病理学新技术进展

病理技术进展1整理课件生命科学研究成为整个人类科学领域最具活力、开展最快的领域。正是这种飞速的开展及更新，我们医务工作者必须适应这种变化，及时更新自己的知识结构，并能及时地应用到我们的工作中。2整理课件本讲座就近年来在病理学领域的最新技术及相关理论作一综述，希望对大家在今后的医疗实践或科学研究中提供一定的帮助。3整理课件

一免疫组织化学在外科病理诊断中的应用

在当今的外科病理诊断中极其重要，可以和过去常规工作中的特染〔如PAS〕相媲美。免疫组化的应用使得一些特染方法〔如PATH〕不再被使用。4整理课件免疫组织化学发挥重要作用的前提是相应的实验室能提供稳定与高质量的免疫染色结果否那么会导致误诊免疫组织化学在外科病理诊断中的应用5整理课件影响免疫组化重要性的因素

高效抗原修复系统〔甚至适用于不同的组织固定与制片方法〕高度敏感的检测系统大量能应用于常规石蜡切片的抗体约5-10%的标本需要进行免疫组化染色6整理课件免疫组织化学：省钱还是费钱？尽管免疫组化染色意味着抗体、相关系统及人力方面的支出，但由于它从整体上节省了医疗费用，因此这笔支出非常值得.7整理课件免疫组化是如何节省医疗保健费用的破碎或微量标本：使得诊断成为可能，防止了重复活检。可以对恶性肿瘤的分化程度及临床分期进行更为准确的评估，有助于选择最有效的治疗方法。8整理课件免疫组化是如何节省医疗保健费用的使得肿瘤在可治愈性较大的阶段时得到早期诊断。帮助确定转移性或不知原发部位肿瘤的原发灶，节省了时间和财力。9整理课件免疫组化染色中的本卷须知

免疫组化如此重要，因此在操作中要十分仔细并需要可靠的对照系统保证其质量。错误诊断以及操作失误或错误判断均可能会导致医疗纠纷。10整理课件一、免疫组化相关技术

组织固定与选择抗原修复检测系统显色原的选择抗体的选择对照的使用标准化与自动化11整理课件1、组织固定

福尔马林缓冲液是最好的常用固定液：组织形态保存好，抗原保存好。其它如含酸或含汞固定液，抗原保存效果不稳定。目前我们科使用“AF〞液(混合性固定液：福尔马林、酒精、醋酸〕，效果好。12整理课件组织固定

为了获得理想的固定时间需要平衡以下因素：

尽可能快的制出用于诊断的切片；

在福尔马林中充分固定，至少需要2-4小时；…

长时间固定会损害抗原活性。13整理课件组织固定时间对抗原活性的影响

一般而言，固定时间越短，免疫组化染色结果越强。相反，固定时间越长〔尤其在福尔马林中固定时间超过数天〕，免疫组化染色结果越弱。14整理课件用于免疫组化染色组织块的选择

很显然组织块应该含有病变。如果可以同时得到多个组织块，应防止使用以下组织块：

固定时间较长的组织块;

冻融后的组织块;

脱钙后的组织块〔一些抗原可能丧失或减弱〕。15整理课件2、抗原修复

固定液〔固定剂醛基遮蔽局部抗原决定簇〕可以导致蛋白质分子内及分子间交联，从而遮蔽抗原决定簇。如果不进行抗原修复，免疫组化染色结果常不理想或失败。抗原修复可能通过破坏分子交联发挥作用。16整理课件3、检测系统目前多数实验室使用SP或ABC或LSAB检测系统：对多数抗体足够有效和敏感。当前趋势：在连接时使用多价生物素化的免疫球蛋白〔如抗-兔、抗-鼠混合物〕，这样不管一抗是单克隆还是多克隆，可以使用同一种试剂，从而防止〔人为〕用错试剂。17整理课件EnVision系统

