如达溃疡散对幽门粘结法大鼠的保护作用

如达溃疡散对幽门粘结法大鼠的保护作用

溃疡是一种常见的临床疾病和疾病，可以发生在不同的年龄。病理机制复杂，易于治愈，容易复发。我国是胃溃疡发病的高发地区之一。如达溃疡散是根据内蒙古自治区名老中医临床经验,在如达-6的基础上加减而成,由木香、石榴、瞿麦、砂仁、荜茇、红花、寒水石、黑冰片等十味药组成,具有温中和胃、止痛解痉、收敛生肌之功效,用于治疗脾胃虚弱、气滞寒凝络损型消化性溃疡,取得较好的临床疗效。本实验旨在探讨其相关药理作用机制,以便为临床提供更加可靠的实验依据。1实验材料1.1实验动物雌性、健康、清洁级SD大鼠60只,体重(200±20)g,购于北京市维通利华实验技术有限公司。1.2味药物组成如达溃疡散:由木香、石榴、瞿麦、砂仁、荜茇、寒水石、黑冰片等十味药物组成,各药材均由内蒙古万民药店提供;奥美拉唑肠溶胶囊:哈药集团三精制药,批号:090236。1.3测试试剂表皮生长因子、前列腺素E2试剂盒:北京华英生物技术研究所提供。1.4主要设备TD24-WS低速台式自动平衡离心机;生物光学显微镜:Olympus。2胃窦部组织病理学检测2.1动物分组及给药50只大鼠随机分成5组,如达溃疡散高、中、低剂量组予如达溃疡散2g/kg·d-1、1g/kg·d-1、0.5g/kg·d-1,西药组给予奥美拉唑肠溶胶囊3.6mg/kg·d-1,模型对照组给予等体积生理盐水,每日1次,连续15天。2.2模型制备采用大鼠幽门结扎法进行造模。灌胃并常规饲养到第13天时,各组动物禁食不禁水48小时,于第15天灌胃1小时后开始实验。将大鼠置入乙醚钟罩内麻醉。常规消毒,自剑突沿腹中线切开腹壁,找到胃体,使其暴露于切口,在幽门下穿线,将幽门和十二指肠结合部结扎,剪线后还纳胃体,并逐层缝合,切口及周围再次消毒,将大鼠放回饲养笼,禁食水。2.3观察指标及检测2.3.1表皮生长因子(EGF)、前列腺E2(PGE2)测定造模5小时后断头处死大鼠,采血,分离血清,-20℃冰箱保存。用放射免疫法测定测表皮生长因子(EGF)、前列腺素E2(PGE2)含量,具体由北京华英生物研究所检测。2.3.2胃游离黏液的测定取血后剪开大鼠腹腔,分别结扎贲门、幽门取胃,迅速置于1%甲醛溶液10分钟后,沿胃大弯剪一小口,将胃液收集在离心管中,3000r/min,离心20分钟,取离心后的胃液1.0ml加入0.1ml1%阿尔新蓝,然后加入pH5.8的柠檬酸-磷酸缓冲液3.3ml,最后加水至5.0ml,标准管用1ml蒸馏水代替胃液,以柠檬酸-磷酸缓冲液作空白,将上述上清液在分光光度计上比色(λ615nm),测得之光密度值表示未与黏液结合的阿尔新蓝的量。胃游离黏液量=1mg-测得OD值/标准0D值×1mg。2.3.3溃疡指数的测定按参考文献评分标准来评定,以积分法计算溃疡指数,即出血点为1分,线状出血坏死斑长度<1mm者为2分,1～2mm者为3分,2～4mm者为4分,>4mm者为5分,全胃分数总和为其溃疡指数。2.3.4炎症指数的测定10%甲醛溶液中固定胃窦部组织,按常规方法,脱水、透明、浸蜡、包埋、修块、连续切片,行苏木素-伊红染色,脱蜡、染色、脱水透明和封片,用生物光学显微镜,观察胃窦部黏膜损伤程度、出血点及溃疡灶。并依据参考文献评定分数的方法,用半定量方式来表示。即轻度:出现上皮细胞脱落、崩解并少量炎性细胞浸润;中度:仅出现少量出血点;重度:出现大量出血点并形成溃疡灶。轻、中、重3度相应分数为1分、2分、3分,按上述方法,每个标本取5个视野计算平均值后可作为其炎症指数。