野生银耳菌丝的分离与交合

野生银耳菌丝的分离与交合

银杏是中国境外的一种著名食品和药物。在古田县科技局、古田县食用菌产业管理局重视下,由宁德市科技局立项。选调当地科研人员,组成《野生银耳种源选育优良菌株》研究课题组,由本所负责主持开展该项目的科研试验工作。通过一年多来全体课题组成员共同努力,从采集的野生耳木中,选育出一个杂交组合的银耳菌株,经过三次重复试验,效果较好。现将一年多来的分离选育试验情况初报如下:1材料和方法1.1白云村与南安全性村锁定野生银耳种源采集地点为福建省漳州市龙海县白云村与南靖县南坑村这两个地方。通过实地考察,南靖县南坑村原始森林,有野生银耳发现,通过当地农民配合采集到13个长有银耳的种木。1.2试验培养基1.2.1植物硫酸镁盐马龄薯200g,银耳适生木屑40g,豆秆粉20g,麸皮60g,琼脂26g,优质红糖12g,硫酸镁2g,石膏2g,清水3000mL。适生木屑、豆秆粉先煮20min,取其滤液;另将马龄薯切片煮熟不烂,取其滤液;把两者滤液混合,麸皮冲洗后加入滤液入锅煮,并加入石膏,煮15min再过滤后,加入琼脂、红糖、硫酸镁搅拌溶化,装管经高压灭菌,摆成斜面。1.2.2料:水比5.5%,红出汁7.5%,石膏5.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%;红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出6.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%,红出5.5%适生木屑43.5%,棉子壳8%,豆秆粉10%,麸皮35%,红糖0.5%,石膏3%,料:水比1:1.5。配制时棉子壳装入瓶底部高25mm,其他按常规方法操作。1.3代身份证的测定将2007年6月6日至15日在南靖县南坑村先后两批征集的野生银耳种木13个,分别定名代号为A1a1、A2a2、A3a3、A4a4、A5a5、A6a6、A7a7和B1b1、B2b2、B3b3、B4b4、B5b5、B6b6。其中大写字母代表银耳纯菌丝,小写字母代表香灰菌丝,具体操作方法:1.3.1浸泡和浸渍法先采用无菌水冲洗耳木表面,再用75%的医用酒精进行10s左右的浸泡,然后用无菌水反复冲洗2～3遍,再用无菌纱布将耳木表面水分吸干。1.3.2香灰植物基材料在无菌条件下,用锋利小刀除去耳木表面材质,选取耳木内部有香灰菌丝特有的斑纹处,采取竖横的切割方法,挖取适量的耳木基质接入母种培养基上。每个耳木各接30～50支,提取耳木中的香灰菌丝,置于23～25℃的恒温条件下培养。1.3.3银耳的培养基培养将耳木放入玻璃干燥器中,强行逼干3～5d,在靠近耳基的上、中层部位,采用上述的同样切割方法,挖取适量的耳木基质接入母种培养基上,为了能够获取有价值的银耳纯菌丝,在每支试管中各接入2～3个耳木基质,每个耳木各接30～50支,然后置于20～22℃的恒温条件下培养观察。1.3.4木屑培养基上的专一性交合为了确认每个野生耳木品种的特性,继续在木屑培养基上进行专一性交合,经20～25℃恒温条件下培养40d,观察对比4个野生品种两种菌丝在木屑培养基上的生长表现。1.3.5选择非特异性交组合的比较选取B5银耳纯菌丝与a5、b4两种香灰菌丝在木屑培养基上进行非专一性交合在恒温条件下培养40d,观察其亲和表现。2结果与分析2.14银耳种木及其他银耳属植物的生长特性通过上述的分离获得了感观上有价值银耳纯菌丝及香灰菌丝有4种,代号分别是A1a1、A5a5、B4b4、B5b5,其余9个耳木因基质分化,受自然界杂菌侵染严重,无法提取两种菌丝而淘汰。将得到的4个野生银耳种木两种菌丝,通过转管提纯后,在母种培养基上,经22～24℃的恒温条件下培养10d的生长情况(表1)。从表1可以看出4个野生耳木分离得到的银耳纯菌丝与香灰菌丝,其生理特征基本相似,但在母种培养基上的外观表现略有不同,以A1、B5两种银耳纯菌丝表现最好,B4次之,A5最差;而香灰菌丝以a5表现最好,a1、b4次之,b5最差。2.24银耳和香灰植物的木屑培养基上的生长对比为了确认每个野生耳木品种的特性,继续在木屑培养基上进行专一性交合,经20～25℃恒温条件下培养40d,观察对比4个野生品种两种菌丝在木屑培养基上的生长表现,见表2。4种野生耳木分离得到的银耳纯菌丝与香灰菌丝,在木屑培养基上进行专一性交合培养,从表2可以看出,各代号菌株的两种菌丝,在木屑培养基上的生长情况都没有其一致性的较佳表现。银耳纯菌丝以B5,香灰菌丝则以a5表现为最好。2.3非专一性交合培养银耳的可行性决定选取B5银耳纯菌丝与a5、b4两种香灰菌丝在木屑培养基上进行非专一性交合在恒温条件下培养40d,观察其亲和表现(表3)。从表3两组非专一性交合培养情况看,B5×a5的两种菌丝生长状况与出耳及品质都表现亲和力强,白毛团分泌水珠与出耳比专一性交合提前两天,有进一步用于生产试验的价值。而B5×b4则不能亲和,应淘汰。通过上述两组“非专一性”野生银耳菌丝交合培养情况分析,“非专一性”交合培育银耳菌株,存在着成功与失败的可能性。也就是说,从自然界获取的野生银耳菌丝,进行非专一性交合,有亲和的可能与不亲和的因素存在。3银耳品种对银耳菌株的诱导诱导3.1征集野生银耳种木,除了观察子实体外观表现外,还需注意耳木的基质,对基质分化严重的耳木,在分离提取银耳两种菌丝时难度相当大,成功机率低,不宜作为种木使用。3.2在试验中发现,同一地区征集分离得到的野生银耳品种,其生理特性基本相似,而在同一木屑培养基上分点接入不同代号的香灰菌丝进行培养观察时,发现相互之间又会形成明显拮抗线,如图1、2。这说明不是同一品种香灰菌丝,也可以初步判断为一个耳木上野生银耳是一个品种。因此,征集自然条件下生存的野生银耳种源,对寻求特优性状的银耳菌株机率较高。3.3通过野生银耳提取的香灰菌丝的拮