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液相色谱根底知识WatersLCSchool培训教材蒸馏离心电泳过滤超滤色谱常见的分别方式色谱法的分类HPLC分别的机理典型的仪器配置液相色谱的运用〔一〕“分析型液相色谱〞定性及定量分析灵敏度的要求样品的复杂性样品量的要求精度及准确度的要求容易运用液相色谱的运用〔二〕“制备型液相色谱〞分别及纯化化合物的稳定性样品的复杂性制备量的要求纯度的要求,及纯度的鉴定方法的平安性开发液相色谱方法问题∶什么样的分别结果是好的?分辨率?什么是色谱的分辨率?分辨率的公式:影响分辨率的要素:K’,a,N分辨率的方程∶k'是容量因子,表达了样品与柱填料的作用强弱。a是选择性系数,描画两化合物分别的好坏程度。是化学要素。N是实际塔板数,描画色谱峰的谱带展宽程度。色谱柱的柱效N实际塔板数计算公式:W s 方法Wtan 16 切线法Wh 5.54 半峰高W3s 9 3sW4s 16 4sW5s 25 5sInjectInject用“切线〞法计算柱效不好的色谱柱的柱效反而比好色谱柱的要高,由于其拖尾部分测不出来GoodColumnBadColumnInjectInject用“5〞法计算柱效提高柱效的方法色谱柱本身减小填料的颗粒度找到最正确的流速(根据不同内径)适宜的温度降低溶剂的粘度添加柱长其他影响柱效的要素柱外效应衔接纳路进样器、检测器进样体积进样量容量因子k'改动k'值的方法∶调理流动相的极性、pH、离子强度等梯度淋洗与峰高的关系与R的关系选择性系数a定义∶a=1时两组分分不开,改动a的途径改动固定相改动流动相改动温度改动样品的本身性质a,k',N∶如何控制分辨率?液相色谱的检测方式灵敏度、选择性、及顺应才干色谱条件的优化开发液相色谱方法分辨率是色谱分别中主要思索的要素在开发色谱方法时,有很多要素是很重要的。除分辨率之外,以
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