第十章维生素类药物的分析

第十章维生素类药物的分析

Analysisofvitamins

概述一、概念维生素1）维持人体正常代谢功能所必需的一类微量的生物活性物质，主要用于机体的能量转移和代谢调节。2）大多数人体内不能自行合成,必须从食物中摄取。CompanyLogoHotTip二、化学结构：醇、酯、酸、胺、醛，酚三、分类脂溶性维生素:VitA、D2、D3、E、K1

水溶性维生素:VitB族(B1、B2、B6、B12)

VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺CompanyLogo

四、分析方法1.生物法

2.微生物法3.化学法4.物理化学法CompanyLogo第一节维生素A（VitaminA）的分析

维生素A1活性最高，维生素A2的生物活性是维生素A1的30-40%，维生素A3的生物活性是维生素A1的0.4%，故通常所说的维生素A系指维生素A1。CompanyLogo第一节维生素A（VitaminA）的分析来源1）天然产物主要来源于鲛类无毒海鱼肝脏中提取的脂肪油,即鱼肝油。从鱼肝油提取的VA多为各种酯类的混合物，其中主要为醋酸酯和棕榈酸酯。2）人工合成产物全反式维生素A醋酸酯《中国药典》收载的VA是人工合成的VA醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液，其制剂有VAD胶丸和VAD滴丸。CompanyLogo药典收载情况VA及醋酸酯棕榈酸酯混合物的食用油溶液。人工合成的VA醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液，其制剂有VAD胶丸和VAD滴丸。浓缩VA油混合物Ch.PUSPBPCompanyLogo第一节维生素A（VitaminA）的分析一、结构和性质（一）结构H维生素A醇-COCH3

维生素A醋酸酯-COC15H31

维生素A棕榈酸酯CompanyLogo环己烯共轭多烯侧链

存在多种立体异构化合物具有UV吸收易发生脱氢、脱水、聚合反应CompanyLogo

（二）性质1。性状AddYourText2。稳定性3。紫外吸收特性AddYourText4。与三氯化锑呈色TextCompanyLogoO2H+重排[O][O]VA酸VA醛呋喃型氧化物（无生物活性）CompanyLogoH+++-H去水VA（VA3）烯丙型醇遇酸易发生脱水反应CompanyLogo二、鉴别反应CHCl3反应机理：VA与三氯化锑(SbCl3)中存在的亲电试剂氯化高锑（SbCl5）作用形成不稳定的蓝色正碳离子。注意事项：反应需在无水、无醇条件下进行。水可使SbCl3水解成SbOCl乙醇可与正碳离子作用，使正电荷消失溶剂：饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液CompanyLogo2、紫外吸收特征去水维生素A（A3）：6个共轭双键，其最大吸收波长向红移，在340～390nm波长间出现3个最大吸收峰(348、367、389nm)。维生素A：5个共轭双键，其无水乙醇液在326nm波长处有最大吸收。CompanyLogo3、薄层色谱法BP

USP薄层板：硅胶G硅胶展开剂：环已烷-乙醚（8：2）显色剂：三氯化锑磷钼酸现象：蓝色斑点

蓝绿色斑点CompanyLogo

三、含量测定1紫外-可见分光光度法2

比色法3

高效液相色谱法CompanyLogo（一）紫外-可见分光光度法利用维生素A醇和其醋酸酯分子中具多烯共轭体系结构，在325～328nm处有选择性吸收峰，故可进行含量测定CompanyLogo三点校正法——三波长测定法（1）原因（2）原理CompanyLogo<1>

1VitA的max（328nm）<2>

2和3

在

1的两侧各选一点

(3)波长选择

等波长差法：

1-2=3-1

等吸收比法：A2=A3=6/7Amaxeg:《中国药典》中测定VA醋酸酯，1=328nm、2=316nm、3=340nmeg:《中国药典》中测定VA醇，

1=325nm、2=310nm、3=334nmCompanyLogo(4)测定方法测定对象

VA醋酸酯（纯度较高）第一法（直接测定法）

max在326-329nm之间，且分别计算5个波长处的差值均不超过±0.02，直接用测得的A328，用下述公式计算含量标示量%=A328×D×1900×w/(W×100×L×标示量)×100%—等波长差法300、316、328、340、360nmCompanyLogo最大吸收波长是否在326-329之间是否计算吸收度比值之差是否超过±0.02第二法（皂化）是否计算A328（校正）A328CompanyLogo