采用葡聚糖连接技术。步骤简单〔显色前仅2步〕，防止内源性生物素干扰。据厂商及一些研究称：高度敏感〔接近tyramide系统〕。目前国内运用情况及个人体会：此系统并不令人十分满意！〔尤其是碱性磷酸酶系统〕。18整理课件4、显色原的选择

个人爱好。DAB：耐酒精；染色产物定位好；使用铜、镍或咪唑色彩易于强化。AEC：不耐酒精，敏感性差。FastRed或新Fuchsin〔碱性磷酸酶系统〕：染色产物定位不好；敏感性差。19整理课件

DAB显色CK-pan20整理课件AEC显色CD3021整理课件5、抗体的选择

需要考虑的因素： 选择适宜的抗体组。

如果同时有多种抗体可供选择，确定其中一种〔此选择至关重要，因为许多抗体可能不敏感或不特异〕。

费用。市售已稀释抗体不一定是最正确浓度〔事实上常需根据抗原修复法的不同来确定〕22整理课件6、对照的使用

传统的阳性对照

在每组中设置已

知为阳性的对照。

确保所有试剂均

有效，操作步骤正确。传统的阴性对照

每例其中的一张切

片由正常血清代替。

目的在于判定非特异性染色的有无。23整理课件设置阳性对照的结果

传统阳性对照占免疫组化染色切片的20-40%，因此十分昂贵！只说明所有试剂“正常〞，不能保证被添加的试剂种类是否正确。有时是不必要的！内部阳性对照更好，或者同一组的其它病例可作为对照。24整理课件内部对照

尽可能寻找适宜的内部阳性对照〔尽管并不能总找到〕最可靠。细胞固定方式及其它处理过程相似。25整理课件免疫组化结果的评定

准确评定免疫组化结果与认真操作同等重要。判定染色结果时需结合形态学，确保染色的为病变细胞或基质，而非其它组织或非特异染色。26整理课件免疫组化结果的评定

阳性结果较阴性结果更有意义，因为很多因素均可导致阴性结果〔如抗原丧失、方法不敏感〕。因此在鉴别诊断“A〞与“B〞病变时，组配的抗体中应包括对“A〞和“B〞病变阳性的抗体。27整理课件免疫组化结果的评定

确保染色部位系所用抗体固有，如多数白细胞标记，c-erbB2、CA125为细胞膜阳性；ER、PR、S-100、TdT为细胞核阳性。如果染色部位不对，不应判定为阳性结果〔如c-erbB2胞浆阳性〕。28整理课件二、免疫组化在诊断中的应用

肿瘤诊断判定癌的可能起源癌症的预后因子证实感染宫内孕的诊断其它……29整理课件1、肿瘤的诊断

判定“未分化〞或“低分化〞肿瘤的本质：最有用的试剂组为

Pan-cytokeratin,如MNF-116,或角

蛋白的混合物——上皮性肿瘤

LCA——淋巴瘤

S-100——恶性黑色素瘤，局部癌亦

可呈阳性表达Vimentin完全无用，不能提供任何信息——许多癌和淋巴瘤均表达阳性，对肉瘤不特异。30整理课件

一线抗体──────────────────────KeratinVimentinLCAS-100──────────────────────癌＋－－－肉瘤－＋－－淋巴瘤－＋＋－神经源性肿瘤－＋－＋──────────────────────31整理课件肿瘤诊断

