淋巴细胞主动免疫联合hcg黄体酮及中药治疗不明原因复发性流产的疗效观察

淋巴细胞主动免疫联合hcg黄体酮及中药治疗不明原因复发性流产的疗效观察

复发性流产的发病率为1%，其中一半以上的患者流产原因不明。近代生殖免疫学研究表明,50%~60%不明原因复发性流产(URSA)与免疫因素有关。因而采用淋巴细胞主动免疫治疗URSA成为近年来研究的热点之一。我院2006年5月~2007年12月共收治URSA患者45例,均行淋巴细胞主动免疫联合hCG/黄体酮黄体支持及口服中药加味寿胎丸保胎,取得了良好效果,现报道如下。1数据和方法1.1早期自然13.3545例URSA患者年龄21~36岁,平均(28.97±3.35)岁;早期自然流产2~6次,平均(3.13±1.14)次。治疗前筛查夫妻双方乙肝、丙肝、梅毒和HIV。1.2方法1.2.1监察机关检查①连续≥2次早期自然流产,无活产史;②排除生殖道畸形、感染;③B超及妇科检查子宫附件正常,监测排卵正常;④内分泌检查PRL、E2、P、T、LH、FSH、T3、T4、TSH及空腹血糖正常;⑤抗体ASAb(-),EmAb(-),ACA(-);⑥无血型不合因素;⑦女方TORCH检查阴性;⑧男方精液分析正常;⑨夫妇双方染色体检查正常。1.2.2红细胞分离液制备采用密度梯度离心法,无菌操作。抽取丈夫或第三者肘静脉血20ml,加入肝素钠抗凝,与PBS液1∶1混匀。15ml离心管4支各加入4ml淋巴细胞分离液(密度1.077±0.002,上海华精),上层加入稀释后的外周血10ml。水平离心2000r/min×30min,吸取淋巴细胞分离液与血浆界面之间的白膜层,再次离心2000r/min×10min。沉淀用生理盐水2ml洗涤2次(如有红细胞采用注射用水洗涤1次可去除),每次离心2000r/min×10min。最后将淋巴细胞沉淀与1ml生理盐水混匀,滴片镜检淋巴细胞,剂量为20~40×106个。1.2.3点皮内注射组将淋巴细胞悬液1ml于患者前臂内侧分3点皮内注射。疗程:每隔3~4周1次,3次为1疗程;如未孕4~8周加强1次,同时检查不孕原因;怀孕后间隔同前,直至孕5月。1.2.4黄体酮、hcg、hcg、u3000eB超监测卵泡发育并指导同房,排卵后使用hCG2000U/3d,共3次,黄体酮20mg/d,共7次;妊娠后hCG2000U/3d直至孕10~12周,同时加用中药加味寿胎丸30付。中药组方主要为黄芪、党参、桑寄生、川断、杜仲、菟丝子、白术、升麻、白芍、黄芩。1.2.5治疗效果标准以妊娠超过12周B超未见异常为治疗成功,并随防至分娩。2结果2.1妊娠病例治疗注射次数采用淋巴细胞主动免疫治疗45例URSA患者,除1例采用第三者静脉血外,余均采用丈夫静脉血获取的淋巴细胞。25例妊娠病例治疗注射次数为3~13次,平均(7.84±2.27)次;平均治疗(4.04±2.03)次后怀孕(1例患者体外受精-胚胎移植妊娠后才开始治疗)。患者发生迟发变态反应,注射部位出现红色皮疹与硬结,持续3~5天可缓解,随着治疗次数的增加,症状逐渐减轻。所有病例未发生严重副反应。2.2胎儿发育情况45例患者中,目前25例妊娠,已分娩15例,新生儿无异常;4例为孕中期,4例为孕晚期,经B超检查胎儿发育均正常;2例孕2月因胚胎停育而行清宫术(1例患者37岁,1例有4次自然流产史)。治疗成功率为92.0%(23/25)。3hcg、黄体的免疫治疗自1981年Taylor和Beer等创立了RSA淋巴细胞主动免疫疗法,经过20余年的临床研究表明,免疫治疗确能有效阻止封闭抗体缺乏性RSA,且未发现对母儿的副反应。淋巴细胞主动免疫妊娠成功率国内报道为87.0%,国外报道为60%左右。我研究所采用淋巴细胞主动免疫联合hCG/黄体酮及中药加味寿胎丸综合治疗,妊娠成功率达92.0%,效果显著。淋巴细胞主动免疫疗法的机制至今尚不完全清楚。目前认为,人类白细胞抗原(HLA)组织相容性及辅助性T细胞1(Th1)/辅助性T细胞2(Th2)型细胞因子的失衡与URSA密切相关。正常妊娠中,夫妇HLA抗原不相容,胚胎所带的父源性HLA抗原(滋养细胞表面)能刺激母体免疫系统并产生一类称为封闭抗体的IgG抗体,它能抑制混合淋巴细胞反应,并与滋养细胞表面的HLA抗原结合覆盖来自父方的HLA抗原,从而封闭母体淋巴细胞对滋养层细胞的细胞毒作用,保护胚胎免受排斥。ZenclussenAC等认为RSA是由于母体不能识别父方抗原而产生保护性反应所致。临床采用配偶淋巴细胞免疫治疗,诱导母体产生同种免疫反应,从而出现封闭抗体及微淋巴细胞毒抗体,使母体免疫系统不易对胎儿进行免疫攻击。临床研究发现,正常妊娠时Th2型细胞因子占优势,而RSA患者血清以Th1型细胞因子为主。临床采用配偶淋巴细胞免疫治疗可提高母体Th2型细胞因子,下调Th1型细胞因子,从而诱导免疫耐受。hCG/黄体酮保胎是传统的治疗手段。孕酮在早期妊娠建立合适的免疫环境中起着重要作用,可使孕妇淋巴细胞释放一种封闭因子(PIBF),介导免疫调节和抗流产效应,诱导活化的淋巴细胞产生Th2细胞因子,封闭Th1活性。CheckJH等研究发现,RSA患者主动免疫治疗后PIBF明显升高。hCG在生理水平时可以抑制分裂原所致的淋巴细胞增殖,体外试验证实了LH和hCG抑制自然杀伤细胞的活力。RSA属于中医“滑胎”范畴,系由气血不足、肾虚胎元不固所致,故补气养血、益肾安胎是防治RSA的重要原则。加味寿胎丸以补气益肾为法则,采用黄芪、党参、白术、升麻补气养血,寄生、川断、菟丝子、杜仲益肾填精,黄芩、白芍安胎,从而达到防治自然流产的目的。研究表明,补肾药都有内分泌调节的作用,如菟丝子、黄芩有雌激素样作用;白术能激发和促进细胞免疫;川断含有大量维生素E,能促进子宫和胚胎的生长发育;杜仲能镇静,抑制子宫收缩。有些补肾药还有免疫调节作用,如黄芪具有双向免疫调节作用,能诱导T淋巴细胞增殖与转化。妊娠免疫调节是复杂的和多环节的,至今尚无法证实有何种单一系统是成功妊娠所必备的。URSA的病因复杂,治疗手段多样,将URSA流产之胚胎进行染色