微生物的培养技术及应用【知识精研+拓展提升】 高考生物一轮复习 课件

第41讲微生物的培养技术及应用课标：3.1获得纯净的微生物培养物，是发酵工程的基础3.1.1阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提3.1.2阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术3.1.3举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物3.1.4概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法资料１：酿酒加曲，是因为酒曲上生长有大量的微生物（主要为曲霉、根霉、酵母菌和细菌），还有微生物所分泌的酶（淀粉酶、糖化酶和蛋白酶等），它们可以将谷物中的淀粉、蛋白质等转变成糖、氨基酸。糖分在酵母菌的作用下，分解成酒精。酵母菌种类繁多，它们属于不同的科、属，具有不同的形态特征和生化特性。Q1:根据资料分析“客家酒曲”和“安琪甜酒曲”这两种酒曲中的酵母菌是否相同？

想要知道这两种酒曲中的酵母菌是否相同，你会开展哪些工作？请设计一个流程图。培养基配制灭菌倒平板接种和分离酵母菌培养酵母菌不同菌落的形状、大小、颜色等不同。菌落是鉴定菌种的重要依据。阅读教材P9-11，自主梳理下列问题对应的知识点（6分钟）1.在实验室培养微生物，需要？2.培养基的作用？实验室最常用的培养基？3.从物理性质方面，培养基分为？（二者区别）。从功能上分为？4.培养基的一般成分包括？牛肉膏蛋白胨培养基中的牛肉膏提供的主要营养是？蛋白胨提供的主要营养是？5.培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及O2的需求。如：在培养乳酸菌、霉菌、细菌时，分别需要？6.获得纯净的微生物培养物的关键是？消毒的概念、灭菌的概念7.消毒和灭菌工作主要包括哪两个方面？8.做好消毒和灭菌工作后，要注意？为避免微生物污染，接下来的许多操作都应该在哪里进行？9.常用的消毒方法及处理对象？常用的灭菌方法及处理对象？（11页）考点一：微生物的基本培养技术划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分用途不加凝固剂加凝固剂，如琼脂工业生产观察微生物的运动微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质工业生产培养基成分明确分类、鉴定允许特定种类的微生物生长,同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基培养、分离出特定微生物在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物天然培养基合成培养基固体培养基液体培养基半固体培养基选择培养基鉴别培养基1.培养基的分类a.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐①碳源：无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物②氮源：无机氮源：NH4＋、NO3-、NH3等有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源③无机盐：Ca、K、Mg为大量元素Zn、Cu、Mn、Co、Mo等微量元素凡是能够为微生物提供C、N等元素的营养物质。2.培养基的营养成分（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）还需满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的需求维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等举例说明：培养乳酸菌需要添加维生素培养霉菌时需将PH调至酸性，培养细菌时将PH调至中性或微碱性培养厌氧微生物时需要提供无氧条件表1-11000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成组分含量提供的主要营养牛肉膏5g碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10g氮源和维生素等NaCl5g无机盐H2O定容至1000ml水条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物，不能消灭芽孢和孢子煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源紫外线消毒法用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台。灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具(涂布器、接种环)、试管口或瓶口干热灭菌法玻璃器皿、金属用具湿热灭菌法培养基及容器(3)常用的灭菌、消毒方法比较3.无菌技术(1)目的：获得

。(2)关键：

。纯净的培养物防止杂菌污染易错辨析(1)培养基都必须添加水、碳源、氮源和无机盐()(2)在培养细菌时，要将培养基调至中性或弱酸性()(3)同一种物质不能既做碳源，有做氮源

(

)(4)碳源都能提供能量(

)(5)除水以外的无机物只能提供无机盐()(6)从物理状态来看，培养基不只液体培养基和固体培养基两种类型()(7)选择培养基可以鉴定某种微生物的种类

()(8)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源

（)(9)消毒和灭菌都能杀死所有微生物（）（10）消毒的原则是既杀死材料表面的微生物,又减少消毒剂对细胞的伤害（）（11）无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌

（

）（12）做好消毒和灭菌工作后，不用避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触

（

）√××√×××××××√1．(2019·高考江苏卷)下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是(

)A．培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧C．接种后的培养皿要倒置，以防培养污染D．菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基解析：接种环、涂布器需进行灼烧灭菌，A错误。2．培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是(

)①化学消毒法②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消毒法⑤湿热灭菌⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥

