中药泡沫剂对家兔细菌性和霉菌性支气管炎作用的实验研究

中药泡沫剂对家兔细菌性和霉菌性支气管炎作用的实验研究

中药泡沫剂是预防和准备的妇科阴道疾病的中药药物。它是由中药黄、黄连、楼床、蛇床子、苦参等中医药开发的。具有抗菌、消炎、止痒、阴道滋润等功能。为了验证其有效性和安全性，根据国家有关药物的生产和使用规定，对鸡、菌、性阴道和真菌性阴道的刺激进行了初步动物实验。1材料表面1.1保妇康栓、聚乳酸酯中药低浓度、中浓度、高浓度泡沫剂由云南海正生物科技有限公司研制提供;保妇康栓,海南碧凯药业有限公司生产,国药准字(Z46020058,批号:20110930;)碘伏,昆明利健消毒制品有限公司,批准文号:卫消字(2005)第0205号,批号:20120501.1.2动物饲养与材料初成年雌性未孕新西兰实验兔,体重2.6～3.0kg,由昆明医科大学实验动物中心提供,生产许可证号为SCXK(滇)2011-0004,饲料由昆明医科大学实验动物学部提供,生产许可证号为SCXK(滇)2011-0005;实验前适应性饲养7d。1.2.1动物饲养于云南中医学院实验动物室普通级动物房,温度20～26℃,相对湿度:40～70%,噪音:60<分贝,动物照度:10～18lx;12h/12h明暗交替。使用许可证:SYXK(滇)2011-0011;发证单位:昆明市科技局;饲养兔笼为30cm×45cm×40cm的不锈钢笼具,由苏杭实验设备厂生产。每天上下午喂家兔全价颗粒饲料并观察,自由饮用自来水。1.3动物阴道和宫颈感染的纯抗病性药物白色念珠菌、金色葡萄球菌、大肠杆菌、病料收集无菌女性试子等,由云南省第一人民医院临床微生物检验室提供。1.4压力蒸汽灭菌器GHP-927型隔水式恒温培养箱,LAZX75KBS型立式压力蒸汽灭菌器,上海景洪实验设备有限公司生产。THZ-D台式恒温振荡器,太仓市实验设备厂生产。2方法的结果2.1动物模型的生产和组成2.1.1阴道制作成功标准制作动物模型前对家兔阴道PH值检测为7.2±0.2。把纯种金色葡萄球菌、大肠杆菌经传代培养制作高浓度病菌悬浮液,用浓度为1×109CFU/mL金色葡萄球菌、大肠杆菌混悬液0.2mL,经导管注进家兔宫颈内,每天1次,连续造模3天后,临床检查动物外阴及阴道红肿及出现分泌物情况,取阴道及宫颈分泌物经临床微生物检验是否含染病病源菌,以外阴及阴道发生明显水肿阴道及宫颈分泌物经临床微生物检验含有染病病源菌,判断阴道炎制作成功。2.1.2小鼠睾丸中含细菌病源菌检测把纯种白色念珠菌经传代培养制作高浓度病菌悬浮液,用浓度为1×109CFU/mL白色念珠菌混悬液0.2mL用导管注进家兔宫颈内,每天1次,连续造模3天后,临床检查动物外阴及阴道水肿红肿及出现分泌物情况。临床检查动物外阴及阴道红肿及出现分泌物情况,取阴道及宫颈分泌物经临床微生物检验是否含染病病源菌。以外阴及阴道发生明显水肿阴道及宫颈分泌物经临床微生物检验含有染病病源菌,判断阴道炎制作成功。2.1.3集体给药和观察2.1.3.