液体双试剂测定尿酸的临床应用

液体双试剂测定尿酸的临床应用

排尿是临床上常用的生化指标。痛、肾、心血管疾病、糖尿病与血清减少有关。因此,尿酸的检测与分析对临床诊断、了解病情进展,有重要的参考价值。在日常生化检验工作中,我们发现单独测定尿酸时测定结果比较理想,而在测定完胆碱酯酶(CHE)后紧接着测尿酸,尿酸的检测结果偏低。笔者怀疑这可能是测试项目间的交叉污染所致,本文作以下探讨。1材料和方法1.1材料表面1.1.1试剂3a4eCHE试剂为宁波美康生物科技有限公司提供的液体双试剂。CHE试剂1(R1):5,5-二硫代-2-硝基苯甲酸2.5×10-4mol/L及磷酸盐缓冲液(pH7.7)0.1mol/L;试剂2(R2):硫代丁酰胆碱,浓度为0.006mol/L。尿酸(UA)为德赛诊断系统有限公司提供液体双试剂。UA试剂1(R1):2,4,6-三溴-3-羟基苯甲酸(TBHBA)1mol/L及磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.0)100mol/L;试剂2(R2):4-氨基安替比林0.3mol/L,铁氰化钾10μmol/L,过氧化物酶(POD)≥2000U/L,尿酸酶≥30U/L,及PBS(pH7.0)100mol/L。校准品:德国罗氏诊断有限公司提供。质控品:英国朗道实验有限公司提供。1.1.2仪器ADVIA1200全自动生化分析仪。运行状态良好。1.1.3参考参数40份临床血清标本均无黄疸、无溶血且无脂血,其测定值均在参考范围内。1.2b有污染因素干扰正常开机清洗管道及比色杯,做UA校正且质控在控。将本次试验分成8组:Ⅰ组:标准对照组,单独测定40份标本的UA值(确保无其他因素干扰);Ⅱ组:每份标本先测CHE接着测UA;Ⅲ组:每份标本先测尿素(UREA)再测UA;Ⅳ组:每份标本先测CHE加测不受污染的UREA后再测UA;Ⅴ组:每份标本蒸馏水倍比稀释后测UA;Ⅵ组:每份标本用CHE的R1试剂倍比稀释后测UA;Ⅶ组:每份标本用CHE的R2试剂倍比稀释后测UA;Ⅷ组:更换清洗管道,加强仪器对试剂针、样品针及比色杯的清洗功能后先测CHE再测UA。1.3统计处理采用SPSS11.5软件分析,比较采用F检验,两两比较采用SNK-q检验,以P<0.05为差异有统计学意义。2、、、组的检测结果比较表1与对照组Ⅰ组相比:Ⅱ组的结果明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ、Ⅷ组的结果差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组Ⅴ组相比:Ⅵ组的结果差异无统计学意义(P>0.05),但Ⅶ组的测定结果明显低于对照组(P<0.05)。结果见表1,2。3试剂携带污染由表1可以看出,在ADVIA1200全自动生化分析仪上,UREA对UA的测定无明显的影响,而CHE对UA的测定有严重的干扰。在CHE和UA中间加测UREA后,UA的测定值不受影响,原因可能CHE对UA的交叉污染导致UA结果明显偏低,而这种污染在加测UREA后又被消除。全自动生化仪代替手工,具有多项目、多样本、检测迅速的优点。但是由于共用试剂针、样本针、比色杯及搅拌棒,测试项目间存在交叉污染,其交叉污染主要表现在:(1)试剂针、样品针、搅拌棒及比色杯的携带污染;(2)前者试剂成分影响后者;(3)前者项目的反应颜色影响后者;(4)前者pH值影响后者pH值反应环境。在本实验中,CHE和UA的试剂的pH值比较接近,对UA的影响不大。CHE试剂为无色对UA的红色反应产物无影响。从本次试验结果可看出:CHE对UA的影响主要是试剂针、样品针、搅拌棒及比色杯携带CHE的R2试剂(硫代丁酰胆碱)对UA测定的干扰。试剂携带污染原因:(1)一种试剂中含有另一试验的测定物质而直接干扰其测试结果;(2)一种试剂中含有改变另一试验反应条件或影响其反应进程的物质而间接干扰其测试结果。由该试剂引导的反应对下一个项目的反应进程带来间接干扰。在有试剂污染的情况下,下一个项目所测定的是前后2个项目反应的综合作用结果。CHE的R2试剂对UA测定干扰就是R2试剂影响UA反应进程。本仪器的反应杯是塑料的,相比石英杯更具吸附污染。在2个测试项目间用去离子水清洗,如清洗不彻底一个项目对紧随其后的一个或几个项目测定会带来一定程度的试剂污染,并且随着仪器使用时间的累加及仪器状况的下降,试剂交叉污染的程度会有所加剧,就会影响测试结果的准确性。从表2的Ⅶ组和Ⅴ组数值的比较可以看出CHE的R2试剂使UA的测定结果明显降低。要消除交叉污染,必须做到:(1)操作人员平时多留心、多观察,综合生化分析仪的工作流程、测试项目的反应原理和试剂的组成来考虑,合理设计项目测定顺序,把受污染项目放在施污染项目之前测定或者中间插入一个或几个非污染项目,尽可能避免交叉污染,必要时更换方法及试剂。(2)设置特殊的冲洗程序,从表1中Ⅷ组数值与Ⅰ组数值的比较可以看出,在相邻项目间增加冲洗次数或使用酸碱液清洗,才能基本消除试剂针携带污染的影响。(3)加强仪器的清洗及维护,