山东大学医学院

成绩:山东大学医学院机能学实验设计题 目:艾叶油对离体豚鼠气管平滑肌的影响设计人员及学号：侯毅 20052303023 姜林2005230303金自慧20052303030 孔珑2005230303专业：临床医学七年制班级：05级3班联系电话:金自慧侯毅:832542008年6月2日立题依据(主要说明本研究的目的、意义、国内外研究现状及主要参考文献)艾叶为菊科艾莫Artemisiaargrilevi.etVant.的干燥叶，祖国医学将艾叶归类为法寒药，具温经止血，散寒除湿之功效。很少有艾叶用于哮喘的描述，仅在《本草汇言》有记载:"艾叶，暖血温经，行气开郁之药也。若气血、痰饮、积聚为病，哮喘逆气，骨蒸痞结，瘫痪痛瘟等疾，灸之立起沉碍。"［1］。民间还用此治疗喘鸣、痰饮、咳嗽等问。本世纪60年代才有艾叶煎剂治疗慢性气管炎或肺结核喘息症状的报道。70年代用蒸馆法提取艾叶泊，制成胶丸或糖衣片治疗慢性气管炎或哮喘。70年代药理研究发现艾叶油具有平喘作用，之后又对艾叶泊的低中高沸点部位进行了药理筛选，发现了中沸点部位具有较强的镇咳、法痰、平喘作用。80年代实验室曾经对艾叶泊中分离的几个主要单体a蔽品烯醇刃、葛缕醇［4］、a2丁香烯醇［5］等进行了平喘作用及机制的研究，结果表明它们均有较强的平喘和抗过敏作用，其作用机制与升高气道平滑肌cAMP水平和降低cGMP水平，抑制过敏介质释放，拮抗过敏介质作用，抑制肥大细胞释放介质，抑制气管平滑肌细胞Ca2+内流等有关。90年代末实验室还证明了艾叶油能抑制致敏豚鼠气管Schultz2Dale反应，降低组胶或氨甲歌胆碱引起的豚鼠气管收缩pD2值，抑制大鼠被动皮肤过敏反应以及52楚色胶引起的大鼠皮肤毛细血管通透性增强反应，抑制豚鼠肺组织释放过敏性慢反应物质(SRS2A)，拮抗SRS2A对豚鼠回肠的收缩［6］。艾叶油及其主要成份均不引起豚鼠离体心脏收缩幅度增大和频率加快，在离体气管平滑肌试验中，用艾叶泊或其主要成份反复处理，不会产生耐受性反应。由于不通过。2肾上腺素能激动产生支气管平滑肌扩张作用，因此没有a2肾上腺素能激动剂样心率加快及骨髓肌震颤等不良反应。经长期临床应用，不良反应报道甚少，因此是一个安全有效的哮喘和慢性气管炎治疗药物［7］。本实验对艾叶泊对正常离体豚鼠气管的扩张作用及对组织胶、乙酷胆碱和抗原诱发的离体气管平滑肌痊孪的保护作用的药效作了实验研究。通过实验验证了艾叶泊的平喘作用，为艾叶泊治疗各种因素引起的气管支气管痊孪提供实验数据支持。实验还将成为下一步研究艾叶泊对支气管作用的各种性质及特点提供实验思路和基本数据，例如本实验所得数据作可为研究支气管对艾叶泊耐受性大小的数据，己证实艾叶泊较少引起耐受。因此本实验可以成为整个一系列艾叶泊药效药动研究实验中的基础实验之一。艾叶油作为中药提取物，临床应用有许多祖国医学的优点。同时通过己有实验已证实艾叶油不通过02肾上腺素受体激动产生支气管平滑肌扩张作用，因此没有02肾上腺素能激动剂样心率加快及骨髓肌震颤等不良反应，因此本实验对今后艾叶油临床的应用提供了实验室支持。实验目的:观察州对正常时时平滑阳用叫胶乙附和抗原诱发的离体气管平滑肌痊孪的作用实验原理:气管平滑肌上主要分布有M胆碱受体、HI组胶受体和°肾上腺素受体。当M受体和HI受体兴奋时，气管平滑肌收缩，可以导致哮喘:而当°受体兴奋时，气管平滑肌松弛，可以缓解哮喘。根据用药后长生的效应，可筛选具有平喘作用的药物。豚鼠气管对药物的反应较敏感，故常选用。艾叶泊具有一定扩张支气管作用。艾叶油对抗原、乙酷胆碱和组织胶诱发的气管平滑肌痊孪和哮喘也有一定保护作用。