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文档简介

实验二、母种培养基的制作及试管菌种的扩制1.了解食用菌母种培养基的配方2.熟练掌握母种培养基（PDA）的配制方法3.熟练掌握培养基的消毒灭菌技术。4.掌握试管菌种的扩制技术一、实验目的1.马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL，pH自然。2.马铃薯综合培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，维生B110mg，水1000ml。母种培养基配方材料：马铃薯（每组250克左右），琼脂粉、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、维生素B1工具：烧杯（250mL），搅拌匙、托盘天平、电炉、纱布、试管（18×180MM），棉花塞（或硅胶塞）、PH试纸、高压灭菌锅、超净工作台等二、实验材料（一）配制方法1.先将马铃薯洗净去皮，挖掉芽眼，称取40g，切成1cm3小块或薄片。2.将切好的马铃薯块放入铝锅中，加水200mL，放在电炉上煮沸后维持15-20min，至马铃薯熟而不烂。三、实验内容与方法3.用四层纱布（需浸水后拧干）过滤，由于马铃薯在煮沸过程中，有部分水被蒸发掉，所以过滤后的马铃薯汁，应加水补足水分至200mL。4.将称好的琼脂加入马铃薯汁中，在电炉上用文火煮，直至琼脂完全融化（边煮边搅拌），再用四层湿纱布（需用热水浸湿后拧干）过滤。最后加入葡萄糖等可溶物，搅匀。5.调节pH值：培养基的酸碱度是影响菌丝生长的重要因素，因此培养基配好后应根据菌种对pH值的要求进行调节。马铃薯蔗糖琼脂培养基配好后，pH值一般为中性，所以不必调节。6.补水至200mL。7.分装试管：培养基配好后，应趁热用分装漏斗进行分装试管，装入试管高度的1/5—1/4，分装时应注意不得使培养基粘在试管的口壁上，以防污染杂菌。（二）分装8.捆扎试管：装好的试管盖紧胶塞后，7支或9支扎成一把，在胶塞外包一层报纸，用橡皮筋或绳子扎紧，防止灭菌时胶塞被冷凝水浸湿。121℃高压灭菌30min后摆斜面。(三）高压灭菌

1．将已灭菌的斜面培养基瓶移入事先消毒过的超净工作台内，同时放入酒精灯、酒精棉、接种铲等，紫外灭菌20～30min。2.将母种管、用具及手进行酒精消毒。(四）母种接种及试管菌种的扩制3.按无菌操作方法进行接种，用接种铲取菌种一块放入斜面培养基上，并使菌丝紧贴在培养基上，塞上试管塞，贴上标签，注明菌种名称和接种日期。4.放入28℃生化培养箱中培养。PH调节时，应该注意的是培养基的酸碱度在灭菌前不宜调至pH6.0以下，否则灭菌后培养基不凝固。有些菇类的培养基要求在pH6.0以下的，要待灭菌后在

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