动物分组及给药将造模成功的50只家兔随机分为模型、碘伏、低浓度、中浓度、高浓度泡沫组,一共5组,另外取10只未造模雌性家兔作为空白对照组,每组每只兔每天给相应药物一次,连续给药6d,给药剂量灌满阴道和到达宫颈部及涂抹阴门周围为准,空白对照组给予无菌生理盐水。每日对动物一般行为和外阴情况进行观察,末次给药6h后临床检查动物外阴及阴道红肿及出现分泌物情况,取阴道及宫颈分泌物经临床微生物检验是否含染病病源菌。外阴及阴道红肿判为阳性(+),否则判为(-),分泌物经临床微生物检验含阳性菌判为阳性(+),否则判为(-),2.1.3.动物分组及给药将造模成功的50只家兔随机分为模型、保妇康栓、低浓度、中浓度、高浓度泡沫组,一共5组,另外取10只未造模雌性家兔作为空白对照组,每组每只兔每天给相应药物一次,连续给药6天,给药剂量灌满阴道和到达宫颈部及涂抹阴门周围为准,空白对照组给予无菌生理盐水。每日对动物一般行为和外阴情况进行观察,末次给药6h后临床检查动物外阴及阴道红肿及出现分泌物情况,取阴道及宫颈分泌物经临床微生物检验是否含染病病源菌。外阴及阴道红肿判为阳性(+),否则判为(-),分泌物经临床微生物检验含阳性菌判为阳性(+),否则判为(-)。2.1.4小鼠阴道组织病理学检查实验方法按卫生部《消毒技术规范》(2002年版)阴道黏膜刺激实验开展。选用健康、成年,实验前应检查动物阴道口有无分泌物、充血、水肿和其它损伤情况的雌性白色新西兰家兔24只,体重2.0kg～2.5kg。将动物随机分为:阴性对照组、低浓度受试物、中浓度受试物组、高浓度受试物组、每组6只;给药:每日将动物仰面固定,暴露出会阴和阴道口。将导管用受试液或对照液湿润后轻柔地插入阴道(3cm～4cm),缓慢喷入灌满受试液,抽出导管,完成一次给药,每日如上给予相应受试样品一次,对照组动物用生理盐水作同样处理,连续用药6d。末次给药后24h,采用气栓法处死动物,剖腹取出完整的阴道,纵向切开,肉眼观察是否有充血、水肿等症状,供病理取材时参考,然后将阴道放入10%福尔马林溶液中固定24h以上,选取阴道的两端和中央3个部位的组织制片,HE染色后,进行组织病理学检查。病理解剖检验,按阴道黏膜刺激反应评分标准(表1)进行评分,按阴道黏膜刺激强度分级标准(表2)确定刺激性强度。2.2各组大鼠阴道黏膜及刺激性比较各组动物造模后,外阴出现明显红肿,并出现分泌物,而空白组未观察到明显变化,模型组和各给药组动物出现焦躁不安舔舐外阴的症状,随着不断给药,各给药组动物的红肿现象逐步减轻,但给剂量组变化不一,以高剂量较为明显;造模后动物食量和饮水减少,空白组饮食正常,模型组体重明显下降,具体见表3。各组动物造模后,外阴出现明显红肿,并出现分泌物,而空白组未观察到明显变化,模型组和各给药组动物出现舔舐外阴的症状,随着不断给药,各给药组动物的红肿现象逐步减轻,但给剂量组变化不一,以高剂量较为明显,造模后动物食量和饮水减少,空白组饮食正常,体重明显增加,模型组体重明显下降,具体见表4。解剖检验,各组动物阴道黏膜未见明显充血、水肿、糜烂,经组织病理学检查,低浓度受试物组对阴道黏膜刺激指数为0.5,泡沫剂中浓度泡沫剂阴道黏膜刺激指数为0.4,泡沫剂高浓度受试物组对阴道黏膜的刺激指数为1.1,按阴道黏膜刺激强度分级标准(表3)分别确定为无刺激性和极轻度刺激性。