动物医学专业毕业论文-犬细小病毒病诊治及病理变化

动物医学专业毕业论文--犬细小病毒病诊治及病理变化动物医学专业毕业论文--犬细小病毒病诊治及病理变化目录摘要II关键词IIAbstractIIIKeywordIII1.前言12.材料与方法32.1实验材料3物3器3药品试剂32.2实验方法3法3临床治疗4典型病例剖检4病理切片的制作与观察43.实验结果63.1临床诊断结果6龄分布情况6发病季节分布情况63.2临床治疗结果73.3大体剖检结果73.4病理切片镜检结果84.讨论124.1流行特点124.2发病病因与发病机理124.3诊断与鉴别诊断12与犬细小病毒病的鉴别诊断13病毒病与其他相似病的鉴别诊断134.4综合治疗措施14犬细小病毒病的综合治疗14型犬细小病毒病的综合治疗144.5病理变化与诊治之间的联系144.6预防方法及常见免疫失败原因155.结论176.参考文献18致谢19摘要采用不同方法治疗临床确诊的103例犬细小病毒病病犬，观察临床疗效;对病死犬剖检，心、肝、肺、脾、肾、胃、小肠切片、HE染色观察病理变化。结果:单独采用对症治疗的36例患犬，治愈率为8.3%;单独采用对因治疗的10例患犬，治愈率为50%;采用综合治疗的57患犬，治愈率为87.7%。表明综合治疗方法较单一方法效果更好。病死犬剖检见腹腔内有血性腹水，肝脏肿大，偶见破裂，胃黏膜表面有大量出血斑和溃疡灶，十二指肠有不同程度的充血、坏死，胆囊充盈。HE染色可见消化道出血、坏死，肺有充血出血及气肿，肝淤血、变性，肾出血、透明变性。关键词:细小病毒;综合治疗;石蜡切片;HE染色;病理变化;犬TreatmentandpathologicalchangesofcanineparvovirusdiseaseAbstractClinicaltherapeuticeffecttreatingbydifferentmethodswascomparedin103casesofcanineparvovirusCPVdiseasediagnosedwithCPVkits.Postmortemofdeaddogswasconducted.Heart,liver,kidneys,lungs,spleen,stomachandintestineweresectionedtoobservehistologicalchangesbyparaffinsectionandHEstaining.Theresultsshowedthatcureratewas8.3%in36casestreatedwithsymptomatictreatment,50%in10casestreatedwithetiologicaltreatment,87.7%in57casestreatedwiththemultimodalitytherapy,whichshowedthatmultimodalitytherapyisbetterthanthatofsinglemethod.Hemorrhagicascitesinabdomencavity,hepatomegalyandrupture,alargenumberofbleedingspotsandnecrosisingastricmucosa,differentlevelsofcongestionandnecrosisinduodenumandgallbladderfillingwereobservedinautopsy.HEstainingshowedgastrointestinalbleedingandnecrosis,pulmonarycongestionandemphysema,hepaticcongestionanddegenerationandrenalhemorrhageandhyalinization.Keyword:Parvovirusultimodalitytherapy;Paraffinsection;HEstaining;Pathologicalchanges;Canine1.