实验二.蛋白质的两性反应与等电点测定

实验二

蛋白质的两性反响与

等电点测定1整理ppt

了解蛋白质的两性解离性质

掌握测定蛋白质等电点的方法实验目的2整理pptPCOOHNH2PCOO-NH3+PCOO-NH2PCOOHNH3+pH=pI+OH-pH>pI+H++OH-+H+pH<pI兼性离子

阳离子阴离子实验原理3整理ppt

在等电点时蛋白质颗粒上的净电荷为零，缺乏同电相斥的因素，蛋白质溶解度最小，最容易析出沉淀

维持蛋白质胶体稳定的因素：外表电荷、水化膜4整理ppt

本实验配制了各种不同pH值的缓冲液，沉淀出现最多的缓冲液pH值即为酪蛋白的等电点5整理ppt实验器材与试剂

大试管、滴管、刻度吸量管

0.5％酪蛋白醋酸钠溶液

0.01％溴甲酚绿指示剂(指示范围:

pH3.8-5.4)

0.02MHCL溶液、0.02MNaOH溶液

0.01M醋酸溶液、0.10M醋酸溶液、

1.00M醋酸溶液6整理ppt蛋白质的两性反响〔1〕实验步骤取一干净试管酪蛋白液10滴溴甲酚绿指示剂3滴观察溶液颜色并解释现象7整理ppt蛋白质的两性反响〔2〕滴加0.02MHCL溶液边滴加边混匀有最大沉淀产生，观察溶液颜色变化至沉淀消失，观察溶液颜色并解释现象继续滴加0.02MHCL溶液边滴加边混匀8整理ppt蛋白质的两性反响〔3〕继续滴加0.02MNaOH溶液边滴加边混匀有最大沉淀产生，观察溶液颜色变化至沉淀消失，观察溶液颜色并解释现象继续滴加0.02MNaOH溶液边滴加边混匀9整理ppt

溶液呈蓝色蛋白质的两性反响(1)实验结果

酪蛋白溶液呈碱性(pH﹥5.4)，使溴甲酚绿指示剂显蓝色10整理ppt[H+]，沉淀蛋白质的两性反响(2)

出现最大量沉淀时,说明到达了酪蛋白的等电点溶液由蓝色变成浅绿色〔3.8﹤pH﹤5.4〕11整理ppt

继续加酸，[H+]继续增大，pH＜pI。酪蛋白所带正电荷不断增加，同电相斥，沉淀溶解

沉淀完全溶解时，溶液显黄色(pH﹤3.8)12整理ppt[OH-]，沉淀蛋白质的两性反响(3)

出现最大量沉淀时,说明到达了酪蛋白的等电点溶液由黄色变成浅绿色〔3.8﹤pH﹤5.4〕13整理ppt

继续加碱，[OH-]继续增大，pH﹥pI。酪蛋白所带负电荷不断增加，同电相斥，沉淀溶解

沉淀完全溶解时，溶液显蓝色(pH﹥5.4)14整理ppt结论1：

酪蛋白的等电点在pH3.8-5.4之间pH=pI时，蛋白质溶解度最小

蛋白质是两性电解质15整理ppt取7支同样规格的枯燥试管，精确参加各试剂试管号码1234567蒸馏水2.43.2—3.01.52.753.381.00M醋酸1.60.8—————0.1M醋酸——4.01.0———0.01M醋酸————2.51.250.62pH3.53.84.14.75.35.65.9

酪蛋白等电点的测定注：单位均为mL16整理ppt

向每个试管中各加0.5%酪蛋白溶液20滴，加一管，立即混匀一管

静置30分钟后，以0、+、++、+++、++++表示各管的混浊度，并指出哪一种pH是酪蛋白的等电点17整理ppt1234567沉淀量0++++++++++00

酪蛋白等电点的测定1234567实验结果18整理ppt结论2：4号试管沉淀量最多

说明4号管溶液的pH值为酪蛋白的等电点，即pI=4.7

什么是蛋白质的等电点？在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？思考题20整理ppt实验工程实验原理