B．①②③④⑤⑥C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤AA

问题：1.无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？2.使用后的培养基应如何处理?还能有效避免操作者被微生物感染。灭菌后才能丢弃，以免污染环境。A．从用途看，该培养基属于选择培养基B．培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C．该培养基没有提供维生素等营养D．该培养基调节到合适的pH后就可以接种使用成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊红美蓝蒸馏水含量10g10g2g0.4g0.065g1000mL3．下表表示某培养基的配方，下列叙述正确的是(

)B真题再现：(2019·全国卷Ⅲ，37)回答下列与细菌培养相关的问题。(1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是__________________________________________。硝化细菌在没有碳源的培养基上________(填“能够”或“不能”)生长，原因是_______________________________________________。蛋白胨不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同能够硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源自养需氧型的硝化细菌能够降低水体中铵盐的浓度，对水体有一定的净化作用。请回答下列问题：（1）培养基中加入铵盐为硝化细菌的生长提供______________________，培养基中没有加入有机碳，从功能上看这种培养基属于________培养基。氮源选择(2017·全国卷Ⅰ，37)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_________。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是______________________________________________________，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是

(答出两点即可)。(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择________(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是________________________________________________________。(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有___________________________________________________(答出两点即可)。脲酶分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物尿素为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用为细菌生长提供无机盐离子，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH的稳定实验：酵母菌的纯培养明确概念：纯培养物、纯培养、单菌落①分离微生物的方法？分离过程中要用到哪些工具和材料？如何操作的？②调节pH在灭菌前还是灭菌后？如何对培养基和培养皿进行灭菌？③倒平板时，温度冷却至？在哪里进行操作？倒平板的具体步骤是？最后一步平板倒置的目的是？④利用平板划线法分离酵母菌的原理？⑤接种前、第2-5次划线前、划线结束后都需要灼烧接种环的目的分别是？⑥在作第二次及以后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因？⑥最后如何培养酵母菌？如何验证实验中有无杂菌污染？在接种酵母菌的培养基上，观察到了不同形态的菌落，说明？阅读教材P11-13，自主梳理下列问题对应的知识点（5分钟）1.实例——酵母菌的纯培养微生物群分散单个细胞单个菌落繁殖方法平板划线法稀释涂布平板法纯化原理接种工具单菌落的获得用途接种效果图相同点通过连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散将菌液进行一系列的等比稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养，以得到单菌落。接种环涂布器从最后划线区挑取稀释度合适的整个平板上都可找到单菌落分离纯化菌种，获得单菌落①分离纯化菌种，获得单菌落②用于计数①都能分离纯化菌种

②都在固体培养基上进行的平板划线法vs稀释涂布平板法易错辨析(1)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上。

()(2)倒平板时,应等培养基完全冷凝后，再翻转倒置（

）(3)平板划线法中每一次划线前要将接种环灼烧()(4)稀释涂布平板法操作时，只需要在涂布前灼烧涂布器(

)(5)对细菌进行计数只能采用稀释涂布平板法，而不能用平板划线法(

)(6)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

()(7)配制培养基时应先调pH再灭菌()(8)平板划线时最后一区域不要与第一区域相连

()(9)菌液的稀释度足够高时，培养基表面会获得单菌落（)(10)适于平板计数的菌落数范围为40～300（）(11)用稀释涂布平板法计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目少（）(12)用稀释涂布平板法计数时，平板上的一个菌落就是一个细菌

（

）√√×√××××××√30-300当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。显微镜直接计数法√冷却至50。C1、研究者从牛的瘤胃中筛选产生纤维素酶的纤维素分解菌，其筛选过程如图1所示。将丙中的菌悬液转接于含有稻草作碳源的固体培养基上培养，得到若干菌落后用刚果红处理(刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈)，看到如图2所示情况，下列有关叙述正确的是A．②过程是用涂布器取乙中的菌液并均匀地涂布在Ⅰ号培养基表面B．甲、乙试管中的液体都属于液体培养基，主要作用是稀释菌种C．Ⅰ号、Ⅱ号培养基都属于固体培养基，配制时先灭菌后调节pHD．可挑取图2中周围出现透明圈的菌落，用平板划线法继续纯化D移液管或移液枪先取0.1ML菌液滴在培养基上无菌水先调pH再灭菌2．鲸死亡后会沉入海底，俗称“鲸落”。“鲸落”后期会形成一个以厌氧菌和硫细菌等为主体的生态系统。厌氧菌以“鲸落”肌肉中的脂肪为食，同时产生一些硫化氢等硫化物。硫细菌将硫化物氧化成硫酸盐，并以该过程中释放的能量合成有机物。请回答相关问题：(1)培养微生物的培养基中一般都会含有水、无机盐、氮源和碳源，培养“鲸落”群落中厌氧菌的碳源必须是

