中药复方乌梅白凤颗粒的质量标准研究

中药复方乌梅白凤颗粒的质量标准研究

乌凤爪的处方由20种中药组成，包括香附、黄原、甘草、白芍和当归。具有益气养血、调经止带的功效。为了保证制剂质量,本文通过比较试验,优化了样品供试液的制备条件,采用薄层色谱法对其中香附﹑黄芪﹑甘草﹑白芍进行了定性鉴别研究,同时为修订和完善乌鸡白凤颗粒质量标准提供了参考资料。1仪器和试剂1.1仪器薄层色谱数码摄像系统(VideoStore),瑞士卡玛(CAMAG)公司。1.2改性苯、醋酸乙酯、乙酯、为酰氯苯、醋酸乙酯、为催化剂、苯、醋酸乙酯、乙酸乙酯会饮酸乙酯、双壁硅酸酯dme硅胶G(青岛海洋化工厂),氢氧化钠(广州化学试剂厂),中性氧化铝(上海五四化学试剂厂),苯、醋酸乙酯、冰醋酸、乙醚、正丁醇、乙醇、甲酸等均为分析纯。硅胶60预制板(德国Merck)。α-香附酮﹑黄芪甲苷﹑芍药苷对照品、甘草对照药材均由中国药品生物制品检定所提供。2包装侵权2.1香附的薄标记2.1.1供试品及药材溶液制备供试品溶液制备:取本品20g,加水100mL,使溶解,加乙醚提取2次,第1次50mL,第2次30mL,合并醚液,用水洗2次,每次40mL,取醚液挥干,残渣加乙酸乙酯溶解使成0.5mL,作为供试品溶液。对照品溶液制备:取α-香附酮对照品,加乙酸乙酯制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。香附药材溶液制备:取香附药材2g,加乙酸乙酯4mL,充分振摇后放置,上清液作为药材溶液。阴性对照溶液制备:取香附阴性对照样品20g,按供试品溶液制备方法同法制成阴性对照溶液。2.1.2带样点样的测定照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥB)试验,吸取供试品溶液25μL,对照品溶液10μL,香附药材溶液16μL,阴性对照溶液25μL,分别条带状点样于同一硅胶GF254薄层板上,以ψ(苯∶醋酸乙酯∶冰醋酸)=92∶5∶1为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的荧光淬灭斑点;喷以1%2,4-二硝基苯肼试液,斑点变为橙红色,见图1、2。2.2黄棕榈的分层识别2.2.1不同样品对黄芪甲苷的处理供试品溶液制备:取样品20g,加甲醇100mL,超声提取20min,滤过,滤液蒸干,残渣加水30mL溶解,用水饱和正丁醇萃取3次,每次25mL,合并正丁醇液,用氨试液30mL洗涤,氨溶液备用,正丁醇液蒸干,残渣用少量甲醇溶解,加入中性氧化铝2g,沸水浴上拌匀干燥,置硅胶干燥器中放置过夜,加于已装填好的中性氧化铝柱(100~200目,105℃活化1h,8g,直径约2mm)上,用40%甲醇100mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣用少量水溶解,通过已处理好的C18预处理柱,先后用水,30%甲醇溶液和甲醇各20mL洗脱,分别收集30%甲醇洗脱液和甲醇洗脱液,30%甲醇洗脱液备用,甲醇洗脱液蒸干,残渣用甲醇溶解使成0.5mL,作为供试品溶液。对照品溶液制备:取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。黄芪和人参药材溶液制备:取黄芪和人参药材各1g,分别加乙醇50mL,加热回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇5mL溶解,按供试液制备方法,从“加入中性氧化铝2g……”开始,同法制成药材溶液。阴性对照溶液制备:取黄芪和人参阴性对照样品各20g,按供试品溶液制备方法同法制成阴性对照溶液。2.2.2标准曲线及检出限照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥB)试验,吸取供试品溶液5μL,对照品溶液2μL,黄芪和人参药材溶液各2μL,阴性对照溶液各5μL分别点于同一Merck预制板上,以ψ(正丁醇∶醋酸乙酯∶水)=4∶1∶5的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,100℃加热至斑点显色清晰,分别置紫外光灯(365nm)及日光下检视,见图3、4。