良性还是恶性？

B细胞/浆细胞增生性病变，如果出现轻链限制性那么支持恶性肿瘤。

出现异常免疫表型，如B细胞同时表达CD43、CD5或cyclinD1那么支持B细胞淋巴瘤的诊断。

除个别例外，任何淋巴组织增生出现ALK1表达，均提示大细胞淋巴瘤。32整理课件肿瘤诊断

良性还是恶性？

增生标记物——Ki-67

如果在脑膜瘤、胃肠道间质肿瘤或甲状旁腺肿瘤中Ki67指数很高，提示为恶性。

Ki-67染色可以帮助鉴别萎缩上皮〔少数细胞阳性〕和CINIII〔多数细胞阳性〕。33整理课件肿瘤诊断

原位病变/良性病变还是恶性

Actin可以清晰地显示乳腺的肌上皮细胞。

乳头状瘤与导管内乳头状癌；

硬化性腺病与管状腺癌；

导管内癌是否有浸润性成分？

导管内癌导致的硬化性腺病还是真正的浸润性癌？34整理课件CKAE335整理课件肿瘤诊断

是否为肝细胞癌？

诊断概要：肝细胞癌还是腺癌〔原发/转移〕？ 传统上，CAM5.2+、AE1/AE3-免疫表型或CEA呈小管状阳性被用做肝细胞癌的诊断依据。36整理课件AFP37整理课件肿瘤诊断