前言犬细小病毒病是由犬细小病毒引起的一种急性传染病。临床上以出血性腹泻、剧烈呕吐及高度沉郁或非化脓性心肌炎为主要特征。该病可感染幼犬高。小病毒parvovirus属于细小病毒科，细小病毒属。其DNA约占整个病毒粒子重量的25,,34,，分子量为1.4×106,1.7×106u原子质量单位，沉淀系数为23,27s。细小病毒几乎都有凝集红细胞的特性，血凝和血凝抑制试验是鉴定本病毒和诊断本病的方法。,偶尔也可感染貂、狐、狼等其他犬科和鼬科动物[11],犬不分品种、年龄、性别均可感染[12],但以幼犬的发病率和病死率高。有时感染率可达100%,致死率为10%,60%，一年四季均可发病，以冬，春多发。饲养管理条件骤变，长途运输，寒冷，拥挤均可促使本病发生。病犬是主要传染源，呕吐物，唾液，粪便中均有大量病毒。康复犬仍可长期通过粪便向外排毒。有证据表明人，虱，苍蝇和蟑螂可成为CPV的机械携带者。健康犬与病犬或带毒犬直接接触，或经污染的饲料和饮水通过消化道感染。CPV的病程短急、恶化迅速，心肌炎型常来不急治疗即死亡;肠炎型及时合理治疗，治愈希望较大。该病的实验室诊断方法有病毒分离vi、电镜EM观察、血凝/血凝抑制试验HA,HI、乳胶凝集试验LAT、酶联免疫吸附试验ELISA、免疫层析试验ICA、聚合酶链式反应PCR以及在PCR基础之上的实时荧光定量PCRreal―timePCR等。常用治疗方法是在早期大量注射单克隆抗体和高免血清的同时，进行强心、补液、抗菌、消炎、抗休克等对症治疗，同时注意保暖、禁食等护理，可以很大程度的提高治愈率。本文笔者采用不同方法治疗临床确诊的103例犬细小病毒病病犬，观察临床疗效，分析合理治疗方案;对病死犬剖检，采取心、肝、肺、脾、肾、胃、小肠等器官的典型病变进行石蜡切片、HE染色观察病理变化，为该病的治疗和研究提供借鉴。2.材料与方法2.1实验材料实验动物作者2009年7月至2010年1月与贵州大学贝斯特动物医院所见临床123例疑似犬细小病毒病病例，包括俩例典型死亡病例。器常规外科手术器械(上海医疗器械有限公司手术器械厂)，橡胶手套，光学显微镜，显微成像系统，组织切片机(JP-40型)，恒温水浴锅，酒精灯，载玻片，盖玻片，恒温箱等。药品试剂1.犬细小病毒诊断试剂盒(韩国Anigen公司生产的CPV诊断试剂盒)2.治疗药品:5%的葡萄糖生理盐水、碳酸氢钠、洛美沙星、利巴韦林、山莨胆碱，止血敏、西米替丁、爱茂尔、三磷酸腺苷、辅酶A、维生素B、维生素K3、氨苄西林、青霉素、头孢曲松钠、犬细小病毒单克隆抗体(北京京霸生物技术开发研究公司)、犬五联血清(中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所T线出现时可判为阴性。若无C线出现则表示对照不成立，结果无效，可能使用方法不当或试纸已变质，应查明原因，重新测试。在诊断过程中对阳性犬的年龄和发病季节作统计学分析，用作流行情况调查。临床治疗对症治疗:以调节水、电平衡紊乱和酸碱平衡紊乱，控制继发感染为主，合理运用止血药和止吐药。对因治疗:用犬细小病毒单克隆抗体按1mL/kg体重和犬五联高免血清1mL/kg体重肌肉注射，每天一次，连用3-5天。综合治疗:对症治疗和对因治疗同时进行。典型病例剖检两例细小病死亡毒犬，经主人同意，按以下顺序作进一步剖检。剖检顺序:新鲜尸体?外表检查?剥皮和皮下检查?剖开腹腔下做一般检查?剖开胸腔做一般检查?摘出腹腔脏器?摘出胸腔脏器?摘出口腔和颈部器官?颈部、胸部和腹腔脏器检查?骨盆腔脏器摘出和检查?剖开颅腔，摘出大脑检查?剖开鼻腔检查?剖开脊椎管，摘出脊髓检查?肌肉、关节和淋巴结的检查?骨和骨髓的检查。病理切片的制作与观察1.病料的采集与固定采取心、肝、脾、肺、肾、胃、肠等组织样品。