____________________。要培养硫细菌，培养基中的成分需要特殊配制，主要体现在_________________________________________________，这种培养基可以用来专一性培养硫细菌，所以称为______培养基。(2)在分离“鲸落”中的微生物时要制备固体培养基，在倒平板操作后，将平板倒置，这样做的目的是_________________________________________________。含碳有机物(或脂肪)碳源必须是含碳无机物(或碳酸盐)，同时加入硫化物选择防止培养皿皿盖上凝结的水珠落入培养皿造成污染，防止培养基中的水分过快挥发(3)为了研究“鲸落”中含有微生物的情况，需将“鲸落”提取物加无菌水稀释，然后将稀释水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，这种方法称为________________。下面所示的四种菌落分布情况中，不可能由该方法得到的是________。(4)若想得到“鲸落”中某目标菌种，可用平板划线法进行纯化。若下图甲是接种培养后的菌落分布图，对应的平板划线操作示意图为________。图甲中的③更易获得单菌落，判断依据是_________________________________________。每次划线的菌种都来自上一次划线的末端，最后

一次划线结束时更容易获得单菌落稀释涂布平板法D丙3、某研究小组从黄色短杆菌(能合成L­亮氨酸)中筛选L­亮氨酸缺陷型(不能合成L­亮氨酸)突变菌株，实验流程如下图所示。回答下列问题：（1）培养基灭菌常用的方法是

。（2）过程①的接种方法是

。过程②接种时，先将灭菌后的金丝绒与培养皿A中的菌落接触一次，然后像盖印章一样将菌种连续接种到培养皿B和C的培养基表面，这种接种方法便于将来比较培养皿B、C中菌落的差异，原因是

。高压蒸汽灭菌法稀释涂布平板法培养皿B、C中的菌种接种位置相同3、某研究小组从黄色短杆菌(能合成L­亮氨酸)中筛选L­亮氨酸缺陷型(不能合成L­亮氨酸)突变菌株，实验流程如下图所示。回答下列问题：（3）培养皿A、B、C中的培养基都要使用固体培养基，原因是

。若培养皿B的培养基中含有L­亮氨酸，培养皿C的培养基中不含L­亮氨酸，培养一段时间后菌落生长情况如图所示，研究人员应该从培养皿

(填“B”或“C”)中选取目的菌落。便于观察菌落特征和分离目的菌株B4.（2022·广东·21）研究深海独特的生态环境对于开发海洋资源具有重要意义。近期在“科学号”考察船对中国南海科考中，中国科学家采集了某海域1146米深海冷泉附近沉积物样品，分离、鉴定得到新的微生物菌株并进一步研究了其生物学特性。回答下列问题：(1)研究者先制备富集培养基，然后采用_______________法灭菌，冷却后再接入沉积物样品，28℃厌氧培养一段时间后，获得了含拟杆菌的混合培养物，为了获得纯种培养物，除了稀释涂布平板法，还可采用___________法。据图分析，拟杆菌新菌株在以________________为碳源时生长状况最好。(2)研究发现，将采集的样品置于各种培养基中培养，仍有很多微生物不能被分离筛选出来，推测其原因可能是

。（答一点即可）(3)藻类细胞解体后的难降解多糖物质，通常会聚集形成碎屑沉降到深海底部。从生态系统组成成分的角度考虑，拟杆菌对深海生态系统碳循环的作用可能是________________

。(4)深海冷泉环境特殊，推测此环境下生存的拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶，除具有酶的一般共性外，其特性可能还有________________。高压蒸汽灭菌平板划线纤维素某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物质才能生存

拟杆菌作为分解者，将沉降到深海底部的难降解多糖物质分解为无机物，归还到无机环境中，有利于碳循环的顺利进行耐低温1、灭菌后的培养基先培养一段时间再接种，目的是：

。检验培养基灭菌是否合格2、接种后的培养基和未接种的培养基放在相同的条件下同时进行培养，目的是：

。3、每个稀释浓度下，宜设置3个平板作重复组，作用是：

。检验培养过程是否有杂菌污染为排除偶然因素对实验结果的干扰，保证实验结果的准确性2.微生物的培养与观察4、通过观察菌落的

可初步鉴定微生物的类型。形状、大小、隆起程度和颜色等24因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目每隔