是否为肝细胞癌〔HCC〕？

目前最好的肝细胞分化标记物是HEP-PAR1〔>90%肝细胞癌阳性〕。

对于年轻患者，还要除外上皮样血管平滑肌脂肪瘤：HMB45最有帮助。38整理课件肿瘤诊断

是否为卵巢或睾丸的性索肿瘤〔如颗粒细胞瘤或支持细胞瘤〕？

目前有以下几种性索细胞标记物：

Inhibin

CD99

MART-1〔黑色素瘤相关标记物〕39整理课件肿瘤诊断

浆膜腔活检或积液诊断中的难题：

反响性间皮细胞还是腺癌？

腺癌还是间皮瘤？

最好的间皮细胞标记物：Calretinin

鉴别诊断中最好的腺癌标记物：BerEP4、CEA。40整理课件CEA41整理课件CEA42整理课件肿瘤诊断

神经内分泌肿瘤的分类

诊断神经内分泌肿瘤必须有明确的全神经内分泌标记物阳性：Syn和或CgA。

NSE缺乏特异性，没有意义。

区分类癌与副神经节瘤：前者Cytokeratin+，后者可见S-100+的支持细胞。43整理课件

Syn44整理课件Syn45整理课件肿瘤诊断

内分泌肿瘤的分类

检测肿瘤分泌激素

胰岛细胞瘤：分泌胰岛素的肿瘤很少为恶性，而分泌胃泌素或胰高血糖素的肿瘤常为恶性。

垂体腺瘤：高催乳素血症是由催乳素瘤还是其它刺激催乳素分泌的肿瘤引起？46整理课件肿瘤诊断

生殖细胞肿瘤分类

生殖细胞瘤：常Cytokeratin-、胎盘碱性磷酸酶+

胚胎性癌：Cytokeratin+、AFP+/-

卵黄囊瘤：Cytokeratin+、AFP+

滋养叶或绒癌：Cytokeratin+、AFP-、HCG+47整理课件肿瘤诊断

淋巴瘤分类

确定瘤细胞谱系：L26〔B细胞〕，CD3〔T细胞〕，CD56〔NK细胞〕

淋巴母细胞瘤：TdT

套细胞淋巴瘤：CyclinD1

滤泡性淋巴瘤：CD10或bcl-6

间变性大细胞淋巴瘤：CD30、ALK1

Burkitt淋巴瘤：Ki67〔几乎100%细胞阳性〕48整理课件CD2049整理课件

CD2050整理课件肿瘤诊断

胃肠道间质肿瘤分类

胃肠道间质肿瘤：最常见的表型:*c-kit(CD117)+、CD34+、actin-、desmin-

平滑肌肿瘤：c-kit-、actin+、desmin+

雪旺氏瘤：c-kit-、actin-、desmin-、

S-100+51整理课件肿瘤诊断

软组织肿瘤分类〔标记物非常有限〕 纤维组织细胞瘤没有可靠的标记物

S-100：神经鞘瘤

EMA：周围神经细胞瘤、滑膜肉瘤

Actin、desmin：肌源性肿瘤

Cytokeratin：滑膜肉瘤、上皮样肉瘤、横纹肌样瘤52整理课件肿瘤诊断

软组织肿瘤分类

CD31：血管肿瘤

CD34：血管肿瘤、孤立性纤维瘤、

DFSP、血管周细胞瘤、梭形细胞脂肪瘤

Syn：PNET

CD99：尤文氏肉瘤/PNET53整理课件2、判定肿瘤起源

形态特征

淋巴上皮瘤样：NPC

透明细胞被纤细血管分隔：肾

小梁状或窦样结构：肝

乳头和核沟：甲状腺〔PTC〕

形态学仍是最重要的判定依据！54整理课件判定肿瘤起源

形态特征

多量印戒细胞：胃

印戒细胞无粘液：前列腺

实性团块生长但核级别低〔尤其核仁明显〕：前列腺

腺体呈花环状、腺腔内有脏的碎片:肠

顶浆分泌样胞浆：乳腺55整理课件3、判定癌瘤原发部位的免疫组化标记物

器官特异性标记物：

甲状腺球蛋白：甲状腺

降钙素：甲状腺

PSA或PAP：前列腺

外表活性物质：肺

BRST-2/GCDFP-15：乳腺

HEP-PAR1：肝56整理课件判定腺癌原发部位的免疫组化标记物

CK7：除胃肠道外，大多数腺癌均为阳性表达CK20：仅胃肠道和女性生殖道腺癌、粘液腺癌为阳性表达。PE-10〔外表活性物质〕：50%肺腺癌阳性TTF-1〔甲状腺转录因子-1〕：80%以上肺腺癌阳性57整理课件58整理课件59整理课件60整理课件61整理课件62整理课件63整理课件64整理课件65整理课件66整理课件67整理课件68整理课件判定腺癌原发部位的免疫组化标记物

CA125：阳性表达提示女性生殖道起源〔偶尔肺、乳腺、胰管胆管癌可呈阳性表达〕BREAT-2〔GCDFP-15〕：50%乳腺癌阳性甲状腺球蛋白：甲状腺起源PSA：前列腺起源69整理课件70整理课件71整理课件72整理课件73整理课件74整理课件75整理课件76整理课件77整理课件78整理课件79整理课件80整理课件81整理课件82整理课件83整理课件84整理课件85整理课件86整理课件87整理课件88整理课件89整理课件90整理课件91整理课件92整理课件93整理课件判定鳞〔样〕癌原发部位的免疫组化标记物

由于不同部位的鳞〔样〕癌不表达不同表型，因此没有太多可用的标记物.CD5：阳性说明胸腺起源CK20：阳性提示膀胱移行细胞癌原位杂交检测EB病毒：阳性提示鼻咽癌或EB相关癌94整理课件判定小细胞癌原发部位的免疫组化标记物

有几种可用的标记物：

CK20：Merkel细胞癌为阳性〔原发涎腺肿瘤也可阳性〕

TTF-1：原发肺小细胞癌阳性95整理课件4、癌预后因子

激素受体：乳腺癌增殖标记物〔Ki-67〕是某些肿瘤的预后因子癌基因与抑癌基因产物:c-erbB2,Rb,p16,p27,p21,ALK1.96整理课件

ER97整理课件

PR98整理课件

Ki-6799整理课件C-erbB-2100整理课件PCNA101整理课件5、确定感染

免疫组化可判定某些感染的实质〔有时病毒包含体难以发现〕

Herpes

CMV

HPV

HBsAg

Pneumocystis102整理课件HPV103整理课件HBsAg104整理课件6、宫内孕的诊断

宫腔刮出物中证实有胎儿成分可有效的排除输卵管妊娠。如果不见绒毛，角蛋白染色可显示蜕膜细胞中的滋养叶细胞，从而证实为宫内孕。105整理课件免疫组织化学的应用

免疫组织化学还有其它许多新颖和可想象的用途。106整理课件二组织芯片技术(tissuemicroarray)