分别用100mL/L中性福尔马林溶液固定。2.病理切片的制作(1)脱水、透明分别取各组织病变部位一小块,流水冲洗5-6h之后进行梯度乙醇脱水(80,乙醇2h?95%乙醇1h?100%乙醇2h)、二甲苯透明2次(2)浸蜡将组织置入熔化的60?左右的石蜡中浸透，直至其硬度与石蜡的硬度相似，大约用时2h。(3)包埋用与最后一次浸蜡的石蜡熔点相一致的石蜡把组织制成石蜡块。(4)切片和贴片修整蜡块:可视其组织的大小，在组织边缘约0.1,0.2cm处，切去余蜡部分，否则易造成组织皱缩不平。安装蜡块:将修好的蜡块安装在金属或木制持蜡器上。安装切片刀:将切片刀安装在切片机的刀台上，把刀台上的紧固螺丝旋紧，使切片时不产生振动，能保持一定的切片厚度。铺片:用眼科镊子镊起蜡带轻轻平铺在40,45?的水面上，借水的张力和水的温度，将略皱的蜡带自然展平。贴片、烘片:待切片在恒温水面上充分展平后，将蜡片捞到载玻片的中段处倾去载玻片上的余水，置入60,65?恒温箱内或切片漂烘温控仪的烘箱内烤片15,30分钟，脱去溶化组织间隙的石蜡。H.E染色和封片及镜检HE染色的染色剂的制备:苏木素染液配方1000mL:苏木素2.5g无水酒精25mL硫酸铝钾(钾明矾50g，或硫酸铝(铵明矾)蒸馏水?500mL黄色氧化汞1.25g冰醋酸20mL配制时，先将苏木素溶于酒精(平时也可将苏木素以10%的浓度溶解好，贮存备用)，取一2000mL的三角烧瓶，倾入钾明矾，加入蒸馏水，于电炉上加热，熔解钾明矾，完全熔解后，待温度至90左右时，加入预先溶解好的酒精苏木素，继续加热至沸腾，延续3-5min，此时溶液逐渐加深，变为紫红色，拔离电源，加入黄色氧化汞，当充分氧化后，重新插上电源继续加热3-5min，此时溶液变深紫色，拔去电源，直接将三角烧瓶插入预先备好的冰水里，放于暗处，第二天过滤后加入冰醋酸即可)伊红1g70-75%酒精100mL先将伊红用蒸馏水少许调成浆糊状，再加入酒精，边加边搅拌，直到彻底溶解，此时试剂有些混浊，取少许冰醋酸，加入到试剂中去，试剂逐渐转变为清亮，呈鲜红色即可H.E染色程序如下:脱蜡、脱苯、复水、染色、脱水、透明、封固脱蜡、脱苯、复水1个月,15岁之间，其中以6月龄以下所占比例较高具体分布情况见表3.1。表3.1103例犬细小病毒阳性病例的年龄分布年龄阳性病例数比例/(%)0,6月龄6765.06月龄,1岁1514.61岁,5岁109.75岁,15岁1110.7合计103100.0发病季节分布情况犬细小病毒发病无明显季节性，一年四季均可发生，但以春、冬季多发。具体分布情况见表3.2。表3.2103例犬细小病毒阳性病例的季节分布季节阳性病例数比例/(%)春3332夏1817.5秋2221.4冬3029.1总计103100.03.2临床治疗结果单独采用对症治疗的36例患犬，痊愈3例，治愈率约为8.3%;单独采用对症治疗的10例患犬，痊愈5例，治愈率为50%;采用综合治疗的57患犬，痊愈50例，治愈率为87.7%。表明综合治疗方法较前种方法效果更好。3.3大体剖检结果9776号典型死亡犬体表观察:体况消瘦，被毛松软，眼球下陷，肛门周围附有血样稀便。腹腔检查:腹腔内有血性腹水;肝脏有明显肿大，肝边缘钝圆，且其中一叶有破裂口切口外翻，;肺脏颜色较深潮红,表面有出血点,挤压切面有可见血性泡沫;胃内充满番茄汁样物质，黏膜表面有大量出血斑和溃疡灶;十二指肠有不同程度的充血、坏死现象;肾脏苍白、肿大;胆囊充盈;其他未见异常(如图3.1所示)。图3.19776号典型死亡犬大体剖检结果A(肝肿大，其中一叶有破裂口B.腹腔内有血性腹水，肾苍白、肿大C.胃粘膜表面出血点，溃疡灶g.肺脏颜色较深潮红,表面有出血点9742号典型死亡犬体表观察:体况消瘦，被毛松软，眼球下陷，眼结膜黄染，肛门周围附有血样稀便。