宫颈上皮内瘤变及宫颈癌相关分子机制的探讨

宫颈上皮内瘤变及宫颈癌相关分子机制的探讨

在女性癌症的死因中，乳腺癌排名第二。在发达国家，它是女性最常见的肿瘤，占女性所有肿瘤的25%。目前研究表明,宫颈癌的发生与人乳头状瘤病毒(Humanpapillomavirus,HPV)感染密切相关,是宫颈癌及癌前病变的必要条件。现在对宫颈病变没有特异性指标,因此,需要寻找其他分子生物学标志物(如P16INK4A、Ki-67)来监测宫颈病变,以达到对宫颈癌的早期预防和治疗。笔者探讨P16INK4A、Ki-67在宫颈不同病变组织中的表达和HPV16/18的感染情况及其与宫颈病变的关系。1材料和方法1.1颈组织不同组织和因子组全后活检内容不同选择华北煤炭医学院和开滦医院病理科宫颈组织存档蜡块94例,其中包括慢性宫颈炎20例、CINⅠ13例、CINⅡ17例、CINⅢ20例和宫颈癌24例。1.2抗人单克隆抗体P16INK4A鼠抗人单克隆抗体和Ki-67兔抗人单克隆抗体均购自福州迈新生物技术有限公司。HPV16/18型DNA序列由上海生工合成,DNA提取试剂盒及PCR反应试剂盒均购自上海生工。1.3pcr检测pv6if-97、ki-97的表达宫颈石蜡标本连续切片,厚4μm,分别行免疫组化法检测P16INK4A、Ki-67的表达,应用PCR技术检测HPV16/18型DNA。严格按照说明书操作。1.4黄配套病细胞检测P16INK4A阳性结果为宫颈异常鳞状上皮细胞核和/或细胞浆出现棕黄色颗粒,Ki-67阳性为细胞核出现黄褐色颗粒。光镜下每张切片观察5个有代表性视野,计数200个细胞中的阳性细胞数,取平均值,无阳性细胞或阳性细胞百分率<5%为阴性(-)、阳性细胞百分率<25%为弱阳性(+)、阳性细胞百分率26%~50%为阳性(++)、阳性细胞百分率>50%为强阳性(+++)。1.5统计方法采用χ2检验或Fisher确切概率法,相关性Spearman等级相关分析,检验水准为α=0.05。2结果2.1组患者有统计学意义的比较表1在慢性宫颈炎组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌组,P16INK4A阳性表达率分别为0.0%(0/20)、53.8%(7/13)、76.5%(13/17)、95.0%(19/20)、100.0%(24/24)。CINⅢ组及宫颈癌组和其他各组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。P16INK4A蛋白表达强度与病变级别呈正相关,r=0.862,P<0.01。见表1。2.2%0/20、97.2%、97.2%/33.2%是表达利益/对比,5/32.2/32.2%是表达社会/对异质性分布的调节,2.在慢性宫颈炎组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组及宫颈癌组中,Ki-67阳性表达率分别为0.0%(0/20)、69.2%(9/13)、88.2%(15/17)、95.0%(19/20)、91.7%(22/24)。CIN组及宫颈癌组与慢性炎症组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),Ki-67表达强度与宫颈病变级别呈正相关,r=0.771,P<0.01。见表2。2.3强调患者的感染率HPV16/18型在慢性宫颈炎组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌组中的感染率分别为10.0%、30.8%、52.9%、50.0%、66.7%,差异有统计学意义(P<0.05)。宫颈癌组与CINⅠ组、慢性宫颈炎组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.4预测的表达强度与hp18/18型感染的相关性在94例宫颈不同病变组织中,经Spearman等级相关分析,P16INK4A表达强度与HPV16/18型感染呈正相关,相关系数r=0.583,P<0.05,Ki-67的表达强度与HPV16/18型感染呈正相关,相关系数r=0.431,P<0.05。3妊娠新发病例及发病年龄情况宫颈癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一,据世界范围内统计,每年新发病例中有80%来自发展中国家。我国每年新发病例约13.15万,占世界每年宫颈癌新发病例总数的28.8%,且近年来呈现地区增长及发病年龄提前的现象。宫颈癌的发生、发展是从正常宫颈→CIN→宫颈癌逐渐演化的过程,是多因素共同作用的结果,除HPV感染外,宿主癌基因激活和抑癌基因失活,某些细胞因子、生长因子及其受体也参与了宫颈癌的形成和发展。3.1/18在因变量表1.研究证实持续性HPV感染是发生宫颈病变的必要条件。本实验应用PCR法检测HPV16/18在宫颈不同病变组织中的感染情况,在慢性宫颈炎组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌组中的感染率分别为10.0%、30.8%、52.9%、50.0%、66.7%。随宫颈病变程度的加重,HPV16/18型感染率逐渐增加。3.2s1a在阴完善病患者中的表达P16INK4A基因是20世纪90年代初在人染色体9p21发现的第一个直接参与细胞周期调控的抑癌基因。在正常细胞中,P16基因则可特异地与CDK4或cyclin-CDK4复合物结合,抑制CDK4的活性,从而抑制细胞由G1期进入S期,对细胞增殖周期起负调节作用。但研究发现P16INK4A在大多数宫颈癌及癌前病变中呈高表达。本实验应用免疫组化法检测P16INK4A在94例不同程度宫颈病变组织中的表达情况,发现在慢性宫颈炎组中无阳性表达病例,而在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌组中,P16INK4A阳性表达率分别为53.8%、76.5%、95.0%和100.0%,CINⅢ和宫颈癌组阳性率明显高于其他各组,这与国外学者的研究结果一致。经相关性分析,随着宫颈病变程度的加重,P16INK4A的阳性表达强度逐渐增强,且表达强度与宫颈病变程度呈正相关(r=0.862),与文献的研究结果一致。可能是由于HR-HPV感染的宫颈癌组织中由于HR-HPVE7蛋白结合pRb,使其功能失活,解除了pRb对P16INK4A蛋白表达的负反馈抑制,引起P16INK4A过表达。3.3ki-97在因子上的表达情况Ki-67是由Gerdes等首先发现的一种与细胞周期相关的增殖细胞核抗原,属于非组蛋白抗原。其编码基因位于第10号染色体,其有两种变异体,基因全长分别为115kb和125kb,由15个外显子组成,其在维持细胞增殖活性中起重要作用,是细胞增殖活性的指标,而肿瘤发生的最直接表现就是细胞增殖活性的提高。本实验应用免疫组化法检测Ki-67在宫颈不同程度病变组织中的表达情况,发现在慢性宫颈炎组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组和宫颈癌组中,Ki-67表达阳性率分别为0.0%、69.2%、88.2%、95.0%和91.7%,CIN组与宫颈癌组分别与慢性宫颈炎组比较,差异有统计学意义,结果同文献的报道一致。相关性分析结果显示,随着宫颈病变的发展,Ki-67阳性表达率逐渐增加,且表达强度与宫颈病变程度呈正相关(r=0.771),与贾薇等的研究结果一致。可能与HR-HPV感染后原癌基因改变了细胞周期调节基因的表达,促使细胞异常增殖,使Ki-67呈现过度表达。可见在宫颈病变的发生、发展连续过程中伴有细胞增殖能力的显著增强,表明Ki-67与宫颈病变的发生、发展可能有一定的关系。3.4妊娠合并心脏病显微变异本实验结果显示,P16INK4A、Ki-67都与HPV16/18