低聚果糖调节人体肠道菌群功能的研究

低聚果糖调节人体肠道菌群功能的研究

低聚葡萄糖（fos）作为一种益生元，可以促进双叉菌的生长，其功能已得到广泛认可。但国内对于其人体功能性的研究尚不多见,张帆等研究了人体连续试食20mL含量为55%的低聚果糖具有显著的促进肠道双歧杆菌和乳杆菌的增殖并抑制有害菌的功效。然而,低聚果糖在较低剂量时的功效作用如何尚不可知。为此,该文采用卫生部《保健食品检验与评价技术规范》中调节肠道菌群功能的检验方法,评价每日试食6mL含量为55%的低聚果糖对人体肠道菌群的影响,以期为产品配方设计中低聚果糖的添加量提供一定的参考依据。1材料和方法1.1试验对象的样品OLIGOTM低聚果糖60L(由江门量子高科生物工程有限公司提供)。常温、阴凉干燥处保存,保存期12个月,供试验用。1.2试验对象和组成1.2.1标准中包含的基准一个月内未患过胃肠疾病者、一个月内未服用过抗生素者。1.2.2年龄及不良反应合并有心脑血管、消化道、肝、肾等严重疾病及内分泌疾病,精神病患者;年龄在65岁以上者,妊娠或哺乳期妇女,过敏体质及对本保健食品过敏者;停服受试样品或中途加服其它药物,无法判断功效或资料不全者;短期内服用与受试功能有关的物品,影响到对结果的判断者。1.2.3肠道菌群的检测采用自身和组间两种对照设计。120例健康试食者,随机分为2组,每组各60例,试食组每日服用低聚果糖一袋(6mL/袋),对照组服用果葡糖浆一袋(6mL/袋),2组均停用其他益生菌制剂。不改变原来的饮食习惯。受试样品给予时间30h。试食组受试物前和试验结束24h后,无菌采取受试者粪便进行培养,检验肠道6种菌群的变化。筛除20不合格受试对象,共有试验组、对照组各50人,病例脱离率16.67%。1.3仪器、试药与仪器MEK-6318型血球计数仪(日本光电工业株式会社),MID-IRON尿十项分析仪(德国),H-500荧光分光光度计(日本岛津公司),日立7600全自动生化分析仪(日本日立公司),Heraeus细菌培养箱(德国Heraeus公司),Heraeus厌氧菌培养箱(德国Heraeus公司),BX61显微镜(日本Olympus公司);TH-CB-402超净台(美国LABCONCO公司),电子天平(瑞士梅特勒托利多有限公司)。1.4观察指标1.4.1安全指数1.4.2疗效指标1.4.2.1症状观察详细询问病史,观察主要临床症状:食欲不振、体倦、眩晕、心慌气短等。1.4.2.2.疗效指标双歧杆菌、乳酸杆菌、产气荚膜梭菌、肠杆菌、肠球菌和拟杆菌。1.4.2.菌体稀释液的稀释和浇注培养收集受试者1.5h以内的新鲜粪便于便盒中,立即送检。称取lg粪便标本置于带玻璃珠的干燥灭菌试管中,加灭菌稀释液,10倍稀释,震荡1分钟,再依次进行10倍梯度稀释,选择合适的稀释度,分别吸取0.1mL的菌体稀释液并用各自选择性培养基进行浇注并培养,见表1。培养基组成按《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中功能学评价检验方法之调节肠道菌群功能检验方法提供的培养基配方。1.5评估数据和结果1.5.1转换数据时正态方差齐性检验采用统计软件SPSS12.0计算分析数据。凡自身对照资料采用配对t检验,两组均数比较采用成组t检验,后者需进行方差齐性检验,对非正态分布或方差不齐的数据进行适当的变量转换,待满足正态方差齐性后,用转换的数据进行t检验;若转换数据仍不能满足正态方差齐性要求,改用t’检验或秩和检验;但变异系数太大(如CV大于50%)的资料应用秩和检验。功效指标用X2检验。