细胞培养准备 细胞培养准备1仪器设备

细胞培养准备1

仪器设备2023/10/271细胞培养室

设置和设备2023/10/2722023/10/2722023/10/273细胞培养的必备设施无菌室---目的防止微生物污染和有害因素的影响工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘。2023/10/2732023/10/274划分为更衣间、缓冲间和操作间2023/10/2742023/10/2752023/10/276定期灭菌清洁，严禁堆放杂物，每月检查菌落数，保证洁净度达10000级，超净台达到100级。使用前紫外灭菌30分钟以上，操作完毕清理，再紫外灭菌20分钟。仪器、平皿等应包扎严密，灭菌，已污染器材和培养基应停止使用。人员进无菌室前，须用肥皂或消毒液洗手，更换工作服，鞋，帽子，口罩和手套。2023/10/276无菌室使用规范2023/10/277物品，用75％酒精消毒外包装。如菌液洒在桌上或地上，应用5%石碳酸或3％来苏尔倾覆污染处至少30分钟，再处理。有菌液吸管、试管、培养皿等应5%来苏尔浸泡24小时后，冲洗。凡有活菌物品，必须经消毒后，才能冲洗，严禁污染下水道。2023/10/2772023/10/278细胞培养室的设置包括无菌操作区、孵育区、制备区、清洗区、消毒灭菌区、贮藏区2023/10/2782023/10/2792023/10/279细胞培养室2023/10/27102023/10/2710细胞培养设备2023/10/2711超净台的使用设在避免日光直射，洁净无尘房间；提前30分钟开启紫外灯；风机开启10-15min，除臭氧；75%酒精擦拭；用后，整理，75%酒精擦拭；紫外灭菌30min。2023/10/2711与生物安全柜的区别2023/10/27122023/10/2713恒温培养箱2023/10/2713电热恒温培养箱CO2培养箱2023/10/2714普通恒温培养箱的使用检查电源、电压；打开电源开关，调制所需温度；放入培养物；关好培养箱；注意指示温度是否与实际温度相符；培养物不能过满；2023/10/27142023/10/27152023/10/27152023/10/2716CO2培养箱的使用使用方法同上注意★

O2传感器是在饱和湿度下校正的，因此加湿盘必须时刻装有灭菌水（加新洁尔灭5ml/L）。超温报警灯亮，并发出尖锐报警声时，应关闭电源30分钟。钢瓶压力低于0.2MPa时应更换钢瓶。尽量减少打开玻璃门的时间。2023/10/27162023/10/2717长时间不用，清除水盘，打开玻璃门通风24小时后再关闭。定期消毒，75%酒精擦拭，不要碰撞传感器等部件。培养瓶盖不能过松或过紧，保证通气且不污染；2023/10/27172023/10/27182023/10/27182023/10/2719冰箱使用及注意事项常温冰箱：4℃

低温冰箱：-20℃

超低温冰箱：-70~-80℃

注意分组、做好编号保温及时清理2023/10/27192023/10/2720其他设备倒置显微镜电热鼓风干燥箱电子天平恒温水浴箱离心机压力蒸汽灭菌器液氮储存罐2023/10/27202023/10/2721倒置显微镜组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒普通显微镜：照明系统在载物台之下物镜在上；倒置显微镜：照明系统在载物台之上，物镜在下，用于观察培养的活细胞。

2023/10/27212023/10/27222023/10/2722比较放置平稳开电源，调光强；放培养瓶/皿；调至清晰物象；关机。2023/10/2723作用：干燥和干热灭菌灭菌要求：

160度90-120min灭菌时边升温边鼓风

60度时，停止鼓风；灭菌结束缓慢自然冷却。60度以下可开箱取出灭菌物物品堆积不能过挤橡胶制品不能灭菌着火？2023/10/2723干燥箱干燥：烘箱温度为105—120℃烘1h左右。2023/10/27241、放置平稳2、通电、打开开关3、放置称量纸4、平衡/调零5、左物右码6、不能用手拿砝码7、称量8、清理2023/10/27242023/10/2725离心机低速：每分钟几千转

高速：每分钟1-3万转

超速：每分钟3万转以上2023/10/27252023/10/27262023/10/27262023/10/27272023/10/27272023/10/27282023/10/27282023/10/27292023/10/2730离心机使用放置：平稳、坚固；平衡：离心管+管套平衡，对称放入离心机、盖盖子；通电，开开关，设定离心时间；缓慢加档至所需速度；★离心结束，速度旋钮回调至0；停转后，开盖，取出物品。严禁转动状态开盖；发现噪声大、震动，停机；2023/10/27302023/10/27312023/10/2731压力蒸汽灭菌器2023/10/2732使用及注意事项补水：高出电热管，低于支架；放置物品：包扎，摆放不能过密；加热：放出冷空气，有大量蒸汽喷出后，关闭阀门；灭菌：压力升至所需范围，计算灭菌时间，维持恒压，通常121.3度，15~30分钟即可关闭电源；自然冷却，压力表降至0，温度降至60℃以下，打开放气阀，打开盖子取物品。2023/10/27322023/10/2733注意液体装容器的3/4，不能密封，要排气；拧紧锅盖时，对称、均匀、逐步，不能漏气；2023/10/2733高压灭菌时，如何做到不密闭？2023/10/27342023/10/27352023/10/27352023/10/2736使用及注意事项★阴凉干燥处放置★只能使用配套瓶塞★注意防护，防止冻伤；★减少开罐次数；★检查液氮量，不低于冷藏物最高面，否则补充；细胞编号，放入冷冻盒，系上线，写上标签，悬于罐外。2023/10/27362023/10/27372023/10/2737加水，水位至少达电热管上方1cm处；接