细胞增殖-毒性实验步骤CCK-8及细胞增殖教学设计

细胞增殖-毒性实验步骤1、细胞传代、细胞计数、细胞增殖-毒性实验步骤：实验准备：用75%酒精擦生物安全柜台面2遍，紫外线消毒30分钟（枪、枪头、15ml及50ml离心管、剪刀、封口膜、记号笔、打火机、酒精灯、培养瓶），复温实验所需试剂[细胞培养液（DMEM、1640）、磷酸缓冲盐溶液（PBS）、胰酶（0.25%Trypsin-EDTA）、胎牛血清（FBS）、双抗]，所有的试剂、仪器放入生物安全柜前要用酒精喷洒消毒。显微镜下看细胞生长状态，有无污染。1）倒去培养瓶内的培养液；2）加入PBS2ml洗涤培养瓶内细胞2次；3）加入胰酶500ul/0.5ml2～10min（具体时间因细胞而异，可在显微镜下看是否贴壁，必要时轻拍培养瓶促使细胞脱落）；4）加入含10%FBS的培养液1～1.5ml[培养液：胰酶=（2～3）:1]中和胰酶；5）轻轻吹打成单细胞悬液，吹打力度以不起气泡为宜；6）将单细胞悬液吸入10～15ml离心管中，低速离心800rpm3分钟，倒去上清液；7）加入含10%FBS细胞培养液1～2ml吹打悬浮细胞至单细胞悬液；8）吸取20ul细胞悬液（10ul细胞悬液+10ul台盼兰液：给坏死细胞染色，判断细胞活力）至细胞计数板，进行细胞计数；CCK-8实验：9）在孔板中，给每孔加100μL（约7000个）24-72小时（37℃，5%CO2），使细胞贴壁；10）向培养板中加入μL11）将培养板在培养箱孵育一段适当的时间24小时（例如：6、12、或小时）（药物起作用）；注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。12）向每孔加入10μL（约10%）

CCK-8溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）；13）将培养板在培养箱内孵育1～4小时（半小时测一次OD值）；14）用酶标仪测定在450nm处的吸光度。15）若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10μL

0.1M的HCL溶液或者1%

w/v

SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下24小时内测定，吸光度不会发生变化。测定待测定药物（6个浓度）对肺癌A549细胞增殖的影响，实验加样（最外围的36孔加PBS液，实际上可用60个孔）：分组浓度（ug/ml）实验组A加药GO-CHI-HA-SNX-2112细胞+培养基+药物+CCK-85●●●●●10●●●●●20●●●●●40●●●●●80●●●●●160●●●●●A0加药细胞+培养基+CCK-8，无药物●●●●●A空白培养基+CCK-8，无细胞、药物●●●●●可不做药物+培养基+CCK-8，无细胞●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●●《细胞的增殖》教学设计

1教材分析以下是《普通高中2017级生物学科教学指导意见》中对《细胞的增殖》这一节课的具体要求：具体内容标准活动要求描述细胞通过不同的方式进行分裂，其中有丝分裂保证了遗传信息在亲代和子代细胞中的一致性制作和观察根尖细胞有丝分裂简易装片，或观察其永久装片本节是青岛版高中生物必修1《分子与细胞》第五章第一节的内容，是学生在学习了细胞生命系统的物质组成、结构和功能之后，来认识细胞这个系统的产生、发展和消亡的过程。本节内容主要包括细胞周期、有丝分裂等，其中有丝分裂的过程是教学重点也是教学难点。有丝分裂是学生学习减数分裂和遗传规律的基础，又是学习DNA复制及遗传信息传递的重要基础，也是学习选修模块的基础。因此，学好《细胞增殖》这一节内容，将为学生后面的学习打下坚实的基础。2学情分析

高中生的心理和思维与初中阶段相比有不同特点，其独立分析和解决问题的能力有很大的提高，具备了学习抽象复杂知识的内在基础，但由于高一的学生的思维特点还是处于形象思维向抽象思维过渡的时期。因此，在教学中应注意化抽象为形象，利用多媒体动画、图片、构建模型等方法提高学生的生物学科素养，使学生在潜移默化中得到锻炼。3教学目标1）概述细胞周期的概念，植物细胞有丝分裂的过程；2）分析植物细胞有丝分裂过程中染色体、DNA的变化规律；3）比较动、植物细胞有丝分裂过程的异同。4）提高分析、解读图像的能力与抽象思维能力，形成结构与功能、局部与整体相统一的生物学思想。4教学重难点4.1