1.5.2受试样品试验结果阳性的判定比较试验前后自身及组间双歧杆菌、乳酸杆菌、产气荚膜梭菌、肠球菌、肠杆菌和拟杆菌的变化情况,试验组试验前后自身比较差异有显著性,或试验后试验组与对照组组间比较差异有显著性、且试验组试验前后自身比较差异有显著性,符合以下任1项,可以判定该受试样品试验结果阳性。(1)双歧杆菌和/或乳杆菌(或其他益生菌)明显增加,梭菌减少或无明显变化,肠杆菌、肠球菌、拟杆菌无明显变化;(2)双歧杆菌和/或乳杆菌(或其他益生菌)明显增加,梭菌减少或无明显变化,肠杆菌和/或肠球菌、拟杆菌明显增加,但增加的幅度低于双歧杆菌、乳杆菌(或其他益生菌)增加的幅度。2结果与讨论2.1两组年龄、性别、年龄分布情况共观察100例。低聚果糖组50例,男女性分别为23例和27例,年龄20~60岁,平均年龄(42.9±8.5)岁;对照组50例,男女性分别为14例和36例,年龄20~61岁,平均年龄(40.8±9.1)岁。试验前后,两组部分安全性指标结果见表2和表3。试食组与对照组试验前后精神、睡眠、饮食、大小便正常(数据未给出);血压、心率基本正常且无明显变化(见表2);血、尿、便常规检查及肝、肾功能检查基本正常且无明显变化(见表3);腹部B超,心电图,X线胸部透视基本正常(数据未给出)。服用受试物后,部分受试者的排便状况有所改善,无其他不良反应。说明两组具有可比性,受试样品对受试者无不良影响。2.2果葡糖浆对人体肠道菌群的影响由表4可见,与试验前相比,试食组试验后自身比较粪便中双歧杆菌明显增加5.8%(P<0.01),乳杆菌增加0.4%(P>0.05);产气荚膜梭菌的数量明显减少8.6%(P<0.01);肠杆菌和肠球菌分别增加0.4%(P<0.05)和0.8%(P<0.05),拟杆菌明显增加1.0%(P<0.01),但肠杆菌、肠球菌和拟杆菌增加的幅度明显低于双歧杆菌增加的幅度。试验组试验前后自身比较差异性说明摄食含量不小于55%的低聚果糖6mL对人体肠道菌群调节结果呈阳性。对照组试验前后各菌无显著性差异(P>0.05)。说明果葡糖浆对人体肠道菌群调节结果呈阴性。由表5可见,与对照组相比,试验前试食组各种菌均无显著性差异(P>0.05),表明试食组与对照组具有可比性;试验后试食组双歧杆菌增加4.2%,且有显著性差异(P<0.01);产气荚膜梭菌减少7.2%(P<0.01),而乳杆菌、肠杆菌、肠球菌和拟杆菌均未发生显著变化(P>0.05)。试验后试验组与对照组组间比较的差异性,说明摄食含量不小于55%的低聚果糖6mL对人体肠道菌群调节结果呈阳性。3试验前后人体肠道菌群变化情况与对照组相比,试验前试食组各种菌均无显著性差异(P>0.05),表明试食组与对照组具有可比性;试验后试食组双歧杆菌增加4.2%,且有显著性差异(P<0.01);产气荚膜梭菌减少了7.2%(P<0.01),而乳杆菌肠杆菌、肠球菌和拟杆菌均未发生显著变化(P>0.05)。与试验前相比,试食组试验后粪便中双歧杆菌增加5.8%(P<0.01),乳杆菌增加0.4%(P>0.05);产气荚膜梭菌的数量减少8.6%(P<0.01);肠杆菌和肠球菌分别增加了0.4%(P<0.05)和0.80%(P<0.05),拟杆菌明显增加了1.0%(P<0.01),但肠杆菌、肠球菌和拟杆菌增加的幅度明显低于双歧杆菌增加的幅度。而对照组试验前后各菌无显著性差异(P>0.05)。通过试验组试验前后人体肠道菌群自身比较差异性以及试验后试验组与对照组组间比较的差异性分析,表明每日摄食3.3g的低聚果糖亦具有调节人体肠道菌群,激活人体益生菌增殖并抑制有害菌的作用。试食低聚果糖前后,未观察到过敏及其他不良反应;人体血红蛋白、红细胞、白细胞、血清谷丙转氨酶、血、尿、便常规、心率及血压等基本在正常范围,说明本品对试食者健康无不良影响。1.4.1.1一般状况:包括精神、睡眠、饮食、大小便、血压和心率等。