常用细胞培养技术 培养细胞观察

2023/10/271培养细胞的特性及观察2023/10/272一、培养细胞的生长方式和类型2023/10/272023/10/273二、培养细胞的形态形态:多种多样，如呈圆形、椭圆形、正方形、柱形、扁平形、梭形、星形和多边形等．2023/10/272023/10/274（一）贴壁型生长细胞能附着于底物表面生长的细胞；必须贴附于底物表面才能生长的称为贴壁或锚着依赖性细胞。体内的大多数细胞属于贴壁依赖性细胞。2023/10/272023/10/275贴壁生长细胞形态上大致分为两种：上皮细胞型：形态：类似于上皮细胞，非真正上皮细胞。扁平多角形，胞核圆形，位于胞质中央。生长特点：紧密相连，互相衔接，连成片。2023/10/272023/10/2762023/10/272023/10/277成纤维细胞型类似体内成纤维细胞；有长短不等的细胞突起，梭型、三角形、扇形；细胞核椭圆形，位于细胞中央。生长特点：不紧靠，不连接成片排列成漩涡状、放射状或栅栏状。2023/10/272023/10/2782023/10/272023/10/2792023/10/272023/10/27102023/10/272023/10/27113、游走细胞型散在生长，不连成片胞质伸出伪足或突起活跃游走或变形运动，运动速度快、方向不规则。4、多形型细胞型：难以确定其形态，如神经细胞。2023/10/272023/10/2712注意体外培养细胞形态不是固定不变的受pH、营养、污染、细胞密度等影响上皮/成纤维细胞不能等同于体内细胞，指形态上与体内这两种细胞相似；形态类似的细胞可能来自不同组织。2023/10/272023/10/2713（二）悬浮型生长细胞无需附着物，悬浮状态生长，呈圆形/细胞团。（血液、骨髓、脾脏细胞）优点：生存空间大与培养基充分接触无需消化传代，利于大量生产。贴壁细胞经悬浮适应后也可长期悬浮培养。2023/10/272023/10/27142023/10/272023/10/27152023/10/272023/10/2716（三）半贴壁生长细胞部分贴壁，但不牢固,冲洗摇动即可脱壁；部分悬浮；无需消化传代。2023/10/272023/10/27172023/10/272023/10/2718了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH、是否变酸、变黄等。细胞常规检查观察的内容为：1）肉眼观察主要看培养液的颜色和透明度的变化三、培养细胞的生长状况观察2023/10/272023/10/2719正常培养液：7.2～7.4，桃红色清亮透明。随着细胞生长，代谢的酸性产物使培养液pH下降，颜色变浅、变黄。影响细胞生长，甚至造成退变死亡。所以：正常情况生长稳定的细胞2～3天换液一次；生长缓慢的细胞3～4天换液一次。2023/10/272023/10/2720注意加Hepes或5%CO2使pH稳定，利于细胞生长。细胞换液、传代后，培养液很快变黄，可能细菌污染或培养器皿不干净。贴壁细胞培养：若出现混浊，多为污染。悬浮培养的细胞：将瓶竖起静置1小时，培养基混浊为污染。2023/10/272023/10/27212）显微镜观察生长良好的细胞均质、明亮、透明度大、折光性强、轮廓不清衰老、生长状态不良轮廓增强，折光性变弱，细胞之间空隙增大胞质中出现空泡、脂