微生物的纯种分离技术-微生物的接种技术

模块七微生物的分离纯化技术Isolationandpurificationofmicroorganisms任务一、微生物的接种技术知识目标：掌握微生物接种的基本流程掌握常用的微生物接种技术技能目标：能利用不同的接种技术进行微生物的分离与纯化任务一、微生物的接种技术内容导入自然界中，微生物都是以群居的方式存在的，要想获得所需菌种，必须把它们从中分离出来加以纯化培养。纯培养技术是进行微生物学研究的基础！任务内容微生物接种技术定义接种的基本程序常用接种方法一、微生物接种技术的定义接种就是利用接种工具在无菌条件下将微生物纯种由一个培养器皿转接到另一个培养容器中的过程。二、接种的基本程序灭菌接种环杀灭接种环沾染的微生物，以免污染标本杀灭接种环沾染的微生物，以免污染环境灭菌接种环操作需在无菌室或超净工作台内进行无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。实验使用的物品使用前后需严格灭菌沾取标本接种三、常用的接种方法斜面接种液体接种划线接种穿刺接种三、常用的接种方法从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的接种方法。用于好气性微生物的接种。（一）斜面接种：三、常用的接种方法1）标记：在试管上注明菌名、接种日期、接种人姓名2）点燃酒精灯。3）接种：（一）斜面接种三、常用的接种方法（1）手持试管将菌种管和待接斜面管用大姆指和其他四指握在左手中，中指位于两管之间。斜面向上，尽量放平。（2）旋松管塞（3）接种环灼烧灭菌三、常用的接种方法（4）拔管塞：用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)三、常用的接种方法（5）取菌:接种环冷却，轻沾取少量菌体或胞子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环碰到管壁，取出后带菌接种环不可通过火焰。三、常用的接种方法（6）接种:在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入待接斜面管。从斜面培养基底部向上作“Z”形来回密集划线，勿划破培养基。接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。三、常用的接种方法

(7)塞管塞：取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。(8)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。三、常用的接种方法斜面接种示意图三、常用的接种方法由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。操作方法：将接种环送入液体培养基时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，塞上棉塞再轻轻摇匀。如果菌种是培养在液体培养基中时，一般用移液管或滴管接种（二）液体接种三、常用的接种方法目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌、活菌计数。方法：★分区划线法：适用于含菌量较多的标本★连续划线法：适用于含菌量较少的标本（三）划线接种三、常用的接种方法分区划线接种分区划线法适用范围：适用于浓度较大的样品分区划线法三、常用的接种方法第一区划线灭菌接种环灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线三、常用的接种方法连续划线法适用范围：适用于浓度较小的样品连续划线法三、常用的接种方法用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。用于厌气性细菌培养、检查细菌的运动能力、保藏菌种。只适宜于细菌和酵母的接种培养（四）穿刺接种三、常用的接种方法穿刺接种方法：标记点燃酒精灯接种。（1）手持试管（2）旋松棉塞（3）接种针灼烧灭菌，把在穿刺中可能伸入试管的其他部位也灼烧灭菌拔出棉塞取菌穿刺（将接种针自培养基中心平稳、快速垂直刺入培养基，至接近试管底部，然后沿接种线拔出）塞上棉塞接种针灼烧灭菌思考与讨论、任务1、微生物接种技术定义思考与讨论：我学到什么？任务1、接种时，为何要尽量使试管平放？2、穿刺接种时能否将接种针直接穿透培养基？2、接种的基本程序3、常用接种方法：斜面接种、划线接种、液体接种、穿刺接种模块七微生物的分离纯化技术Isolationandpurificationofmicroorganisms任务一、微生物的接种技术知识目标：了解纯种分离技术的原理掌握接种技术和无菌操作技术技能目标：能利用不同的接种技术进行微生物的分离与纯化任务一、微生物的接种技术内容导入自然界中，微生物都是以群居的方式存在的，要想获得所需菌种，必须把它们从中分离出来加以纯化培养。纯培养技术是进行微生物学研究的基础！任务内容微生物分离纯化的原因微生物无菌技术一、微生物分离、纯化的原因培养物：在人为条件下培养、繁殖得到的微生物群体在无菌条件下，通过分离、培养获得的一种微生物的过程纯培养：从一个细胞或同种细胞群繁殖得到的后代。纯培养物：一、微生物分离、纯化的原因通过分离、纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物。接种技术无菌操作技术二、微生物无菌技术(aseptictechnique)保证待检物品不被环境中微生物污染；防止被检微生物在操作中污染环境或感染操作人员。（一）无菌操作的目的：二、微生物无菌技术(aseptictechnique)（二）无菌操作技术定义：在操作过程中人为地排除一切微生物或一切不需要的微生物。二、微生物无菌技术(aseptictechnique)①杀死规定操作系统（如试管、三角瓶和培养皿）中的一切微生物，使操作系统变成无菌；1、无菌操作要点一二、微生物无菌技术(aseptictechnique)②在操作系统与外界的联系之间隔绝一切微生物穿过（如用火焰封闭三角瓶和试管等的开口,用棉花过滤空气、用滤器过滤水等）;2、无菌操作要点二二、微生物无菌技术(aseptictechnique)③在无菌室、超净操作台或空气流动较小的清洁环境中，进行接种或其他不可避免的敞开作业，防止不需要的微生物侵入作业系统。3、无菌操作要点三二、微生物无菌技术(aseptictechnique)（1）定期检查无菌环境的空气是否符合规定；（2）用紫外线灭菌处理30~60min；（四）进入无菌室前的准备（3）检查无菌器材是否完备；（4）实验人员进入无菌室前先用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。（5）缓冲室内换上洗净并经紫外线灯照射过的工作衣、帽、鞋。二、微生物无菌技术(aseptictechnique)（1）在操作中不应有大幅度或快速的动作；（2）使用玻璃器皿应轻取轻放。（五）无菌操作要求（3）在火焰上方操作；（4）接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌；（5）在接种培养物时，协作应轻、准。（6）不能用嘴直接吸吹吸管。（7）带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。二、微生物无菌技术(aseptictechnique)接种和分离工具1.接种针2.接种环3.接种钩4.接种锄5.接种铲6.接种匙7.