腹腔检查:肝脏可见红白相间的条状花纹，表面有出血点，胆囊充盈;肺脏有淤血斑;胃破裂，食糜进入腹腔;肠系膜、腹膜呈黄色;肾脏明显肿大、切口外翻;其他未见异常(如图3.2所示)。图3.29742号典型死亡犬大体剖检结果胃有破裂口肝脏可见红白相间的条状花纹，胆囊充盈C(肾脏明显肿大、切口外翻3.4病理切片镜检结果肝:淤血，变性，有淀粉样物质沉着于肝索和豆状隙之间，形成粗细不等的红褐色条索，豆状隙受挤压而变小;肝细胞胞浆内有小水泡，有的核内也出现空泡图3.3所示。图3.3肝(HE×400)a(肝索b.窦状隙之间，红褐色的淀粉样物质沉着c.核空染的肝细胞脾:可见含铁黄素广泛性淤血点，脾淋巴组织减少,淋巴细胞弥漫性坏死,在有些红髓部位巨噬细胞增多如图3.4所示。图3.4脾(HE×400)a.含铁黄素淤血点，HE染色呈褐色b.淋巴细胞胃:浆膜层和黏膜层可见大量的细胞坏死现象，核浓缩，有的甚至消失;同时浆膜层可见出血现象如图3.5所示。图3.5胃(HE×400)A黏膜层，B浆膜层a.细胞核浓缩深染b.细胞间溢出的红细胞c.完全崩解的细胞d.细胞核碎裂的细胞十二指肠:病犬十二指肠表面坏死,上皮细胞坏死或脱落,肠腺萎缩,肠腺细胞变性坏死,有的肿大,有的发生空泡化,肠绒毛缩短,绒毛表面组织坏死,有的毛细血管充血，肠腺周围有散在点状出血如图3.6所示。×100×400图3.6十二指肠绒毛肠绒毛脱落，与浆膜层分开b.为×400的视野的×100视野c.小肠绒毛细胞脱落，结构完整性发生改变d.萎缩的肠腺e.绒毛毛细血管f.散在出血点肺:有的肺泡塌陷,有些区域肺泡内有大量出血,肺泡壁增厚,在这些区域也有淋巴细胞散在,同时在有些肺泡区可见气肿现象,可见细支气管内有充血现象(如图3.7所示)。图3.7(HE×400)a.支气管内充满红细胞b.溢出血管的红细胞聚集c.肺泡壁断裂，结构不完整d(变薄的肺泡壁肾:有出血现象，透明样变，视野内出现红染、均质的玻璃样小体(如图3.8所示)。图3.8(HE×400)a(发生透明样变，视野内出现红染、均质的玻璃样小体b.出血斑4.讨论4.1流行特点犬细小病毒病的发生与流行无明显的季节性，一般冬、春季多发。长途运输、天气寒冷、气温骤变、拥挤、卫生水平差等可促进本病的发生与流行。并发感染可加重病情和提高病死率。主要通过直接和间接的接触感染，如病犬的粪、尿、呕吐物和唾液，被病毒污染的食物、垫草等都可传播病毒。该病各年龄阶段犬均可发生，但以幼龄犬的发病率和死亡率相对较高。近年来，随着病毒变异和幼年犬免疫普及，中年和老年犬发病率和死亡率有所上升。该病潜伏期为7―14d。多数呈现肠炎综合征，少数呈现心肌炎综合征，偶见神经型。4.2发病病因与发病机理犬细小病毒病的发病原因主要有以下两方面:一方面由于病毒毒力太强，超过了机体的正常抵御能力;另一方面是由于机体自身免疫力低下，存在免疫缺陷或免疫抑制。因此在选择药物时应该首选既有良好抗病毒作用，又能显著改善机体免疫力的复合型制剂。由于往往机体免疫机能受到严重损毁，常会因为细菌的继发感染而加重病情。感染是由病毒侵入所致,最小感染剂量可能小至100个TCID50。病毒侵入后在感染的头两天,在口咽部复制,通过血流传播到其他器官3d,5d后出现病毒血症。虽然通常肠炎病症明显,但细小病毒感染是全身性的。病毒通过血流而不是肠腔到达肠黏膜。病毒主要攻击2种细胞:肠上皮细胞和心肌细胞。健康犬经消化道感染病毒后，病毒主要攻击两种细胞，一种是肠上皮细胞，一种是心肌细胞，分别表现胃肠道症状和心肌炎症状，心肌炎以幼犬多见。.3诊断与鉴别诊断犬细小病毒病在诊断中要注意与犬瘟热、犬轮状病毒感染及菌痢等疾病相互区别及注意混合感染。上述几种病均有呕吐、腹泻的共同症状，在临床上应该加以区分。其中临床上以犬瘟热和犬细小病毒病多发，且诊治难度较大。与犬细小病毒病的鉴别诊断犬瘟热呈现双相热，即病初体温达40左右，持续1―2天后降至常温，2―3天后体温再次升高;眼角先是“流泪”，后有脓性分泌物附着在上下眼睑、睫毛、内外眼角;鼻部起初流清鼻涕，后有脓性分泌物，同时有明显的呼吸困难症状。