疏肝益气胶囊对勃起功能障碍模型小鼠的影响

疏肝益气胶囊对勃起功能障碍模型小鼠的影响

世界上超过1亿名男性面临不同程度的勃起障碍，其中40.70岁的男性发病率为52%。疏肝益阳胶囊是根据“阳痿从肝论治”理论研制的一种中药制剂,由蒺藜、柴胡、蜂房等15种中药组成,具有“补益肝肾,活血通络,兴阳振痿,生精强身”的作用,本研究通过大鼠勃起实验、交配实验、小鼠抗疲劳实验及恒河猴性行为实验,对其药效学基础和作用机理进行了初步探讨。1材料表面1.1所处的时域昆明种小鼠,二级,雄性,体重15~18g,购于首都医学院实验动物中心,合格证:京动字89031704300;Wistar大鼠,二级,雌雄兼用,90~120g,200~300g,240~260g,购于军事医学科学院实验动物中心,京动字:8712R10。健康成年性成熟雄性恒河猴,福建非人灵长类实验中心提供,体重(7.0±1.3)kg。1.2羧甲基纤维素钠标准溶液疏肝益阳胶囊由柴胡、蒺藜、蜂房、蛇床子等组成。每克含生药量5.48g(江苏扬州龙凤药业有限公司提供,批号920504)。每粒胶囊含0.25g疏肝益阳细粉,临用时称取内容物(细粉)适量,加0.5%羧甲基纤维素钠混匀,用蒸馏水配制成适当浓度混悬液。对照药:龟龄集胶囊由人参、鹿茸、海马、枸杞子、淫羊藿等组成,每粒0.3g(山西省中药厂生产,批号910822),临用时称适量加0.5%羧甲基纤维素钠混匀,用蒸馏水配制成1.2mg·mL-1浓度混悬液。丙酸睾酮注射液(上海第九制药厂生产,批号940204),临用时用花生油稀释。0.1%苯甲酸雌二醇注射液(批号940322),0.2%黄体酮注射液(批号930902)均为上海第九制药厂生产。MnCl2,上海金山县兴塔化工厂生产(批号8307015),对氨基水杨酸钠(PAS-Na),北京第三制药厂生产(批号9007052)。2方法2.1丙酸血清酮类75只离乳1个月大鼠90~120g,切除双侧睾丸,术后按体重随机分5组,每组15只。去势模型组:蒸馏水400mg·kg-1。丙酸睾酮组:0.2mg/只。疏肝益阳组大、中、小3个剂量组:给药量分别为800,400,200mg·kg-1,除丙酸睾酮组为皮下注射给药外,其余各组均为灌胃给药,一日1次,连续20d;同时将15只未去势大鼠同期饲养观察,作为正常对照组,给药后21d,将刺激电极放置于大鼠阴茎部位,给予表面电刺激,电流强度为4mA,记录从刺激开始至阴茎勃起时间(勃起潜伏期)。2.2大鼠混合实验2.2.1实验用黄体酮注射液出生3个月大鼠120只,体重200~300g,雌雄各半。①雌性大鼠行双侧卵巢切除,术后2周进行实验,实验前48h皮下注射苯甲酸雌二醇注射液20μg/只,4h前再次皮下注射黄体酮注射液500μg/只。②雄性大鼠按体重随机分为4组,每组15只。空白对照组:蒸馏水5mL·kg-1,2~4疏肝益阳组大、中、小3个剂量分别为800,400,200mg·kg-1,每日灌胃1次,连续20d。2.2.2雄鼠次次扑捕实验将每只雄性大鼠单独放入笼中10min,使其能够适应新环境,然后每笼加1只雌鼠,记录下列指标:①自雌鼠投入至雄鼠第一次扑捉雌鼠的时间(扑捉潜伏期);②自雌鼠投入至雄鼠第一次射精时间(射精潜伏期);③20min内雄鼠扑捉次数及射精次数;④20min内各组动物发生扑捉射精的动物数,扑捉率(%)及射精率(%)。2.3疏肝平衡体对重、中、小疏肝毒性的控制选用同一来源的健康昆明种15~18g雄性幼小鼠100只,各鼠之间出生天数和体重相差不得超过3d和3g。小鼠按体重均匀分为5组,每组20只,疏肝益阳组大、中、小3个剂量分别为1000,500,250mg·kg-1,每日灌胃1次,连续20d。