2.4统计方法采用SPSS13.0统计软件包进行统计分析,所得实验数据用(x¯±s)(x¯±s)表示,多个样本均数比较采用方差分析,其两两比较采用LSD法。3结果3.1各组大鼠病理形态的变化3.1.1不同剂量对奥美拉唑组胃内典型组织的影响处死大鼠取出全胃,可见胃体显著增大,且颜色较暗,胃中充满胃液,模型对照组尤重。低剂量组与奥美拉唑组胃内可见黏液较多,黏膜皱襞较多,个别散在出血点;中、高剂量组黏膜皱襞出现向溃疡集中现象,而模型对照组溃疡较明显,中心凹陷,周围隆起,基底大多覆有灰白色的黏性颗粒状渗出物。3.1.2不同剂量治疗达社会放射线事件中上皮细胞的组织形态观察模型对照组:胃黏膜明显变薄,腺体明显减少,部分固有层中性粒细胞渗出,黏膜层及下层出现大量出血灶、红细胞渗出、淤血明显,上皮细胞坏死、溶解;上皮细胞明显坏死,出现大片明显溃疡灶。奥美拉唑组:上皮细胞溶解、少量脱落。如达溃疡散低剂量组:固有层部分区域淋巴细胞浸润,上皮细胞排列整齐,腺体大小形态较一致,无明显变性坏死;出现少量血细胞,余细胞形态清晰,结构尚完整。如达溃疡散中剂量组:固有层区域有出血灶;黏膜浅层、深层均有出血灶,胃皱襞略少,上皮细胞出现坏死、脱落。如达溃疡散高剂量组:黏膜层及下层有出血灶、淤血灶;上皮细胞溶解、少量脱落。3.2表1显示了各组大鼠胃指数、炎症指数和胃游离粘膜含量的测定3.3表2显示了各组大鼠血清egf和pge2含量的测定结果4达溃疡散的临床作用胃溃疡属中医学“胃脘痛”、“吞酸”等范畴,多因情志所伤、过度疲劳、饮食不节或过食辛辣厚味等因素,导致脾气虚弱、瘀血阻滞、脉络失养而成。脾胃虚弱是主要病因,气滞血瘀为最基本的病理基础。如达溃疡散中砂仁化湿开胃、健脾止泻、行气宽中,用于湿浊中阻,脘痞不饥,脾胃虚寒,呕吐泄泻,如《药性论》言:“主冷气腹痛,止休息气痢,劳损,消化水谷,温暖脾胃”。《本草求真》言:“缩砂,为醒脾调胃要药。其言醒脾调胃,快气调中,则于腹痛痞胀有功”;木香行气止痛、健脾消食,用于脘腹胀痛,泻痢后重,食积不消,不思饮食;荜茇温中散寒,主治脘腹冷痛,呕吐吞酸,肠鸣泄泻;红花活血化瘀祛邪以治标,诸药合用,使脾气得复、瘀血得化、新血得生、胃肠得养。临床应用于胃溃疡治疗有良好效果。现代药理研究表明,砂仁含挥发油及皂甙,其挥发油有健胃作用,能增进肠道运动,可排除消化道积气;木香对胃肠道有兴奋或抑制双向作用,可利胆、抑菌,并有解痉之功;荜茇挥发油有抗菌、抗病毒的作用。本实验结果显示如达溃疡散可明显改善大鼠胃溃疡的病理形态学变化,减少溃疡指数和炎症指数,增加胃内游离黏液,由此提示如达溃疡散具有保护胃黏膜,减轻胃黏膜损伤,促进胃黏液分泌作用。表皮生长因子(EGF)主要由唾液腺产生,对胃黏膜有多种作用,被称作是促进溃疡愈合的调节因子,不仅能够刺激胃肠黏膜上皮蛋白质合成,加速适应性溃疡的愈合,改善胃黏膜血循环和增强黏膜屏障的作用,还可通过与壁细胞上的EGF受体(EGFR)作用而抑制胃酸的分泌,在胃肠道中浓度相对较高,在人与动物慢性胃和十二指肠溃疡中,溃疡边缘新形成的细胞系可表达EGF,修复过程中表皮生长因子受体(EGFR)明显上调。以往动物实验表明,经口服或皮下注射人工合成的EGF均可以显著增强大鼠胃黏膜对药物损伤的保护作用。前列腺素E2(PGE2)是胃黏膜极为重要的防御因子,主要生理作用为抑制胃酸分泌,抑制胃液中蛋白水解酶的活性,增加碳酸氢盐和黏液的分泌,增加胃黏膜血流,可保持胃黏膜微血管的完整性,减少血管充血,使完好的胃小凹细胞快速移行修复破坏