犬细小病毒病无以上现象。绝大多数犬瘟热病例会出现神经症状:肌肉痉挛、共济失调、圆周运动、癫痫样惊厥或昏迷，具体表现为口唇、眼睑、耳部抽动，咬肌颤动、空嚼流涎，一侧或两侧后肢持续性抽搐，随病程发展，抽搐次数和抽搐时间都增加，直至后躯摇摆、后肢麻痹不能站立，小型犬多见踏脚转圈、冲撞等癫痫样发作。犬细小病毒病不表现神经症状。犬瘟热病例下腹部皮疹，部分病例表现皮肤过度角化现象，尤其是足垫增厚，具有较好的鉴别诊断意义。犬细小病毒病无此现象。犬瘟热与犬细小病毒性肠炎都有呕吐、腹泻现象，但是，犬细小病毒病呕吐频繁、顽固，口渴明显，饮水后立即出现呕吐，粪便先是有大量黏液和伪膜，后混有血液，如番茄汁样，有特殊的腥臭味。而犬瘟热病例，大、中型犬先是排少量稀粪或柏油壮粪便，不久即便秘，多日不见排便，小型犬以腹泻多见，粪便中混有黏液、血液和气泡等。4.4综合治疗措施犬细小病毒病的综合治疗肠炎型细小病毒病患犬一般出现严重腹泻、血便、呕吐、脱水、酸中毒和电解质紊乱，治疗时应及时合理的补液和补充电解质，纠正水代谢及酸碱平衡紊乱，犬细小病毒单克隆抗体，高免血清以及免疫球蛋白的及时使用是提高该病治愈率的重要条件。通常选用林格氏液和葡萄糖生理盐水进行补液，补液量依患犬脱水程度而定。体重减轻6%、8%、10%以上，分别为轻、中、重度脱水，补液量分别按公斤体重30mL、50mL、70mL给予为宜，1,2次/d。在补液中或补液后，患犬精神好转、心率减慢、出现排尿是补足的表现，不见排尿是没有补足的指征，可酌情加大输液量。在补液中须认真监护心、肺功能，发现心率过快，呼吸困难，频频挣扎、呕吐，即使脱水未得纠正，也要果断的限制输液量输入速度。补液量大或在寒冷季节输液时，须将液体加温至37,38。654-2等。出血可用止血敏、维生素K等。对腹泻严重的犬，除进行补液外，还应根据酸中毒的轻重程度不同，给予静脉注射5%的碳酸氢钠注射液。对呕吐严重的犬，要特别注意补钾，但要严格控制输入钾的剂量、浓度、速度。静脉输注犬血白蛋白可加速机体渗透压和体液平衡的恢复。此外还应根据病情合理应用抗生素，以控制继发感染。型犬细小病毒病的综合治疗心肌炎型往往发病急，一般不出现腹泻和呕吐症状，以心力衰竭为特征，表现为呻吟、干咳、黏膜发绀，呼吸困难。心有杂音，心跳加快，大多来不及治疗就迅速死亡。因此在该病的治疗过程中，要时刻注意心脏功能是否正常。对该型患犬在运用单克隆抗体、高免血清的同时，还应当同时运用强心剂，如安钠加、地西绊等，抗休克药可选用654-2、地塞米松等。对该类患犬，应该慎用钾制剂。4.5病理变化与诊治之间的联系患犬消化道一般有充血出血现象，有时甚至发展为不可逆的坏死灶，尤以胃和十二指肠较为严重，从而导致消化系统机能障碍，可继发胃破裂、肠鼓气、肠套叠等。粪便先是有大量黏液和伪膜，后混有血液，如番茄汁样，有特殊的腥臭味。改善饲养管理条件，把病犬隔离安置于干燥通风和安静的环境中，减少应激因素的干扰，让其充分休息。加入混有适量食盐、葡萄糖、复合、的清洁饮水，让病犬饮服，连用5d。从治疗的第天起，给病犬加喂复合片、片、片及酵母片等，连喂4d，调整和健全胃肠功能，恢复食欲有食欲时，给予少量易消化无刺激性的流质食物，做到少食多餐。通过加强护理，可减少消耗，保持体力，提高抗病力，有助于促进病犬康复。氨基糖甙类抗生素(链霉素、卡那霉素、庆大霉素等)和胺类药物。。犬联弱毒疫苗使用犬联弱毒疫苗时，对30,90日龄的犬应注射3次，90日龄以上的犬注射两次即可，每次间隔为2,4周。每次注射1个剂量2毫升，以后每半年加强免疫1次。使用犬肝炎、肠炎二联苗时，对30,90日龄犬应免疫3次，90日龄以上的犬免疫两次，每次间隔为2,4周，每次注射1毫升。5.结论本文笔者采用不同方法治疗临床确诊的103例犬细小病毒病病犬，疗效和病理变化如下:1(单独对症治疗的治愈率