h统计一次菌落数目，选取菌落稳定时的记录为结果，这样可以防止

。

尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素被土壤中某些细菌分解成NH3,再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。这些细菌之所以能分解尿素，是因为能合成脲酶，来催化尿素分解。问题1：如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，应如何设计培养基配方培养微生物，既能将土壤中分解尿素的细菌分离出来又可进行计数呢。请绘制含主要步骤的流程图？考点二：微生物的选择培养和计数土壤取样培养基的制备样品稀释.涂布平板培养、观察富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤选择培养基鉴别培养基实例：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1.在实验室中进行微生物的筛选的原理？2.什么是选择培养基？3.如何配置选择培养基将土壤中能分解尿素的细菌分离出来？为什么只有能分解尿素的微生物才能在该培养基上生长？4.稀释涂布平板法的具体操作步骤？细菌的最后的培养方法？5.为什么稀释涂布平板法可以统计样品中活菌的数目？6.为了保证结果准确，一般如何计数？（选30-300的菌落数的平板；至少3个平板重复计数，求平均值）7.为什么稀释涂布平板法统计的菌落数往往比活菌的实际数目少？8.除此之外，常用的直接利用显微镜进行直接计数的方法？9.（19页）细菌适宜生长在pH接近

的潮湿土壤中，绝大多数分布在距地表_____土壤层中。因此取样时一般要_____。10.测定土壤中细菌的数量，一般选用稀释倍数是？细菌一般的培养温度是？一般，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如？考点二：微生物的选择培养和计数阅读教材P16-19，自主梳理下列问题对应的知识点（6分钟）牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g蒸馏水定容到1000mlKH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000ml培养基一培养基二两种培养基中共有哪些成分？碳源、氮源、无机盐、水培养基一的碳源为_______，氮源为_______；培养基二的碳源为_______，氮源为_______；牛肉膏蛋白胨葡萄糖尿素从用途上来讲，哪个属于选择培养基？将得到何种细菌？培养基二属于选择培养基；其可获得能分解尿素的微生物。①.下列两个培养基有哪些共同点和不同点？1.选择培养基配方的设计原因：培养基添加尿素作唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素、缺乏氮源而不能生长发育繁殖。2.微生物的计数(1)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释后，将不同稀释度的菌液分

别涂布到琼脂固体培养基表面，进行培养。①系列稀释操作系列稀释：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应离酒精灯火焰1～2cm。操作过程如图：在火焰旁将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。取1ml上清液加入盛有9ml无菌水的试管中，依次等比稀释。该操作常用在将细胞接种到培养基之前，通过液体稀释的方法分散细胞，随着稀释倍数的增大，单位体积中的微生物细胞数量减少，细胞得以分散。序号图示操作1取0.1mL菌液，滴加到__________2将涂布器浸在盛有_____的烧杯中3将沾有少量酒精的涂布器在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布4用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使菌液__________培养基表面酒精涂布均匀2.微生物的计数稀释涂布平板划线法的操作步骤：系列稀释操作→涂布平板操作→培养③培养：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板______，放入30～37℃的____________中培养1～2d。每隔

统计一次菌落数目。倒置恒温培养箱24h3.微生物的计数方法比较计数方法直接计数法间接计数法计数原理主要用具显微镜、细菌计数板或血细胞计数板涂布器计数依据细菌个数培养基上菌落数优点计数方便、操作简单计数的是活菌计算公式每毫升原液含菌株数＝每小格平均菌株数×400×104×稀释倍数每克样品中的菌株数:(C÷V)×M

C:某稀释度下平板上生长的平均菌落数;V:涂布平板时所用的稀释液的体积(mL);M:稀释倍数缺点不能区分死菌与活菌当两个或多个菌体连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落结果比实际值偏大比实际值偏小A．3号试管的稀释倍数为1×103倍B．4号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数恰为5号试管的10倍C．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×108个D．该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要低例题：下图为“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验中样品稀释示意图。据图分析正确的是(

)(168＋175＋167)÷3÷0.1×105×100÷10＝1.7×109个1×104倍D1．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，对该实验有关叙述错误的是 (

)A．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233B．涂布了一个平板，统计的菌落数是230C．设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度D．统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，取其平均值作为该样品菌落数估计值解析：该实验中，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，求平均值，A、D正确；实验应设置对照实验和重复实验，排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度，B错误，C正确。答案：B

2．科学家从长期受到废弃油脂污染的淤泥中得到两种油脂降解菌A和B：回答下列问题：(1)科学家配置了NH4NO30.3%.KH2PO40.05%、K2HPO40.05%、MgSO40.02%、微量元素液和含废弃油脂等的培养基，从功能上来看，该培养基属于________培养基，加入KH2PO40.05%和K2HPO40.05%的目的是______________