107整理课件组织芯片技术使病理医生第一次有可能同时对几百个、甚至上千种正常或疾病以及疾病开展不同阶段的病理或生理状态下的组织样本，进行某一个或多个特定的基因，或与其相关的基因产物的研究。组织芯片技术可以与DNA、RNA、蛋白质、抗体等技术相结合，与传统的病理学技术、组织化学及免疫组化技术相结合，在基因、基因转录和相关基因产物生物学功能三个水平上进行研究。108整理课件组织芯片技术的根本原理组织芯片又称组织微阵列〔tissuemicroarray〕,1998年由Kononen等在cDNA微阵列的根底上创造的一种特殊的生物芯片，是继基因芯片和蛋白芯片之后生物芯片家族的又一新成员。组织芯片的原理是根据不同需要，利用特殊的仪器，将多个〔病例〕小组织片高密度的、整齐排列固定在某一固相载体上〔载玻片、硅片、聚丙烯或尼龙膜等〕，而制成微缩的组织切片。109整理课件然后可以用各种酶、同位素或荧光标记的不同基因、寡核苷酸、抗体在微缩组织切片上进行杂交和标记染色，最后在显微镜〔包括激光共聚焦显微镜等〕下获取图像信息〔或通过计算机处理所获的信息〕，以研究目的基因或基因产物在不同组织之间的表达差异。110整理课件该技术的最大潜在作用是将基因、蛋白水平的研究与组织形态学相结合，使应用同一实验指标，同时快速研究大量不同组织样本〔高通量、多样本〕的设想成为现实，减少了实验误差，几十倍、上百倍的提高组织病理学研究的效率，节约实验材料和试剂，同时使实验结果有更可靠的可比性，对于原始病理资料的保存和大量样本的回忆性研究具重要的意义。111整理课件组织芯片技术的制备目前主要依靠机械化芯片制备仪来完成。112整理课件制备好的组织芯片的切片113整理课件上图高倍114整理课件显微镜下的图像115整理课件组织芯片的应用范围很广，如：研究目的基因在不同病变〔肿瘤〕间的表达差异、寻找疾病新基因[疾病〔肿瘤〕中新基因、突变体与基因多态性的检测]、药物的筛选、疾病的病理诊断及质量控制等。116整理课件组织芯片技术的优点组织芯片多项内容研究组织芯片快速、高效的价值大样本病理资料回忆性研究节约试剂、降低本钱肿瘤诊断与分型有利于标准化研究117整理课件

