛黄、水牛角浓缩粉、麝香、珍珠等11味药材制备而成【鉴别方法】供试品：环己烷提取液对照品：麝香酮固定相：苯基（50％）甲基硅酮（OV-17）为，涂布浓度为9％柱长：2m柱温：210℃拓展知识中药制剂的鉴别技术－升华法鉴别中药制剂

基础知识1必备知识2拓展知识3一、升华鉴别法概述

利用中药制剂中所含的某些化学成分，在一定温度下能升华的性质，获得升华物，根据升华物的理化性质进行鉴别的方法。二、升华物的鉴别方法主要有利用显微镜观察晶型；

可见光下观察颜色；紫外灯下观察荧光；加入合适的试液与其发生显色反应或荧光反应。基础知识微量升华法：金属片上放一金属圈，圈内放置药材粉末，圈上覆盖载玻片，在石棉网下用酒精灯缓缓加热，至载玻片上有升华物凝集。将载玻片反转后，置显微镜下观察结晶形状、色泽，或取升华物加试液观察反应。微量升华装置必备知识升华鉴别法注意事项：制剂中若有2种以上的药味都含有升华物，升华的温度不同，可控制加热的温度分段收集升华物，分别进行鉴定；样品粉末用量一般约0.5g，过少不易产生足够量的升华物；可在载玻片上滴加少量水降温，促使升华物凝集析出；

无金属片，可用载玻片代替。必备知识

升华鉴别法实例——牛黄解毒片中冰片的鉴别

【处方】人工牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草。【鉴别方法】取本品1片，研细，进行微量升华，所得的白色升华物，加新制的l％香草醛-硫酸溶液1～2滴，液边缘渐显玫瑰红色。冰片升华物冰片升华物显微观冰片升华物显色拓展知识作者：八音魔琴中药制剂的化学反应鉴别●中药制剂检查●中药制剂鉴别●中药制剂含量测定贰壹目录基础知识方法精诚制药

本草济民概述中药制剂的鉴别是利用一定的方法来确定中药制剂中原料药的组成，从而判断该制剂的真伪。主要内容包括性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别。《中国药典》各品种项下的鉴别试验方法，仅适用于贮藏在有标签容器中的药物，用以证实是否为其所标示的药物。中药制剂的理化鉴别是利用制剂所含化学成分的理化性质，如通过化学反应法、光谱法和色谱法等分析方法和技术检测有关成分是否存在，从而判断制剂的真伪。(一)、概念一、基础知识（二）应用注意1处方分析，首选主药、辅药、贵重药和毒性药作为鉴别重点；2排除干扰，可采用阴性和阳性对照。一、基础知识化学反应鉴别法是利用化学试剂与制剂中的指标成分发生化学反应，根据所产生的颜色、沉淀或气体等现象，来判断某些药味或成分的有无，并以此鉴别制剂真伪的方法。1.概述二、方法2.操作方法二、方法（1）供试液的制备固体制剂：适当的溶剂提取；液体制剂：直接取样检识或经有机溶剂萃取分离后检测。（2）操作方法试管反应：取供试液于试管中，加入试剂或试药进行反应；蒸发皿或坩埚：供试液置蒸发皿或坩埚中，挥去溶剂，滴加试剂于残留物进行检识。避免附加成分的干扰：如注射剂、颗粒剂及糖浆剂；慎重使用专属性不高的分析反应：如泡沫反应、三氯化铁显色反应；对样品进行分离、精制：除去干扰分析反应的物质，借此改善鉴别方法的专属性；采用阴性及阳性对照方式，对拟定的鉴别方法进行反复验证：防止出现假3.注意事项二、方法本品由山楂、六神曲（麸炒）、麦芽（炒）制成的大蜜丸。取本品9g，切碎，加乙醇40ml，置水浴上加热回流10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，加热使溶解，加正丁醇15ml振摇提取，分取正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇5ml使溶解，滤过。取滤液1ml，加少量镁粉与盐酸2～3滴，加热4～5分钟后，即显橙红色。4.实例大山楂丸的化学鉴别操作(鉴别山楂的黄酮类成分)二、方法中药制剂的升华鉴别利用中药制剂中所含的某些化学成分，在一定温度下能升华的性质，获得升华物，根据升华物的理化性质进行鉴别的方法。一、升华鉴别法概述升华物的鉴别方法主要有：利用显微镜观察晶型；可见光下观察颜色；紫外灯下观察荧光；加入合适的试液与其发生显色反应或荧光反应。操作方法微量升华法、坩埚法或蒸发皿法。微量升华法：金属片上放一金属圈，圈内放置药材粉末，上覆盖载玻片，在石棉网下用酒精灯缓缓加热，至载玻片上有升华物凝集。将载玻片反转后，置显微镜下观察结晶形状、色泽，或取升华物加试液观察反应。微量升华装置二、方法制剂中若有2种以上的药味都含有升华物，升华的温度不同，可控制加热的温度分段收集升华物，分别进行鉴定；样品粉末用量一般约0.5g，过少不易产生足够量的升华物；可在载玻片上滴加少量水降温，促使升华物凝集析出；无金属片，可用载玻片代替。二、方法

