测污水中的苯胺

高效液相色谱法测污水中的苯胺.实验目的1:了解高效液相色谱法的原理2：学习高效液相色谱仪的使用，了解色谱流出曲线的读法。.实验原理苯胺又称阿尼林、阿尼林油、氨基苯，分子式：C6H7N。无色油状液体。熔点一6.3r,沸点184°C,相对密度1.02(20/4°C),相对分子量93.128,加热至370°C分解。稍溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。具有强烈的毒性，对水体可造成污染。色谱法的分离原理：使混合物中各组分在两相中进行分配，其中一项不动，称为固定相，另一相携带混合物流过此。固定相的流体，称为流动相。各组分在不同相态的选择性分配，使其会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。高效液相色谱法是指流动相为液体的色谱技术。在经典的液体柱色谱法基础上，引入了气相色谱法的理论，在技术上采用了高压泵，高效固定相和高灵敏度检测器。经数据处理系统得到色谱图

保留时间（tR）保留体积（Vr）VR=tRUeUe保留时间（tR）保留体积（Vr）VR=tRUeUe常压和室温条件下柱出口处的载气体积流速死体积(Va)VA=tAUe调整保留时间(t’R)t’R=tR-tA调整保留体积(V’R)V’R=t’RUe定性分析:通过保留时间（指被测组分从进样开始到柱后出现浓度最大值所需时间）进行定性。苯胺的保留时间为6.01min定量分析：根据色谱峰的面积或者峰高可以进行定量分析三：实验仪器与试剂高效液相色谱仪及其配套仪器；1000mL分液漏斗；装有无水硫酸钠的漏斗；10mL离心管（带刻度）；25mL具塞比色管苯胺的标准储备液100mg/L（甲醇溶液）无水硫酸钠（在350^哄4h）氢氧化钠：1mol/L甲醇：色谱纯（进行色谱分析时使用的标准试剂，在色谱条件下只出现指定化合物的峰，不出现杂质峰。）氮气正已烷四：实验步骤水体中的酚类化合物对苯胺类化合物的分析检测有干扰，萃取时控制pH在lO〜11之间可消除干扰，其它化合物的干扰采用硅酸镁净化消除取水样100mL用1mol/L的氢氧化钠将水样pH值调至11〜12，加入5g氯化钠。将水样转入250mL的分液漏斗中，加入15mL二氯甲烷充分振摇5min（注意放气）静置30min，将有机相通过上面装有烘过的无水硫酸钠漏斗，接至25mL比色管中，重复萃取两次，合并有机相，将有机相分次转入离心管中，在25°C下用氮吹仪吹至近干，加入1.5mL甲醇，继续吹至溶液为1mL左右，用甲醇定容至2mL，待色谱分析用将样品移至装有活化的硅酸镁层析柱床的顶部，以适量正己烷洗净离心管并淋洗层析柱，再用甲醇淋洗层析柱，用50mL比色管接取40mL淋洗液，在25C下用氮吹仪吹至近干，加入0.5mL甲醇，继续吹至溶液为1mL以下，用甲醇定容至1mL，待色谱分析用。以20%甲醇+80%水作为流动相，流速1.5mL/min，用ZORBAXEclipseXDB—C18作为色谱柱（柱温30C），254nm为检测波长，进样体积10uL，6.01min定性分析，外标法定量用苯胺储备液和配置成苯胺0.2、0.5、0.8、1.0、1.5、2.0（ug/mL）的标准混合溶液,6.01min定性，峰面积定量。制作标准曲线高效液相仪操作步骤1） .过滤流动相，用0.45um滤膜。2） 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3） 打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。4） 进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5） 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用流速1.5mL/min，点击on，走基线，观察基线的情况。设计走样方法。点击file，选取selectusersandmethods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击newmethod。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。.进样和进样后操作。选定走样方