例如，在研究混合性胶质瘤的过程中，肿瘤出现少枝胶质细胞成分和星形细胞成分的混合，那么这两种成分是同源性的，即是否由一个母细胞分化来的，还是异源性的，由不同细胞同时分化成的混合性肿瘤，要分清楚这些，在以前是不可能的，因为我们得不到混合肿瘤中单独的成分，而利用显微切割技术可以很容易做到。显微切割技术也经过了用手功到激光切割的过程。三显微切割118整理课件显微切割装置119整理课件用于显微切割的组织切片比较广，可以是冰冻切片、石蜡切片，也可以是细胞涂片，先期制片方法与常规方法相同，作连续切片，然后平铺在未涂胶的载玻片，切片厚度4-10um，切片可以进行组化或免疫组化染色，由于苏木素染料对PCR有影响，所以一般不用HE染色。激光显微切割(lasercapturemicrodisseciton)，是比较先进的方法，120整理课件其根本操作过程为：将切片放在倒置显微镜的载物台上，在切片上放置一层透明的乙烯乙酸乙烯酯(ethylenevinylacetate,EVA)薄膜，在显微镜观察下选定要切割的局部，并将该区域移至显微镜视野中央，然后将从侧面打过来的激光束通过一个透镜和反光镜，让其光路与显微镜聚光器的光路共轴，这样激光光斑正好落在显微镜视野中央，即要切割的区域。121整理课件该区域EVA薄膜受到适当强度激光照射后，瞬间温度生高，溶化并与其下方的细胞粘连，但不损伤细胞，当将EVA膜揭起时，与之粘着的细胞也从切片上完整地取下来。这样，经过屡次重复上述过程，就可以在同一张切片上得到不同区域的同类细胞。然后，将带有细胞的EVA膜放入含有蛋白酶K的试管中，在酶的作用下，一方面细胞与薄膜脱离，同时将细胞分解，游离出DNA、RNA、蛋白质等物质。122整理课件123整理课件124整理课件显微切割效果125整理课件对染色体进行的显微切割126整理课件显微切割效果127整理课件显微切割技术在肿瘤研究中的应用。(1)肿瘤克隆性分析。要了解某种肿瘤是否是单克隆性，必须要获取单纯肿瘤细胞进行分析，其内不能有其他细胞，而且，还要在同一肿瘤的不同部位或不同结节内的细胞进行比较，才能获得准确的信息。(2)肿瘤发生和演变过程中各阶段细胞基因改变的比较。(3)肿瘤内酶活性的定量检测。免疫组化可以检测某种物质在细胞内的分布情况，但不能进行定量测定，而利用显微切割技术可以得到纯洁的细胞用于定量酶细胞化学分析。128整理课件显微切割技术优点在于：可以获取纯洁、单一的待测细胞，不仅可以定性研究，还可以进行定量研究；获取的细胞能反映肿瘤组织在体内生长的实际情况；用于显微切割的切片制作简单。缺点是购置显微切割的仪器费用昂贵。129整理课件四、远程病理(Telepathology)远程病理是近年随着Internet网络技术开展而产生的新的外科病理诊断形式，对诊断病理的开展，特别是中小医院、遥远地区的病理诊断水平的提高有很大的帮助。远程病理目前主要的应用包括：远程诊断；图像数据库；远程定量病理；远程病理质量评价。130整理课件(1)远程诊断：远程诊断是远程病理的主要内容，可以满足两方面的需要：一是快速冰冻切片；二是疑难病例诊断。这两方面工作的着重点不同，对病理医师的要求也不同，前者是在手术中进行，有严格时间的限制；后者尽管没有太大的时间限制，但要求会诊病例的疑难程度高，都是些少见病例、不典型病例，需要做许多特殊检查才能确定诊断，一局部病例甚至不能确诊。131整理课件(2)病理图像数据库：病理学是一门形态学学科，病理医师诊断水平的提高依赖于对病理图像的深刻理解和积累，尽管有教科书对各种疾病病理有详尽描述，但在没有看到该疾病的切片图像前，在脑子里很难有对该病的应象，因此，病理医师不可能根据教科书的描述来诊断疾病。这一点对一些遥远地区的病理医师来说是一件很难的事。现在通过Internet网，我们可以访问世界各地大型综合性医院的网站，接触到那些我们很难遇到的疑难杂症。132整理课件(3)远程病理再教育：同样，依托Internet网，我们可以享受国内、外各类医院、实验室、科学结构提供的大量信息，对指导我们的临床实践、实验研究有很大的帮助，可以节省大量的人力、物力。133整理课件(3)远程病理质量评价：目前，国内病理切片等根底工作的质量普遍比较低，不光是小医院，一些大型综合性医院的病理切片质量也很差，这对依靠图像来作诊断的病理学来说，埋下了很大的隐患。其实，很多所谓“疑难病例〞只要把切片切好，就很容易诊断。很多医院、实验室提供了对病理切片的评价标准及方法，可以提供有针对性的改进意见。同时，也提供一些先进的病理技术的应用方法。134整理课件远程病理的形式：目前，远程病理的应用形式主要有两类，一类是动态图象；一类是静态图象。两者各具优缺点，应用范围不同，可以互相弥补。前者会诊专家可以看到动态图象，可以得到比较多的切片信息，但需要专门的传输设备，如卫星传输、高速宽带网等，因此费用很高，这也是制约远程病理开展的主要因素。135整理课件