升华鉴别法注意事项：升华鉴别法实例——牛黄解毒片中冰片的鉴别【处方】人工牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草。【鉴别方法】取本品1片，研细，进行微量升华，所得的白色升华物，加新制的l％香草醛-硫酸溶液1～2滴，液边缘渐显玫瑰红色。冰片升华物冰片升华物显微观冰片升华物显色二、方法中药制剂的荧光鉴别荧光鉴别法是利用制剂中某些成分在可见光或紫外光照射下可发射荧光或经其他方法处理后产生荧光的特性进行中药制剂鉴别的方法。一、概述取制剂的提取液点在滤纸上或加入蒸发皿中，置紫外光灯下观察所产生的荧光。必要时可在供试品中加酸、碱或其他试剂，再观察荧光及其变化。UV二、荧光鉴别操作方法荧光强度较弱，故一般需在暗室中观察荧光；供试液一般用毛细管吸取，少量多次点在滤纸上，使斑点集中且具有一定浓度；紫外光对人的眼睛和皮肤有损伤，操作者应避免与紫外光较长时间接触；试验时，一般将供试品置于紫外光灯下约10cm处观察所产生的荧光。紫外光波长一般为365nm，如用254~265nm波长观察荧光，应加以说明。操作注意事项二、荧光鉴别操作方法荧光鉴别法实例——安神补脑液的荧光鉴别【鉴别方法】取本品5ml，加氢氧化钠试液2.5ml、铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强烈振摇2分钟，放置使分层，溶液置紫外光灯（365nm）下观察，正丁醇层显蓝色荧光，加酸使成酸性，荧光即消失，再加碱使成碱性，荧光又显出。二、荧光鉴别操作方法操作注意事项中药制剂的薄层色谱鉴别法薄层色谱法是将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层，在同一块薄层板上点加供试品和对照品，在相同条件下展开，显色剂显色，检出色谱斑点，对比供试品与对照品的色谱图进行定性鉴别。一、概述仪器与材料二、薄层色谱鉴别法方法涂布器点样器展开箱显色与检测仪器薄层板及固定相（1）薄层板具有一定机械强度、化学惰性、耐一定温度、表面平整、厚度均匀，价格合理，常用为玻璃板。玻璃板的常用规格：5×20cm、10×20cm、20×20cm，要求光滑、平整、洗净后不附水珠、干燥。仪器与材料二、薄层色谱鉴别法方法硅胶：常用极性吸附剂，具表面活性中心，略带酸性；氧化铝：常用极性吸附剂，具表面活性中心，略带碱性；硅藻土：中性吸附剂；纤维素：液-液分配色谱担体（水为固定液），具一定粘性；聚酰胺：特殊有机薄层材料。二、薄层色谱鉴别法方法（2）固定相硅胶G(含粘合剂煅石膏)，GF254(含254nm荧光剂)，硅胶H(不含粘合剂)，硅胶HF254二、薄层色谱鉴别法方法（3）涂布器有手工、半自动、全自动薄层涂布器常用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器微升毛细管全自动点样器手动点样器二、薄层色谱鉴别法方法（4）点样器材上行展开可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭；水平展开用专用的水平展开缸。二、薄层色谱鉴别法方法（5）展开箱显色有喷雾法及浸渍法喷雾瓶薄层色谱数码相机成像系统二、薄层色谱鉴别法方法（6）显色与检测仪器薄层色谱鉴别法操作方法二、薄层色谱鉴别法方法制板供试液及对照液的制备点样展开显色与检视