。(2)如下图所示，科学家称取了5g淤泥样品，将其加入45mL无菌水中，进行梯度稀释，在5个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，5个平板上的菌落数分别为186、173、342、41、160个，则1g淤泥中的活菌数约为________个（保留小数点后两位）。用这种方法统计得到的数值往往________（填“偏大”或“偏小”）。为油脂降解菌提供无机盐；调节培养基的pH选择1.73×108偏小

（2）甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定该土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学在该浓度下涂布了1个平板，统计的菌落数为49；乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为43、54、287，然后取其平均值128作为统计结果。请评价这两位同学的实验结果是否有效，并说明理由。①甲同学的结果：_____________________________________________。②乙同学的结果：______________________________________________________。3.（1）现将从100mL含有产植酸酶菌的土壤样品溶液中取出的1mL样品溶液稀释104倍后，取0.1mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为150，空白对照组平板上未出现菌落，则100mL原菌液中含有产植酸酶菌

________个。无效，没有设置重复实验，结果不具有说服力无效，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差1.5×1094.科研人员从经常使用尿素的农田中取得土样制成土壤悬液,并用蒸馏水定容到100mL。具体操作过程如图1所示。①若某一稀释度的菌液接种的3个培养皿中菌落数分别为23个、40个、86个,则出现这种结果的可能原因是________

。若接种了某一稀释度菌液的一个平板经培养后,菌落分布如图2所示,则出现这种现象的可能原因是

。②初步筛选出来的菌种还需要进一步的鉴定,具体的鉴定方法是:在培养基中加入

指示剂,并接种初步筛选的菌种,培养一段时间,若指示剂变成_____色,则可说明该菌种能够分解尿素。

吸取菌液进行涂布之前没有振荡;吸取菌液时的位置不同涂布不均匀酚红红尿素分解菌的鉴定需要在培养基中加入酚红指示剂;因为细菌合成的脲酶可以将尿素分解为氨,导致pH升高,指示剂变为红色。5.(2020，全国Ⅰ卷)某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解,会对环境造成污染,只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基,甲的组分为无机盐、水和S,乙的组分为无机盐、水、S和Y。(1)实验时,盛有水或培养基的摇瓶通常采用____________

的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是

。甲、乙培养基均属于________培养基。琼脂选择高压蒸汽灭菌(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107个/mL,若要在每个平板上涂布100μL稀释后的菌液,且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个,则至少应将摇瓶M中的菌液稀释

倍。(3)在步骤⑤的筛选过程中,发现当培养基中的S超过某一浓度时,某菌株对S的降解量反而下降,其原因可能是

(答出1点即可)。S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长104(4)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数,请写出主要实验步骤:

。

(5)上述实验中,甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同,但都能为细菌的生长提供4类营养物质,即

。取淤泥加入无菌水中,涂布(或稀释涂布)到乙培养基上,培养后计数水、碳源、氮源和无机盐1.制备以纤维素作为唯一碳源的选择培养基进行筛选；2.提示：纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中。3.初步筛选出来的菌种还需要进一步加刚果红进行鉴定。

资料：地球上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨，其中40%~60%能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。对这些微生物的研究与应用，使人们能够利用秸秆等生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。已知刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖、葡萄糖等发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红与纤维素形成红色复合物；而当纤维素被纤维素分解菌分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以这些菌为中心的透明圈如下图所示）。请回答下列问题。思考：要从土壤中分离纤维素分解菌，如何设计实验方案？可以到什么地方去寻找纤维素分解菌？土壤取样培养基的制备样品稀释.涂布平板培养、观察实例：土壤中分解纤维素的细菌的分离与计数富含纤维素的环境。①树林中多年落叶形成的腐殖土；②埋有已腐烂的滤纸土壤。Ⅰ培养基的种类：液体的选择培养基（以纤维素为唯一碳源）Ⅱ目的：筛选出能够分解纤维素的细菌并富集培养。等比稀释后，将样品涂布到鉴别纤维素菌的培养基上：鉴别培养基（选择培养基+刚果红染液）高效降解菌株的筛选：挑选透明圈直径与菌落直径比值大的菌落。选择怎样的环境取样（在什么环境中寻找目的菌)？2.（2011•新课标卷•T39）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从被原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。3.（2019•浙江4月选考•32）（1）通常从腐烂的水果上分离产果胶酶的微生物，其原因是①水果中果胶含量较高，②

。腐烂水果中含产果胶酶的微生物较多1.物质Y是一