静态图象会诊是利用目前最常用的E-mail形式，将病理资料及切片图像通过电子邮件发送给会诊中心的专家，专家根据图象特征作出诊断，并通过E-mail将诊断发给申请者。这种形式会诊的缺点是显而易见的，那就是专家所看到的图象非常有限，不能主动选择观看的图象，图象受送检者的主观影响很大，所以作出的诊断的准确率不会太高，只能作为参考。136整理课件作为远程医学重要的分支之一，在过去的几年中，远程病理开展比较缓慢，主要原因是由于病理诊断需要根据图象来诊断，相对于其他医学学科来说，远程病理诊断需要传输大量的图象，特别是动态图像，而对目前通过线传输图象的速度是远远达不到实际应用的要求。可喜的是计算机及网络技术的开展正在不断地克服这一障碍。137整理课件五、计算机辅助的图像分析技术〔Imageanalysis)基于体视学理论的计算机辅助的图像分析也是近年开展比较迅速的一门学科，它是一门集数学、拓扑学、几何概率论、计算机技术于一体的交叉学科，其应用非常广泛，在地矿、卫星遥感、金相、电子、刑侦、生物医学等领域已经有非常广泛的应用。计算机辅助的图像分析尽管应用范围很广、技术繁多，但根本的测量技术包括：图像处理、几何参数测量、光度测量。138整理课件在实际工作中，通过上述三种参数测量的不同组合，可以延伸出很多应用。近年在图像分析领域的进展主要在下面几个方面。139整理课件〔1〕计算机辅助的三维重建及导航技术：我们在观察物体内部结构时，往往需要对物体进行切割，包括真正的切割和虚拟切割，如病理切片、CT扫描、金属磨片等，在观察到物体内部结构的同时，也牺牲了三维空间结构，为了同时可以内部结构和三维形态，我们需要借助三维重建。以往的显微三维重建，如应用蜡板等，工作量巨大，应用计算机的三维重建，大大降低了工作量，提高了真实性，使许多以前无法完成的重建成为可能。140整理课件

三维重建这项技术较早在机械制造，航空，航天等领域应用，目前，医学生物领域也有较多的应用，可用CT片、MRI片，连续的照片、切片等进行。我们与南京航空航天大学合作，在92年时，完成了心脏窦房结、房室结的三维结构重构，真正实现了从三维切片参数了解三维结构情况的目的。141整理课件近年来在三维重建根底上又开展起一种新的成像技术－－三维导航技术。应用CT或MRI扫描成像技术，对活体进行高密度的扫描，通过三维重建，建立起立体的模型，并用不同颜色代码不同灰度的组织，如皮肤、软组织、骨、脑、血管、肿瘤等，建立一个比较真实的模拟器官、脏器或机体的三维模型，了解肿瘤或病变的位置、与周围脏器、大血管的关系，并可以在模型上模拟开刀，寻找一个可以避开重要器官、血管的手术进路，在真正手术时，提高成功率、减少损伤重要血管、神经、核团等失误。142整理课件〔2〕人工智能技术：这是一样仍处初级阶段的技术，有许多问题还没有解决，主要是计算机没有逻辑思维功能，它是能按一定的模式去套，而不能进行逻辑判断，但在不久的将来，正在研究中的生物计算机－－DNA计算机的成功，可能会到达这种要求。但现在仍有不少图像仪能进行一些简单的人工智能工作。如血细胞的自动识别〔种类少，人体间无形态差异〕，染色体的自动排序和分析等〔可建立一个染色体的库〕。143整理课件我们曾经与东南大学合作进行癌细胞的自动识别，但这项工作没有成功，原因主要是：①癌细胞形态千变万化，种类很多，不同组织，器官，个体之间，癌细胞各不相同，有些癌细胞在一个器官是癌细胞，而另一个器官就可能不够了，例如肾上腺肿瘤细胞，它的异形性放在其他器官肯定是癌细胞，但在肾上腺在不一定是，另外判断是否是癌还要考虑结构的因素，有些癌分化很好，形态与正常细胞几乎无差异，但它有浸润或结构变异，这时计算机判断就无能为力了。144整理课件②还有一个原因，当时设计的参数不够完善，缺少DNA含量等参数。尽管如此，肿瘤细胞自动识别在某一特定器官特定肿瘤上实现还是可能的，现在有很多作者进行胃、肠、乳腺、甲状腺等肿瘤细胞的自动识别，作为病理诊断的一个辅助手段。145整理课件〔3〕虚拟切片：最近的一、二年，有作者提出了“虚拟切片〞的概念，并且得到了初步的实现。病理切片的保存需要比较大的空间，保存的切片也存在破损、退色等问题，以前有人试图提高缩微照相来到达保存切片的目的，同样，胶卷底片也存在霉变、退色的缺点，所以，病理切片的妥善保存一直是病理医师的“心病〞。所谓虚拟切片就是用数码相机对切片进行分部照相〔高倍〕，然后合成为一张完整的病理切片的数码图像。146整理课件147整理课件制作虚拟切片的关键仪器是一台配有高分辨率数码相机的带有自动平台的显微镜，在计算机的控制下，切片按一定方向移动，并拍摄下镜以下图像，一般应在高倍下拍摄，根据切片的大小，拍摄的的数量也不等，然后计算机将这些图像按顺序进行无间距拼接，组成一张完整的切片图像，由于小图像都是在高倍显微镜下拍摄的，因此，组成的大图像也可以观察到细微的结构。为了后期的图像应用，如关密度分析等，图像储存应采用不压缩的格式。148整理课件这样构成的虚拟切片，可以在一定范围内任意缩放，不仅可以看到全切片的组织结构，还可以了解局部细微的情况，可以用于教学、发表论文、远程会诊，还可以进行长期无损保存。目前主要存在问题是：分辨率还不能与传统光学照相相比较；图像文件很大；用于制作虚拟切片的显微镜价格昂贵。149整理课件〔4〕图像处理：图像分析的关键和根底是图像的处理，一幅原始图像包含大量的冗余信息，大局部是我们不感兴趣的成份，在测量图像前，我们需要把我们感兴趣的局部提取出来，在这根底上才能进行各种测量分析。150整理课件图像分割：在图像上寻找一个灰度或色度阈值来提取我们感兴趣的局部，用伪彩色填充。图中所示是提取细胞核仁结构。151整理课件对图像分割后可以进行一系列的参数测量。152整理课件可以对提取出来的成份进行光密度测量153整理课件对提取出来的成份进行分类及测量154整理课件图像调整：对图像进行翻转、二指化、伪彩色化等测量155整理课件156整理课件对荧光图像进行光度测量、合成等处理157整理课件动态分析：定时拍摄图像，记录感兴趣物体在单位时间内运动的轨迹158整理课件将不同焦面的图像合成清晰的图像159整理课件通过连续切片的分析，对图像进行外表三维模拟成像160整理课件六、Internet