2、操作方法（1）制板铺制薄层板二、薄层色谱鉴别法方法薄层色谱鉴别法操作方法市售薄层板：临用前，110℃活化30min聚酰胺薄膜不用活化自制薄层板一份固定相三份水（或含有黏合剂的水溶液）研磨混匀涂布器自然干燥用前活化二、薄层色谱鉴别法方法2、操作方法（2）点样注意：点样时勿损伤薄层表面展开剂的制备：新鲜配制展开：点样后的薄层板放入加有展开剂的层析缸中，密闭，一般上行展开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规定展距后立即将薄层板取出，晾干，以备检测。展距：一般8～15cm，高效板5～8cm预吸附中展开中薄层色谱鉴别法操作方法2、操作方法（3）展开喷雾显色法荧光显色法薄层色谱鉴别法操作方法2、操作方法（4）显色与检视显色：喷雾法或浸渍法荧光淬灭法的GF254薄层板日光检视荧光淬灭斑点紫外光365nm或254nm下检视薄层色谱鉴别法操作方法2、操作方法（4）显色与检视制备薄层板应清洁干燥后制板；3、薄层色谱鉴别法注意事项预制薄层板选择符合要求的产品；使用新鲜溶剂配制展开剂；配制多元展开剂时，各种溶剂应分别量取后再混合。薄层色谱鉴别法实例：

首乌丸的薄层色谱鉴别提取方法：甲醇提取固定相：硅胶G+0.5%NaOH展开剂：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15:2:1）1、大黄素2、大黄素甲醚3-4、何首乌对照药材5、首乌丸首乌丸的薄层色谱3、薄层色谱鉴别法注意事项中药制剂的分光光度鉴别法紫外-可见分光光度法中药制剂中有些化学成分在可见紫外光区有选择性吸收，显示特征吸收光谱，在一定条件下利用这些吸收光谱的特征，以鉴别制剂中的某些成分。1、概述紫外-可见分光光度法2、紫外-可见分光光度法测定方法规定吸收波长法对照品对比法规定吸收波长和吸光度比值法多溶剂光谱法紫外-可见分光光度法注意事项：分光光度计应进行准确度检定后使用；使用配对吸收池，若使用不配对吸收池，应在所测量波长范围内进行基线校正；设定的参数应合理；测定时应将样品室盖关严。紫外-可见分光光度法紫外-可见分光光度法实例：（1）规定吸收波长法：样品经适当处理后，测定吸收光谱，在一定波长处有最大吸收。复方丹参滴丸中丹参的鉴别：在283nm的波长处有最大吸收。复方丹参滴丸紫外光谱图紫外-可见分光光度法紫外-可见分光光度法实例：（2）对照品对比法：取对照品或对照药材及供试品经处理后，制成对照品及供试品溶液，分别测定吸收光谱，比较二者吸收光谱的一致性。大山楂丸的紫外光谱鉴定：样品与山楂对照品在280±2nm处皆有最大吸收，在254±4nm处皆有最小吸收