阳性对照组灌服等体积龟龄集800mg·kg-1混悬液,空白对照组灌服等体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液。于最后1次给药24h后,将动物放入存有(19±1)℃恒温水浴中游泳,记录小鼠游泳耐力时间直到衰竭而死亡时间。2.4u3000小鼠10d不同时间的测定实验方法同抗疲劳实验,于最后1次给药后24h后分别将小鼠放入事先装有10g钠石灰的磨口广口瓶中将盖盖紧密封,立即记录小鼠存活时间。2.5大鼠睾丸的解剖及重量算例动物分组、体重、给药剂量、方法同抗疲劳实验,于最后1次给药24h后将动物处死,解剖取出前列腺、精囊、提肛肌、睾丸及胸腺,剥离周围附着的组织,用扭力天平称重,将重量换算成每100g体重的该组织重量(胸腺组织换算成每100g体重的胸腺重量平方根)。2.6疏肝平衡组治疗血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清中血清取成熟雄性大鼠(体重240~260g)31只,按体重均匀分为3组,取血测血清中睾酮水平后,分别给药,疏肝益阳组2个剂量分别为400,240mg·kg-1,每日灌胃1次,连续2个月。空白对照组服等体积蒸馏水,于最后1次给药后24h,尾动脉取血,分离血清,放射免疫分析法测定血清睾酮水平。2.7分组和染毒方法健康成年性成熟雄性恒河猴18只,随机分成6组,每组3只,实验前经检查无泌尿生殖器疾病。动物采用标准饲料,自由饮水,自然采光条件下单笼饲养。3组用MnCl2静脉染毒,剂量分别为2,6,10mg·kg-1,2次/周,连续染毒6个月。另一组用MnCl26mg·kg-1染毒4个月后用对氨基水杨酸钠(PAS-Na)240mg·kg-1,2次/周,静脉注射实验性排锰2个月;另一组用GJ422电焊条静式呼吸道染毒,每天5h,每周6d,连续染毒3个月,3个月平均浓度为232~341mg·m-2。对照组3只注射等量生理盐水。造模后,3组静脉染毒和呼吸道染毒组给予疏肝益阳胶囊,将药物溶解后鼻饲,每周2次,每次7.5g,连续给药1个月。空白对照组鼻饲等量生理盐水,PAS排锰组不用疏肝益阳胶囊,而用排锰组作对照。2.8阴道毒性试验氯胺酮3mg·kg-1肌注麻醉后,各组恒河猴均采用weisbroth直肠探子法刺激勃起神经,使其阴茎充分勃起,反复3次,记录充分勃起和射精电压,并测量恒河猴直立体位时阴茎与大腿间角度为阴茎勃起角度。2.9激励过工法分别在治疗前后,让各组恒河猴禁欲后与正常雌猴单独合笼交配2h分笼,再禁欲2d,再合笼,反复3次。观察①性欲:骑跨交配频率、性高潮、相互爱抚(即理毛);②阴茎勃起与插入;③射精:合笼后射精次数,其观察结果同时进行摄像。2.10病例组观察结果选择3只空白对照组,与3只勃起功能障碍作为病例组进行比较,观察其疏肝益阳胶囊治疗前后阴茎背部动、静脉管腔直径、动脉收缩期和舒张期血流速度、静脉平均血流速度。2.11妨碍是病例组的比较选择3只空白对照组,与3只勃起功能障碍作为病例组进行比较,以阴茎背部海绵体作为诱发电位,龟头作为刺激电位。测定其神经传导速度的潜伏期和诱发电位波幅。2.12统计方法数据以x¯±sx¯±s表示,采用SPSS8.0软件进行方差分析处理,以P<0.05为差异有显著性意义。3结果3.1丙酸合成醇提物对大鼠阴道毒性的影响和去势模型组相比,疏肝益阳大剂量组和丙酸睾酮组可提高去势大鼠阴茎对外部刺激的兴奋性,在局部微量电刺激的作用下使阴茎勃起潜伏期明显缩短(见表1)。3.2疏肝平衡胶囊对小鼠脏器小鼠脏器口误操作的影响给予不同剂量的疏肝益阳混悬液20d后雄鼠交配能力明显增强,表现为合笼后扑捉雌鼠潜伏期及射精潜伏期明显缩短,20min内完成的扑捉及射精次数增加,全组动物扑捉率、交配率增加,说明疏肝益阳胶囊能增强阴茎勃起和性交能力(见表2)。