离体气管螺旋条可以模拟出痊孪与解痊效果且利于观察5通过利用卵蛋白做抗原可以建立哮喘模型，借助EL41(系统可以观察和探讨艾叶油解除支气管平滑肌痊孪作用及其效果。参考文献1中华人民共和国药典委员会编•中华人民共和国药典•天津天津科技翻译出版社，2((6.682蔡平，艾叶的药理作用及应用，时珍国医国药，200112(12)1137-1131如漉，周汉良，谢强敏，等•新平喘药a2蔽品烯醇的药理作用•中国药理学通报，19873(曰：323.报，198817(3):115.唐法姊，下如漉，谢强敏，等.a2丁香烯醇的药理研究•中国药理学通报，1991，7(2):145.谢强敏，唐法姊，下如漉等.艾叶泊的呼吸系统药理研究-II，抗过敏作用.中国现代应用药学杂志1999，16(曰:3谢强敏，下如溅，杨秋火，等•艾叶泊的呼吸系统药理研究一I，支气管扩张、镇咳和法痰作用.中国现代应用药学杂志，1999，16(4):16.武捷•清热散结片对豚鼠支气管平滑肌的影响•黑龙江医药2007,20(0：520张玉祥，曾晓会，周瑞玲等•花椒超临界萃取物对豚鼠离体气管活动的影响•中药新药与临床药理2006，17（1）:1310 Barnes町， DolleryCT,MacDermotJ.Increasedpulmonaryalpha....adre吧en肘电er咆gicandreducedb阮eta--adren肘e忧er咆宫gicre飞噎咒ceepteorsine缸xp严erimentalasthma.Nature,1980, 285（5766）:569实验材料〈包括动物品种、规格、数量和来源:药品名称、规格和来源、主要仪器设备等〉药物 艾叶泊（杭州正大青春宝药业有限公司,采用真空精溜法提取,批号:950120），使用时用2%的吐温-80（tween-80）乳化，再用蒸馆水稀释至不同浓度，分别为100gIL,20gIL,10gIL，IgIL，.并调节至pH=7o2.试剂 地塞米松（Dex，济南永宁制药股份有限公司产品，批号050927）用时配成20g/L的溶液:磷酸组织胶（中国科学院上海生物化学研究所，批号。40513）用时配成Ig/L的溶液:氯化乙酷胆碱（Ach上海试剂二厂，批号。41119）使用时配成O.Ig/L的溶液:卵蛋白（Ovalbumin,Oval,上海东风生化技术有限公司，批号054306）;自制克氏液（K-H）:NaCl7.5g,KC1°・35g,NaH2P040.1g,NaHC031.0g,MgC12°・05g,CaC12O.24g,葡萄糖1g,CaClo另溶，加蒸馆水至1000时，现用现配。3•仪器肌肉张力换能器，JZI00型，高碑店新航机电设备有限公司:超级恒温器，CSW-501型，重庆试验设备厂;BL-410微机型生物机能实验系统，成都泰盟科技;Sigma锐at统计软件（SigmaStat1.01forWindows饨，1992,Jandelcorporation,USA）;医用氧气，纯度〉95%,广州气体厂。浴管，50pL和200pL的微量加样器，L型钩，线钩，棉线若干，慑子，剪刀等。4.动物 Hartley品系豚鼠，雌雄兼有，体重350---450g,18只:体重200-250g,10只，山东大学实验动物中心提供。实验方法〈详细写明实验步骤，尤其动物分组、给药途径和剂量、观察指标、统计学处理方法及注意事项等〉（一〉实验步骤一.艾叶泊对正常离体气管及组胶和胆碱致气管疫李的作用1,取350g-450g豚鼠18只，雌雄不拘，按照重量从小到大编号18。