网上的组织病理学资源(Internetresourcesinhistopathology)其实这不能算是病理技术的新进展的内容，但近年来网络技术的飞速开展，正在改变着我们生活、工作的各个方面。Internet作为世界上最大的计算机互联网，构成了全球信息高速公路框架，作为现代科学重要组成局部的医学，Internet必将对其开展产生深远的影响。我们必须努力适应这种变革，充分利用网络上海量的信息为我们的效劳。161整理课件(1)Internet医学信息资源类型、分布及特点：Internet自1982年正式建立以来，开展非常迅速，以每年165%的速度递增。国内自1995年开始建设Internet网，开展也同样迅速。Internet网之所以开展这样快，归根到底取决于它丰富的信息资源，据美国HopperBusinessSolutions,Inc.公司介绍，162整理课件目前，WWW上有1500万件以上文献可供引用，Infoseek可检索80万也全文文献；Lycos拥有500万条目的数据库；Excite可检索8千万条文献；AltaVista数据库拥有5亿页以上的信息量。在这个信息的海洋中，同时也蕴藏着丰富的生物医学信息资源。由于生命科学的研究是所有科学研究中最活泼的领域，因此，Internet上生物医学资源占整个网络的30%左右，是所有学科最多的。163整理课件由于Internet上生物医学信息五花八门，彼此之间有交叉，因此要精确地分类Inernet上的生物医学资源比较困难。通常情况下，有以下几种分类方法：1.根据内容的组织和表现形式分为：(1)生物医学电子公告，包括网上医学新闻、广告、工作培训时机、交流时机等。(2)生物医学