教学重点动植物细胞有丝分裂的过程。4.2

教学难点有丝分裂过程中各个时期染色体行为和数目的变化，以及DNA数量的变化。5教学策略与方法5.1课时安排

基于本节内容在高中生物课程中的重要地位，本节内容应安排两个课时。第一课时安排细胞周期、有丝分裂过程的学习，并对有丝分裂各时期DNA、染色体的数量变化有一定的理解。第二课时安排无丝分裂、观察植物细胞的有丝分裂的实验，对细胞分裂图像形成深刻的认识，对各时期DNA、染色体的数量变化深入理解。5.2教学方法

教学中，以观察法，模型构建法为主，讲授法为辅。6教学过程教学流程教师活动学生活动设计意图新课导入展示本地水果阳新鸭梨和沾化冬枣，多媒体展示发育成果实的梨花和枣花。引出果实的长大离不开细胞的增殖。思考果实与细胞的关系以学生熟悉的实物引入，激发学生兴趣细胞周期概念多媒体播放：受精卵是如何发育成个体的录像片段，引出细胞连续分裂进而引出细胞周期。思考：1、细胞周期的起点、终点如何界定？2、如何保证亲自代细胞染色体数目一致？3.细胞周期包括哪些阶段？它们在时间分配上有什么特点？（间期时间长，进行“厚积薄发”的德育教育）展示线形图和圆饼图，引导学生分析细胞周期补充：关于细胞周期的概念，要强调只有“连续分裂的细胞”才具有细胞周期，例如皮肤的生发层细胞、根的分生区细胞等；而高度分化，失去分裂增殖能力的细胞，例如神经细胞等不具有细胞周期。

观察、思考连续分裂的细胞，从一次分裂完成时开始，到下一次分裂完成时为止为一个细胞周期分裂前进行染色体复制两个阶段，间期时间长识图，回答问题通过多媒体和问题串引导学生思考，生成概念，锻炼探究能力线形图和圆饼图的识别加强对概念的理解间期用多媒体课件演示染色质、DNA、染色单体复制前后的关系。明确经过间期复制，一条染色体上的DNA由一条变为2条。学生了解间期主要是完成DNA的复制和有关蛋白质的合成，并明确DNA与染色质的数量关系变化多媒体展示，使抽象的知识形象化，有利学生记忆，学习。有丝分裂初步认识有丝分裂过程展示染色体的几种不同形态，引导思考：为了实现精确平分，间期复制后的染色质发生了什么变化？数目变化如何？展示各时期细胞分裂模式图，引导学生排序。由于末期特点最明显，教学中引导学生倒序排列。尝试对染色体的几种形态进行排序，对各时期细胞分裂模式图进行排序；初步将细胞图像归为四类，分别为前期、中期、后期、末期先分析一条染色体的变化，再思考细胞内染色体相对位置的变化，对细胞分裂过程形成初步认识各时期的主要变化和特征1.引导学生分组探究，构建植物细胞有丝分裂各时期的细胞模型，多媒体展示问题引领：（1）分裂前期所发生的主要变化有哪些？染色质转变成染色体的生物学意义？（提示：可以使DNA分子在分离的过程中不损坏，保证了遗传信息的完整性，确保染色体在子细胞中的平均分配。）（2）分裂中期所发生的主要变化有哪些？什么是赤道板？（教师提示：赤道板只是一个假想面，并不是真实存在的）（3）分裂后期所发生的主要变化有哪些？还存在姐妹染色单体吗？细胞内染色体的数目变化？移向两极的两组染色体遗传信息相同吗，为什么？

（4）分裂末期所发生的主要变化有哪些？（与分裂前期进行比较）教师指出细胞板。

2.播放植物细胞有丝分裂过程的动画视频1.用手中的软磁板模拟细胞分裂各时期染色体形态和数目的变化（1）核仁解体；核膜消失；染色质→染色体；纺锤丝→纺锤体。（2）染色体的着丝点被纺锤丝牵引到赤道板上。（3）着丝点分裂，染色单体分开，完全相同的两套染色体被牵向细胞两极。（4）核膜核仁重现，染色体解螺旋成染色质，纺锤体消失，出现细胞板2.直观感受有丝分裂是一个完整的过程，但人为地可以分为4个时期：前、中、后、末。思考问题→阅读课本→构建模型→展示交流、评价→观看视频，使学生对有丝分裂过程有进一步的深刻理解动植物比较播放动物细胞有丝分裂过程的动画视频，提醒学生观察与植物细胞有丝分裂的区别，学生回答，教师评价。总结区别：1．前期纺锤体的形成机制不同，动物细胞由中心体发出星射线形2.细胞质的分裂方式不同，动物细胞为细胞膜向内凹陷，把细胞缢裂成两部分。观察、比较，提高分析归纳的能力意义染色体复制、精确平分，保证了亲子代细胞中遗传信息的一致性理解，记忆提升认识绘制曲线图