启动水浴 启动超级恒温水浴，调节浴温至37°C3.调节记录系统启动微机，进入BL-410系统，将张力换能器与通道1相连，在"输入信号"菜单中选择"通道一"下"张力"菜单项，增益选择100，扫描速度选择25.0s/div。在张力换能器上清挂2g重物，记录线上升2大格左右，取下重物，记录线回原位。标本制备取一只豚鼠，将豚鼠击头致死后迅速取出喉与隆突之间气管，浸入通5%CO2和95%O2混合气的Krebs—Henseleit（K—H）液中，轻柔去除气管周围疏松结缔组织和脂肪后，剪成宽约3mm,长20mm的气管螺旋条，每只豚鼠制备3个。悬挂标本用L型钩和线钩对角位置钩住气管螺旋条，放人含20mlK-H液的37°C恒温浴管中，固定L型钩使气管条处于液面下适当位置，持续通以含5%C02和95%02的混合气（1-个气泡Is）。线钩通过丝线挂于张力换能器上，调节浴管和张力换能器的位置，使丝线位于浴管中央位置。调节铁支架上的螺旋从而调节L型钩的高低，使记录线上升2大格左右，即挂2g重物时曲线的位置（此时标本的静息张力即为2g）。每20mii换1次营养液，平衡60mi后开始实验。（二〉实验项目艾叶泊对正常离体气管的影响取一个豚鼠的3个标本实验待标本稳定后，用累积剂量法依次加入20卩浓度为19/L勺艾叶泊、18卩浓度为10g/L的艾叶油、90yL浓度为20g/L的艾叶泊、180卩浓度为100g/的艾叶泊。以2%吐温-8C为空白对照组，加同等剂量的2%吐温-80容液。以地塞米松（加入200卩浓度为20g/的地塞米松溶液〉为阳性对照组［8］。每次加药后要等5min寺反应稳定。根据所测量的张力计算平均张力及抑制率。结果见表2-1。完成后用其他5只豚鼠重复实验。将结果进行统计分析，得出统计学结果。（用微机和SigmaStat计软件（SigmaStat1.01forWindows1952Jandelcorporat侃，USA）,统计学处理计量资料均以x+-s表示，用t检验进行统计学处理。P<O.0时5两组间差异有显著性。）统计学结果见表2-2。加药后张力一加药前张力变化率=加药前张力X变化率=加药前张力X100%表2-1艾叶泊对正常离体气管的影响组别 管内终末浓度（mgjL）药前张力 给药后张力 变化率2%吐温-80组10艾叶油1101001000地塞米松200表2-2艾叶泊对正常离体气管的影响（x七，n=6)组别管内终末浓度（mg/_）变化率2%叶温-80组10艾叶油1101001000地塞米松200注:统计方法:Dunnett's，与吐温组比较，p ;与地塞米松组比较P艾叶泊对HIS致离体气管痊孪的影响待标本稳定后，在浴管中，加入60pL浓度为Ig/L的HIS溶液（浴管内药物终浓度2.5X10泣/L[9]）致痊后，，用累积剂量法依次加入20pL浓度为Ig/L的艾叶泊、18pL浓度为10g/L的艾吨泊、90pL浓度为20g/L的艾叶泊、180pL浓度为100g/L的艾叶泊。以2%吐温-80为空白对照组，加同等剂量的2%吐温-80溶液。以地塞米松（加入20011L浓度为20g/L的地塞米松溶液〉为阳性对照组脸叽每次加药后要等5min待反应稳定，根据所测量的张力计算平均张力及抑制率。结果见表3-10完成后用其他5只豚鼠重复实验。将结果进行统计分析，得出统计学结果。〈用微机和SigmaStat统计软件（Sigma臼at1.01forWindows95， 1992,Jrnde1corporati侃，USA），统计学处理计量资料均以x七表示，用t检验进行统计学处理。PvO.05时两组间差异有显著性。〉统计学结果见表3-2。