3.3长期服用疏肝犯罪间的比较见表1在抗疲劳试验中,中剂量组动物游泳耐力时间最长,明显高于空白对照组,小剂量组也高于空白对照组,说明长期服用疏肝益阳胶囊能增强体力,具有抗疲劳作用(见表3)。3.4肝脉阴阳胶囊对大鼠保修能力的影响在常压耐缺氧试验中,大、中剂量组动物存活时间均明显大于对照组(见表4)。3.5小鼠睾丸的正常发育中剂量组小鼠前列腺和精囊重量明显大于对照组,小剂量组有增重趋势。提示疏肝益阳胶囊能促进未成熟雄性小鼠附属性腺的生长发育。大剂量组和阳性对照组睾丸增重明显大于对照组,提示疏肝益阳胶囊和龟龄集能促使未成熟雄性小鼠睾丸生长发育,有促性腺激素样作用。中剂量组动物提肛肌重量明显大于对照组,小剂量组有增重趋势,提示疏肝益阳胶囊能明显促进蛋白质合成。小剂量组胸腺重量明显低于对照组,提示疏肝益阳胶囊能促使幼小鼠胸腺萎缩有促皮质激素样作用(见表5)。3.6肝脉中段对大鼠血清睾酮水平的影响成熟雄性大鼠服用1个月后血清中睾酮水平,大剂量组最高明显高于对照组,提示能增加成熟雄性大鼠血清中睾酮水平(见表6)。3.7mrc十二年对罪犯的电刺激电压和心功能的影响用MnCl2不同剂量静脉染毒6个月,可造成雄性恒河猴阴茎勃起功能障碍,阴茎勃起角度与对照组相比明显降低(P<0.05)。电刺激勃起电压和射精电压与对照组比虽未见明显差异(P>0.05),但MnC12染毒的恒河猴多次阴茎电刺激时,勃起不坚者较多,对照组未观察到此现象,可见MnCl2能造成猴阴茎勃起功能障碍。该实验勃起功能障碍模型建立较好。经疏肝益阳胶囊治疗1个月后,不同剂量静脉染毒组阴茎勃起角度均有显著改善,且尤其以小剂量组明显(P<0.01)(见表7)。3.8性行为减少,性行为减少,手术障碍和精子障碍增加MnC12和电焊烟尘可致雄猴阴茎勃起和插入功能下降(P<0.05),主要临床表现为交配频率、相互爱抚等表现性欲的行为减少,不能勃起,勃起困难和插入后难以维持硬度等勃起障碍及射精功能障碍明显增加(P<0.01),主要表现不射精和射精量少。疏肝益阳胶囊治疗后自身对照性行为显著改善,主要表现在显示有性欲次数,正常勃起和插入,射精次数均明显增加(P<0.01)(见表8)。3.9阴血脉管腔直径MnC12组雄猴阴茎背静脉管腔直径比对照组明显增宽(P<0.05)。疏肝益阳胶囊治疗后阴茎背部动脉管腔直径比对照组明显缩小(P<0.05)。静脉平均血流速度比治疗前明显减慢(P<0.05)(见表9)。3.10稀疏贵阳囊肿对河东猴阴茎肌电图的影响结果显示阴茎勃起外周神经传导速度和诱发电位波幅在疏肝益阳胶囊治疗前后无变化(P>0.05)(见表10)。4疏肝强度胶囊的调节作用现代医学认为阴茎勃起是一个复杂的心理、生理过程,受正常的激素分泌,健全的神经反射,血液循环协调运动及阴茎正常的解剖结构等多种因素影响。中医学认为阴茎勃起是由一系列脏腑、经络及气血津液相互协调作用的结果,而尤其与肝肾密切相关,相火是启动人类性欲和阴茎勃起的原动力,而肝藏血,主疏泄,主宗筋,肝血在肝气的疏导下对阴茎的快速充盈是阴茎勃起的物质基础。根据上述理论,疏肝益阳胶囊由蒺藜、柴胡、地龙、蜂房、蛇床子等15味中药组成,方中蒺藜、柴胡调达肝气,疏肝解郁;地龙通利经络;蜂房、蛇床子温肾壮阳,诸药合用具有疏肝解郁,活血通络,补肾振痿的功效。现代药理研究表明,蒺藜提取物protodiosin通过在体内转变为去氢表酮(DHEA)而提高性欲,增强勃起。同时还具有抗动脉粥样硬化和血小板聚集,改善周围微循环和组织代谢的作用。地龙具有抗血栓、溶栓、改善血液循环的作用。蜂房的水溶性和醇溶性部位有雄性激素样作用,且无睾丸素样副作用。而蛇床子素通过促进内皮细胞释