云南天麻的遗传多样性及其多糖的比较

云南天麻的遗传多样性及其多糖的比较

天麻是天麻科的一种多年生草本植物。在我国主产于云、贵、川、藏4省区,此外,陕西、河南、安徽、江西、湖北及东北各省也有分布。药用其干燥块茎,味甘、性微温、祛风、镇痉。主要用于治疗高血压、眩晕、头痛、口眼歪斜、肢体麻木、小儿惊厥、癫痫抽搐、破伤风,是我国传统名贵中药之一。现代药理研究表明,天麻还具有增智健脑、清除自由基、延缓衰老的作用,对老年性痴呆有一定的疗效。昭通天麻的产地主要分布于五莲峰山脉和乌蒙山脉的交汇地带,该地由于受特殊的“昆明准静止峰”气候类型的影响,常年云雾笼罩,冬季温暖,夏季凉爽,空气湿度较大,年平均气温15℃左右,阔叶林生长茂盛,以腐殖土为主,土壤中含有丰富的天麻赖以生存的萌发菌和蜜环菌,是天麻最适宜的生长环境。药用天麻的4个变异类型:乌天麻(G.elstaf.glauca.)、黄天麻(G.elstaf.flavida.)、红天麻(G.elstaf.elata.)和绿天麻(G.elstaf.viridis.)在昭通均有分布。特别是昭通彝良县小草坝是天麻的原产地,所产天麻个大、肥厚、饱满、半透明、质实无空心,品质优良,是昭通天麻的代表,也是云南天麻的代表,素有“云天麻”之称。目前,昭通天麻已成为云南省第3个原产地域保护产品。天麻的有效成分有天麻素、天麻苷元、香草醛、香草醇、嘌呤类、天麻多糖、氨基酸和微量元素等。最早的研究主要集中于天麻素和天麻苷元方面。目前,其他成分的研究越来越引起人们的重视,天麻多糖就是其中之一。天麻多糖有抗眩晕、抗衰老、降血压、增强免疫、抑菌和抗病毒等多种药理作用。本文以苯酚-硫酸法对产自昭通不同地区的14个人工栽培天麻样品和3个外省天麻样品进行多糖测定和比较。1材料和方法1.1腐败变质预处理2010年1月中旬,在昭通各产地分别采集鲜“冬麻”2kg左右,洗净泥沙,剔除腐败变质部分,切成薄片,在70℃烘箱中通风烘1d左右至干,粉碎,过100目筛,得干粉,保存备用。其他省份的3个天麻样品均购自昆明市菊花村中药市场,同样粉碎过筛备用。天麻品种及产地信息见表1。1.2天麻糖的提取取适量天麻干粉,按料液比1∶60加入80%乙醇,在60℃水浴中回流提取2h,倒去液体,残渣再重复提取1次,除去天麻中的单糖、低聚糖、色素及脂类等。残渣用无水乙醇脱水,置阴凉处晾数日至干,粉碎,置棕色广口磨口瓶中备用。1.3无水乙醇用量大,测定超声波清洗器.仪器试剂:葡萄糖、苯酚购自天津市化学试剂三厂,硫酸购自汕头市达濠精细化学品有限公司,碳酸氢钠购自天津市协和昊鹏色谱科技有限公司,无水乙醇购自天津红岩化学试剂厂,均为分析纯;铝片。仪器:7200可见分光光度计,0412-1型离心机,KH-400KDB型高功率数显控超声波清洗器。苯酚试剂:称取约5g重蒸酚(苯酚50g,铝片0.05g和碳酸氢钠0.025g,常压蒸馏,收集182℃馏分),用新鲜蒸馏水溶解于100mL容量瓶中定容,配制成5%溶液置棕色瓶中,放入冰箱储存待用。1.4溶液配制和配制对照品溶液:精确称取葡萄糖(105℃恒质量)0.1000g,用蒸馏水溶解于100mL容量瓶中定容,配制成1.000mg/mL溶液待用。供试品溶液:精确称取1g用80%乙醇提取并干燥过的天麻粉预处理样品,以超声波提取法的最佳提取条件(以蒸馏水为溶剂,温度65℃、料液比1∶20、提取时间20min)提取,提取液用4000r/min离心机离心10min,弃除沉淀,上清液用100mL容量瓶定容待用。2结果与分析2.1苯酚溶液的制备精确量取1.0mL对照品溶液于比色管中,加蒸馏水补至4.0mL,空白用4.0mL蒸馏水,依次加入1.0mL苯酚溶液,5.0mL浓硫酸,摇匀于沸水中加热10min,取出后稀释至25.0mL,冷却至室温。用分光光度计作全波长扫描,结果在490nm处吸光度有最大吸收,故选用490nm作为测定波长。2.2标准曲线的绘制分别精确量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4、2.8mL对照品溶液于不同比色管中,在490nm测吸光度,结果见表2,绘制标准曲线,如图1,回归方程:y=8.4829x-0.0109,r=0.9973。2.3精密度测试精确吸取2.0mL对照品溶液5份,置于不同比色管中,在490nm测吸光度,结果见表3。2.4稳定性试验精确吸取1.2mL供试品溶液,置不同比色管中,放置1.0h后每隔0.5h在490nm测吸光度,结果见表4。2.5天麻还原糖含量测定称取初处理的天麻样品1.0006g,配制供试品溶液,在490nm测吸光度,计算样品天麻还原糖含量为0.1432g。再分别取0.5mL供试品溶液6份,置于不同比色管中,在490nm测吸光度。再分别加入葡萄糖0.1432g,在490nm测定吸光度,结果见表5。2.6天麻多糖含量的计算把初处理后的17个天麻样品,各精确称取2份,每份1g,在490nm测吸光度,用回归方程计算多糖浓度,进而计算天麻样品多糖含量,结果见表6。在测定的17个天麻样品中,昭通彝良县小草坝乡一带所产的9个天麻样品的多糖含量为10.4%~21.6%,普遍较其他地区高,据此可8为原产地域产品昭通天麻的优良品质提供依据,也可为彝良县小草坝乡作为最适宜栽培天麻的地区提供理论支持。3精密度、稳定性试验多糖测定有多种方法,通过试验,苯酚-硫酸法用于天麻多糖测定较为适合。在490nm波长处测定吸光度,回归方程:y=8.4829x-0.0109,r=0.9973。精密度试验,RSD=0.07%;稳定性试验,RSD=1.67%;加样回收率100.6%,RSD=1.37%。测定方法简单、准确。天麻多糖是仅次于天麻素的天麻重要有