甘肃泉酒锁阳中总黄酮的提取工艺研究

甘肃泉酒锁阳中总黄酮的提取工艺研究

锁阳科锁阳科的单株植物主要属于系列性植物，通常寄生在系列性植物根部。是所有寄生虫的后代。目前,大量研究证明,锁阳黄酮类化合物主要为儿茶素(Catechin)、柑桔素4/-O-吡喃葡萄糖及一种以柑桔素为苷元的配糖体。近几年研究表明,黄酮类化合物有明显的抗溃疡、抗菌、抗炎、降血脂等药用保健功能;有防止动脉硬化或栓塞等效果;,可作血管保护剂;对胸闷、心悸及早搏均有一定作用;对眩晕综合征、急性耳鸣、口臭等症状有防治功能。作为天然来源的黄酮类化合物,能有效地清除自由基和脂质过氧化物,捕捉生物体内的超氧化物及过氧离子,切断生物体内导致人体衰老与病痛的脂质过氧化物连锁反应,螯合金属离子使之钝化,防止脂肪氧化酶作用,从而具有抗衰老作用。是一种具有广泛开发前景的天然抗氧化剂。目前,对锁阳中黄酮类化合物提取工艺及生理活性报道不多。锁阳为兰州太保制药有限公司的主要生产原料,主要原料来源与甘肃酒泉、内蒙、新疆,生产中发现,锁阳浸膏黄酮含量不稳定,特此对提取工艺和测定方法进行考察和优选,用正交试验设计方法优选适合本公司生产条件的锁阳中总黄酮类化合物的提取工艺,为生产工艺的改进提供科学依据。1设备1.1sz202型热电温度干燥箱KQ3200型提取清洗器(昆山市提取仪器有限公司);SZ202型电热温度干燥箱(浙江诸暨县马剑电热仪器厂);HH-S恒温水浴锅(江苏金坛县医疗仪器厂)。1.2试剂：芦丁对照品泰康制药厂提供乙醇、亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝均为分析纯试剂。1.3药品嘉峪关市药品检验所提供2方法和结果2.1黄树莓原汁、亚硝酸钠溶液、10.5,10.5精密称取芦丁对照品2mg,置于10ml容量瓶中,加入50%乙醇适量,提取处理使之溶解,放冷。加50%乙醇水溶液至刻度,摇匀。精密吸取0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5ml芦丁储备液,分别置于10ml容量瓶中,先加入0.3ml5%亚硝酸钠溶液,放置6min后,再加0.3ml10%硝酸铝,再放置6min后,加4ml4%氢氧化钠溶液,最后用50%的乙醇定容至10ml放置15min后,以0号液做空白液在510nm处测吸光度。其吸光度与浓度做线性回归,得芦丁含量与吸光度的回归方程为Y=12.88X-0.0032,r=0.9996。2.2方法研究2.2.1稳定性测定取同一供试品在0min,5min,10min,30min,60min,120min时间测定吸光度,结果表明,样品在120min内稳定。RSD=1.73%。2.2.2提取溶液制备精密称取已测知含量的锁阳样品份,分别加入相应量的对照品,精密称定锁阳粉末约1.0000g,以50%乙醇为溶剂5ml回流提取1.5h,滤过,定容至50ml容量瓶中,备用。吸取备用溶液1ml置于10ml容量瓶中,用50%乙醇定容,精密吸取溶液1ml照2.1项下的方法显色,测定吸光度,由线性回归方程计算样品中总黄酮的含量,测得平均回收率为100.97%,RSD=3.6%。2.2.3准确度的研究取同一供试品溶液重复测定5次,计算其RSD=0.73%。2.2.4重复试验精密称取锁阳粉末5份,每份1.0000g,依2.2.2项制备供试品,测定,计算总黄酮含量,RSD=2.03%。2.3锁阳粉添加量的测定以乙醇浓度、提取时间、固液比为因素,以乙醇50%、60%、70%,提取时间60,90,120min,固液比1∶40,1∶50,1∶60(g/ml)为水平,精密称取锁阳粉末1.0000g,采用L9(34)正交表进行实验,因素水平见表1,实验安排见表2。2.4黄酮类化合物的提取效率从表2通过极差分析可知A,B,C这3个因素对锁阳中黄酮类化合物提取率的影响次序为A>B>C,通过表3方差分析,固液比提取时间、乙醇浓度对黄酮类化合物的提取效率影响无统计学意义,测定方法也准确可靠,所以影响锁阳浸膏黄酮含量主要影响因素不在提取工艺。根据极差分析乙醇浓度选择A3,固液比选择C2,提取时间选择B3,提取的最佳工艺为A3B3C2,即乙醇浓度70%,提取120min,固液比1∶50。3黄酮类化合物的提取用正交实验优化提取工艺,实验结果表明,以60%乙醇水溶液作为溶剂,固液比为1∶50,提取120min,提取效果最好,可提高总黄酮提取率,为锁阳浸膏黄酮类化合物提取改进工艺提供了参考,但各因素影