-15%-3%03%

皂化

A328（校正）A328皂化计算A值(一个或几个超过±0.02)CompanyLogo5、生物效价及换算因数

1IU的VitA=0.300ug的全反式维生素A醇

=0.344ug的全反式维生素A醋酸酯（1）生物效价的定义维生素A含量是用生物效价表示单位IU/g（国际单位）

生物效价（IU/g）=吸收系数×换算因数

CompanyLogo（2）换算因数的计算1g维生素A醋酸酯相当的维生素A的国际单位数为

1g维生素醇相当的维生素A的国际单位数为

CompanyLogo(VitA酯)(VitA醇)换算因子=IU/g/CompanyLogo1、判断法选择AA测定或A校正2、求

3、计算效价

（3）计算CompanyLogo制剂——VitA胶丸的含量计算CompanyLogo

第二法（皂化法）用醇制氢氧化钾加热皂化（水解），用乙醚提取，挥干溶剂，残渣用异丙醇溶解，测定含量。

测定对象

VitA醇

等吸收比法300、310、325、334nmCompanyLogo最大吸收波长是否在323-327之间是否A300/A325是否超过0.73色谱法纯化是否计算A325（校正），或A值CompanyLogo计算A值03%－3%CompanyLogo（二）三氯化锑比色法（三）高效液相色谱法CompanyLogo思考题1）三点校正紫外分光光度法测定维生素A含量的依据（原理）是什么？2）三点校正紫外分光光度法测定维生素A醋酸酯含量时，校正公式是什么？换算因子是多少？写出测定其胶丸含量时标示量%的计算式。CompanyLogo氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)第二节维生素B1的分析氨基嘧啶环噻唑环UV（一）结构一、结构与性质还原性CompanyLogo1、溶解性易溶于水；微溶于乙醇；不溶于乙醚2、硫色素反应（二）性质3、紫外吸收特性4、与生物碱沉淀试剂反应5、氯化物特性CompanyLogo二、鉴别试验（一）硫色素反应（二）生物碱沉淀反应（三）与硝酸铅的反应（四）氯化物反应

VitB1+NaOH

共热

Na2SNa2S+Pb(NO3)2PbS2（黑色）CompanyLogo硫色素反应（鉴别与含量测定）硫色素反应为VitB1的专属反应原理NaOH环合［Ｏ］环合CompanyLogo鉴别试验CompanyLogoH+H+H+VitB1与生物碱沉淀试剂的反应（鉴别）H+CompanyLogo（一）非水溶液滴定法（原料药）

三、含量测定原理

利用噻唑环上季铵和嘧啶环上氨基的弱碱性，在非水溶液中用高氯酸液滴定。CompanyLogo（二）紫外吸收（鉴别与含量测定）

VitB1分子结构中具共轭双键，在紫外区246nm处有最大吸收，可进行鉴别与含量测定。原

理差示分光光度法？CompanyLogo差示吸光光度法目的：提高光度分析的准确度和精密度解决高(低)浓度组分(i.e.A在0.2-0.8以外)问题分类：高吸光度差示法、低吸光度差示法、 精密差示吸光度法特点：以标准溶液作空白原理：A相对=

A=bcx-bc0=bc准确度：读数标尺扩展,相对误差减少,

c0愈接近cx,准确度提高愈显著CompanyLogo计算公式：

取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维生素Ｂ125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液(9→1000)约70ml，振摇15分钟使维生素Ｂ1

溶解，加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，再加盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度，摇匀，照分光光度法在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数为421计算，即得。（二）紫外－可见分光光度法（维生素Ｂ1片剂）CompanyLogo（三）硫色素荧光法激发波长365nm发射波长435nm1、方法与计算对照液+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇+NaOH+铁氰化钾+异丁醇+NaOH+异丁醇供试液SdAb含量测定CompanyLogo2、特点①灵敏度高，线性范围宽②代谢产物不干扰，适用于体液分析CompanyLogo（三）高效液相色谱法（四）毛细管电泳法CompanyLogoL（+）－抗坏血酸（活性最高）D（-）－异抗坏血酸（为前者5%）L（+）－异抗坏血酸（无活性）D（-）－抗坏血酸（无活性）第四节维生素C的分析一、结构与性质(一）结构两个手性碳原子，有四个光学异构体二烯醇强还原性弱酸性（一元酸）CompanyLogo