谷氨酸发酵过程控制-谷氨酸棒杆菌斜面及平板划线培养

子情境：谷氨酸棒杆菌斜面及平板划线培养假如梅花味精厂发酵生产谷氨酸，需要大量谷氨酸棒杆菌细胞，现在需要同学们进行谷氨酸棒杆菌斜面及平板划线培养，以获得斜面和平板种子，进而通过菌种扩大培养获得生产谷氨酸的大量细胞细菌的接种方法（一）平板划线分离法在被检标本中，常混杂有多种细菌，平板划线分离法可使这多种细菌在培养基表面分散生长，各自形成菌落，以便根据菌落的形态及特征，挑选单个菌落进行纯培养。常用的平板划线分离法有以下两种：1、连续划线分离法：此法主要用于杂菌不多的标本。用接种环取标本少许，于平板1/5处密集涂布，然后来回作曲线连续划线接种，线与线间有一定距离，划满平板为止。2、分区划线分离法：本法适用于杂菌量较多的标本。先将标本均匀涂布于平板表面边缘一小区（第一区）内，约占平板1/5面积，再在二、三、……区依次连续划线。每划完一个区，均将接种环灭菌一次。每一区的划线均接触上一区的接种线1、2次，使菌量逐渐减少，以获得单个菌落（二）斜面接种法该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。用灭菌的接种环取单个菌落或少许细菌，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线。

细菌接种的基本程序灭菌接种环沾取标本接种灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境斜面接种法该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。（1）贴标签接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约2-3cm的位臵。(若用记号笔标记则不需标签)。（2）点燃酒精灯。（3）接种用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。取菌种试管和待接种的斜面试管灭菌接种环斜面接种法沾取标本斜面接种法接种斜面接种法用灭菌的接种环取单个菌落或少许细菌，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线，一直划到斜面顶端接种后灭菌接种环斜面接种法平板划线接种法（1）标记在培养皿底面，用记号笔注明接种的菌名、接种者姓名、日期等。（2）灭菌接种环点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随后再反方向通过火焰，如此2~3次。然后将接种环移开火焰，待其冷却。灭菌接种环平板划线接种法

（3）取菌种左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞，将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来的位置。平板划线接种法

（4）分离划线接种细菌（四区接种法）

①左手持琼脂平板培养基（将皿盖反放在桌上酒精灯附近），尽量使之直立以免空气中的细菌落入其中，并靠近火焰。右手持接种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌薄膜（约占平板的1/10），视为一区。划线时使接种环与接种平板面呈30~40度角，以腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。②旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面以使其冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行划线（约占平板1/5），此视为二区。平板划线接种法

③旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（约占平板1/4），此为三区。④旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌，接三区连续平行划线，划满平板其余部分，此视为四区。各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐渐稀释的目的。平板划线接种法

四区划线平板划线接种法

（5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养皿倒放，送进37℃