2.3甘草的精髓2.3.1对照药材溶液的制备供试品溶液制备:取[黄芪和人参的薄层鉴别供试品溶液制备]项下氨溶液,用稀盐酸调溶液pH值3~4,加醋酸乙酯萃取2次,每次50mL,合并醋酸乙酯液,蒸干,残渣用甲醇溶解使成1mL,作为供试品溶液。甘草对照药材溶液制备:取甘草对照药材0.6g,加甲醇30mL,加热回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水30mL溶解,按供试品溶液制备方法,从“用水饱和正丁醇萃取3次……”开始,同法制成对照药材溶液。阴性对照溶液制备:取甘草阴性对照样品20g,按供试液制备方法同法制得阴性对照溶液。2.3.2硅系高效液相色检查照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥB)试验,吸取供试品溶液4μL,对照药材溶液2μL,阴性对照溶液3μL分别点于同一用1%氢氧化钠溶液调制成的硅胶G薄层板上,以ψ(醋酸乙酯∶甲酸∶冰醋酸∶水)=30∶2∶2∶4为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,100℃加热至斑点显色清晰,分别置紫外光灯(365nm)及日光下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,见图5。2.4白芍的层次识别2.4.1制备成设样品溶液供试品溶液制备:取“黄芪供试品溶液制备”中样品过C18预处理柱的30%甲醇洗脱液,蒸干,残渣用甲醇溶解使成1mL,作为供试品溶液。对照品溶液制备:取芍药苷对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。阴性对照溶液制备:取白芍阴性对照样品20g,按供试品溶液制备方法同法制成阴性对照溶液。2.4.2香草醛硫酸—薄层层析照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VIB)试验,吸取供试品溶液10μL,对照品溶液6μL,阴性对照溶液5μL分别点于同一硅胶G薄层板上,以ψ(氯仿∶醋酸乙酯∶甲醇∶甲酸)=40∶5∶10∶0.2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,100℃加热至斑点显色清晰,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的蓝紫色斑点,见图6。3甘草鉴别方法的验证3.1本品处方由二十味中药组成,组分复杂,影响鉴别的干扰因素较多。样品必须经过多步处理,去除干扰,才能获得较好的薄层色谱。供试液制备方法中,如果样品直接用水溶解后,用正丁醇进行抽提,溶液乳化现象非常严重,须花费很长时间处理,而且效果不好。样品用甲醇提取,除去大部分水溶性杂质和赋料,然后再用正丁醇抽提,既克服了溶液的乳化现象,除杂质的效果也较好。正丁醇抽提液用氨试液洗,比用水洗效果好,而且氨溶液进一步处理后,可用作甘草鉴别的供试液,节省了样品重复取样重复处理的时间。样品再经过中性氧化铝柱和C18预处理柱处理,30%甲醇洗脱部分鉴别白芍,甲醇洗脱部分鉴别黄芪,既减少了不同成分的相互干扰,而且供试液制备方法一气呵成。3.2本品方中含有人参药材,人参中的人参皂苷成分和黄芪的特征成分黄芪甲苷都是四环三萜类皂苷,结构相接近。采用《中国药典》2000年版一部收载品种“黄芪”的薄层鉴别展开系统即ψ(氯仿∶甲醇∶水)=13∶7∶2的下层溶液,未能将黄芪甲苷和人参皂苷斑点分开,经反复试验后,采用展开系统ψ(正丁醇∶醋酸乙酯∶水)=4∶1∶5的上层溶液,用Merck预制板,可得到较好的色谱分离效果,黄芪甲苷斑点清晰可见,阴性对照无干扰。3.3甘草的主要有效成分是三萜皂苷和黄酮类化合物,黄酮类化合物特征性强,色谱效果较好,因此以甘草药材为对照,建立本品的甘草薄层鉴别方法。供试液制备中,主要针对黄酮成分的弱酸性,利用氨试液将其从正丁醇液中分离出来(同时又纯化了正丁醇萃取液),然后将氨溶液调成弱酸性,再用醋酸乙酯萃取,达到净化样品的目的。试