加药后张力一加药前张力 X100%变化率= 加药前张力表3-1艾叶泊对HIS致离体气管痊孪的影响组别管内终末浓度 加入HIS后给药后张力张力2%叶温-80组10艾叶油1101001000地塞米松200表3-2艾叶泊对HIS致离体气管痊孪的影响(x土s,n6)组别管内终末浓度(mg/_)张力抑制率2%叶温-80组10艾叶油1101001000地塞米松200注:统计方法:Dunnett，s,与吐温组比较，，P:与地塞米松组比较，P艾叶泊对Ach所致离体气管痊孪的影响待标本稳定后在浴管中加入166yL浓度为0.1g/L的Ach溶液(浴管内药物终浓度8.3X10垄/L[9])致痊后，用累积剂量法依次加入20yL浓度为19/L的艾叶油、18yL浓度为10g/L的艾叶泊、90yL浓度为20g/L的艾叶油、180yL浓度为100g/L的艾叶泊。以2%吐温-80为空白对照组，加同等剂量的2%吐温-80溶液。以地塞米松(加入2001L浓度为20g/L的地塞米松溶液〉为阳性对照组[8]根据所测量的张力计算平均张力及抑制率。结果见表4-1。完成后用其他5只豚鼠重复实验。将结果进行统计分析，得出统计学结果。〈用微机和SigmaStat统计软件(SigmaStat1.01forWindows饨，1992,Jandelcorporation，USA)，统计学处理计量资料均以x+s表示，用t检验进行统计学处理°P<0.05寸两组间差异有显著性。)统计学结果见表4-2

表4-1艾叶泊对Ach所致离体气管痊孪的影响组别管内终末浓加入Ach后给药后张力张力2%叶温-80组10艾叶油1101001000地塞米松200表4-2艾叶油对Ach所致离体气管痊孪的影响（x土s,n=6）组别管内终末浓加入Ach后给药后张力张力2%叶温-80组10艾叶油1101001000地塞米松200张力抑制率=张力抑制率=给药后张力一加入Ach后张力加入Ach后张力注:统计方法：Dunnet，s,与吐温组比较，p；与地塞米松组比较，p二.艾叶油对抗原所致离体气管痊孪的影响建立模型 哮喘豚鼠离体气管平滑肌环的制备健康豚鼠10只，雌雄不拘，200250g采用10g/卵蛋白生理盐水1m腹腔注射以建立哮喘模型[10]时制备标本 14c后击头致死，迅速取出主气管，剪除周围结缔组织，剪成宽约3mm长20m的气管螺旋条，每只豚鼠制备6个启动系统，悬挂标本同上加药取一只豚鼠的6个气管螺旋条进行实验。待标本稳定后，艾叶泊实验组分别加入20卩浓度为Ig/的艾叶泊、20卩浓度为10g/的艾叶泊、100卩浓度为20g/的艾叶泊、200卩浓度为100g/的艾叶泊。以2%土温-8（为空白对照组，加同等剂量的2%土温-80溶液。以地塞米松〈加入200卩浓度为20g/的地塞米松溶液〉为阳性对照组[8]010min后各组均加卵白蛋白。-地，每次加药后要等5mi待反应稳定。结果见表5-1完成后用其他9只豚鼠重复实验。将结果进行统计分析，得出统计学结果。〈用微机和SigmaSta统计软件(SigmaStat1.01forWindowsL992JandelcorporaticUSA)统计学处理计量资料均以x土s表示，用t检验进行统计学处理。P<O.0时两组间差异有显著性。〉统计学结果见表5-2。给药后张力一加入卵蛋白后张力 xlOO%收缩抵制率=1一 给药后张力一加入卵蛋白后张力(吐温组〉表5-1艾叶泊对抗原所致离体气管痊孪的影响组别 管内终未浓度(mg/L)给药后张力 加卵蛋白后张力 收缩抵制率2%叶温-80组10 ——艾叶油1101001000地塞米松 200表5-2艾叶油对抗原所致离体气管痊孪的影响(x