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Module1：实时荧光定量PCRModule1：实时荧光定量PCR技术原理Theworldleaderinservingsciece什么是实什么是实时荧光定量一种实时监控核酸扩增的技2定量PCR如何工作各种类型的荧定量PCR如何工作各种类型的荧光标记物3定量PCR如何工作• PCR大量PCR产 4定量PCR如何工作• PCR大量PCR产 4定量PCR仪如何工作3.定量PCR仪如何工作3.5定量PCR如何工作•定量PCR如何工作•加循环滤A样品16定量PCR如何工作7定量PCR如何工作7定量PCR的数学原定量PCR的数学原8PCR动力学曲线和四个阶PCR动力学曲线和四个阶对数图线性图9指数增长期内扩增曲线指数增长期内扩增曲线具有高度重次重复循环数荧光信定量PCR扩增曲线的各种定量PCR扩增曲线的各种概基阈值线Ct什么是基线什么是基线基线扣除BeforeAfter基线扣除BeforeAfter什么是阈值什么是阈值什么是Ct值什么是Ct值如何使用Ct值计算结果 234567LogcopyCt如何使用Ct值计算结果 234567LogcopyCt定量PCR的化学原定量PCR的化学原两种化学方TaqMan探针两种化学方TaqMan探针法染料法TaqMan探针法TaqMan探针法3报告基团淬灭基团TaqMan水解探针作用机TaqMan水解探针作用机(95C)(95C)(60(60C)??5′-3′外切酶5′-3′外切酶活!!实时记录每个实时记录每个循环后荧光信号的变荧循环荧光标记组报荧光标记组报告荧光参比荧光6-FAM、JOE、VIC、NED、CY3、TexasRed、常用的荧光组合目的基因参比荧荧光染料组DyeExcitationWaveEmissionWave1FAM™,2VIC®,3NED™,荧光染料组DyeExcitationWaveEmissionWave1FAM™,2VIC®,3NED™,4ROX™,Texas5CY5DyeExcitationWaveEmissionWave12VIC®,34ROX™,TexasSYBR®GreenSYBR®GreenI染料SYBR®GreenI作用机理SYBR®GreenI作用机理SYBR®GreenI作用机理SYBR®GreenI作用机理SYBR®GreenSYBR®GreenI作用机理实时记录每个循环实时记录每个循环后荧光信号的荧循环SYBR®GreenI方法的局SYBR®GreenI方法的局限任何双链，非特异结非特异产物信号不准确结果通过熔解曲线检查产物通过熔解曲线检查产物特异•荧温单

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