动物造模3天后,与空白组比较,动物外阴及阴道出现了明显的红肿和分泌物,通过连续6d给药,阳性药组和中药泡沫剂低、中、高剂量组动物的红肿和分泌物症状均有不同程度改善,中药泡沫剂还表现出明显的量效关系,说明中药泡沫剂对家兔的细菌性和变色念珠菌引起的阴道炎有一定的治疗作用,中药泡沫剂低、中浓度对家兔阴道无刺激性,高浓度为极轻度刺激性。说明随着浓度增加,对家兔阴道刺激性也增加,临床使用要注意用药浓度。3中药泡沫剂的应用3.1细菌性阴道炎试验中模型对照实验组家兔阴道上皮组织恢复和体质较差;在培养鉴定过程中观察到金色葡萄球菌大肠杆菌生长占优势,杂菌生长几乎观察不到,动物出现焦躁不安,饮食明显减少,体重明显下降等症状;碘伏消毒液治疗家兔细菌性阴道宫颈炎,家兔阴道宫颈上皮组织恢复和体质恢复一般;在培养鉴定过程中观察到杂菌与金色葡萄球菌大肠杆菌生长优势相当;低、中浓度中药泡沫剂治疗家兔细菌性阴道宫颈炎,家兔阴道宫颈上皮组织恢复和体质恢复一般;在培养鉴定过程中观察到杂菌生长占优势,金色葡萄球菌大肠杆菌生长处于弱势状态。高浓度中药泡沫剂治疗家兔细菌性阴道宫颈炎,家兔阴道宫颈上皮组织恢复和体质恢复较好;在培养鉴定过程中观察到杂菌生长占明显优势,金色葡萄球菌大肠杆菌生长处于弱势状态,这种情况可能与中药泡沫剂中含有黄柏、黄连、重楼、蛇床子、苦参等提取物具有一定的抑制细菌生长和抗炎止痒作用有关。3.2霉菌性阴道炎实验中模型组家兔霉菌性阴道宫颈炎,家兔阴道宫颈上皮组织恢复和体质恢复较差,白色念珠菌阳性的样本,白色念珠菌生长站明显优势;保妇康栓治疗组家兔阴道宫颈上皮组织恢复和体质恢复稍好,白色念珠菌阳性的样本,观察到杂菌生长与白色念珠菌生长优势相当;低、中浓度泡沫剂组,家兔阴道宫颈上皮组织恢复和体质恢复较模型组稍好,白色念珠菌阳性的样本,观察到杂菌生长与白色念珠菌生长优势相当;高浓度泡沫剂治疗家兔霉菌性阴道宫颈炎,家兔阴道宫颈上皮组织恢复和体质恢复较好;白色念珠菌阳性的样本,外观观察到杂菌生长占优势,白色念珠菌生长明显处于弱势状态,这种情况可能与中药泡沫剂中含有黄连、黄柏、苦参的有效抑制细菌和真菌的有效成分有关,另外中药泡沫剂中含有重楼、蛇床子的提取物具有一定抗炎止痒作用,可以减轻动物因感染造成的霉菌性炎症所引起的瘙痒,从实验中可以观察到中药泡沫剂中高剂量组动物焦躁不安和舔舐外阴的症状明显低于模型对照组,从阳性菌检出率和病理检查结果也得到印证。3.3通过上述实验数据分析,低浓度泡沫剂治疗家兔细菌性阴道宫颈炎,家兔阴道宫颈上皮组织恢复和体质恢复一般,疗效较差;而高浓度泡沫剂对家兔细菌性阴道宫颈炎和霉菌性阴道宫颈炎作用较好,家兔阴道宫颈上皮组织恢复和体质恢复及疗效较好;说明中药泡沫制剂疗效随中药提取物浓度加大而增强,并呈现一定的量效关系;虽然中药泡沫剂低、中浓度对家兔阴道无刺激性,高浓度为极轻度刺激性。说明随着浓度增加,对家兔阴道刺激性也增加,临床使用要注意用药浓度。三种不同浓度消炎抗菌外用泡沫剂药用于人体,还需考虑病源病灶环境的酸碱度及感染菌毒力强弱以及泡沫剂浓度高以后对阴道带来的刺激性增加;(家兔阴道PH值均为7.