生化汤对子宫作用的影响

生化汤对子宫作用的影响

生化汤是妇科疾病的常用方剂，尤其是治疗产后疾病的常用方剂。它具有活血化瘀、调经止痛的功效。所有配方都由当归、川药、桃仁、浸姜和甘草组成。该方源于南宋末年的《女科秘要》,后被《傅青主女科》收录而广为流传,时至今日已广泛应用于临床,疗效显著。许多科研工作者做了大量的工作和较深入的研究,并取得了一定的成果,本文就近5~10年来生化汤的研究进展做一简要综述。1关于药理学的研究1.1生化汤提取物对妊娠合并心脏病精子肌电近年来在生化汤对子宫作用的影响上研究较多,且主要以研究孕后动物的子宫平滑肌为主,对正常未孕及产后动物子宫平滑肌的影响较为少见。赵丁等通过对正常未孕、雌激素预处理后及产后小鼠的离体子宫的观察,发现对正常未孕小鼠,低剂量生化汤提取物使其子宫平滑肌收缩频率增强,收缩强度无显著影响,因而子宫活动力略增强,但无统计学差异,中剂量使其子宫平滑肌收缩频率略增加,收缩强度减弱,子宫活动力减弱,高剂量使其子宫收缩频率和强度均减弱,子宫活动力减弱,呈现“双向作用”;对雌激素预处理后的小鼠,低、中、高剂量均使其子宫收缩频率显著增强,但收缩强度无明显变化,子宫活动力显著增强;对产后小鼠的子宫,低、中剂量使子宫平滑肌收缩频率略增强,收缩强度显著减弱,子宫活动力显著减弱,高剂量对收缩频率无显著变化但收缩强度明显减弱,子宫活动力显著减弱。洪敏等对生化汤与缩宫素对怀孕末期家兔子宫平滑肌电活动的影响进行了对比,结果表明,生化汤提取物能明显增加怀孕末期家兔子宫体的肌电活动,但对子宫颈的肌电活动作用不明显,说明生化汤提取物能显著提高怀孕末期家兔子宫平滑肌的兴奋性,引起子宫收缩,发动分娩,但对子宫颈作用不明显,这有利于产程正常进行。通过观察离体子宫平滑肌的肌电动作电位时程,表明生化汤提取物诱发的子宫体收缩富有节律性,温和而持久。王明军等通过对生化汤缩宫效应的正交设计分析,发现川芎与炮姜的组合是促进子宫收缩的最佳组合。他们又对生化汤与芎姜合剂的缩宫效应进行了对比,发现两个处方达到缩宫药峰的时间不同,芎姜合剂药峰时间较早,但是二者在各药峰时间的灌胃给药血清的缩宫作用相近。李喜香等采用大鼠离体子宫运动实验及玻片法和断尾法观察了新生化口服液对大鼠子宫运动和小鼠出/凝血时间的影响,发现新生化口服液对大鼠离体子宫收缩蠕动有明显促进作用,可使离体子宫收缩频率增加,收缩幅度升高;可明显缩短小鼠出/凝血时间,并增加子宫收缩幅度及收缩频率,说明它可通过提高子宫肌壁张力,减少充血,缩短凝血时间,促进增生过厚的子宫内膜迅速剥脱而止血。1.2生化汤治疗血流变性血管炎作用的研究生化汤中的当归、川芎、桃仁等均属活血化瘀药物,对血液及心血管系统有显著的作用。任清华等研究发现生化汤具有明显的抗体外血栓形成的作用,说明生化汤对血液的流变性及心血管系统有一定影响,可改善高黏度的血流。宋金春等通过对生化汤及生化丸对血瘀证大鼠作用的观察,发现生化汤中、高剂量组和生化丸组的红细胞聚集指数和红细胞电泳指数均显著低于模型组(P<0.05),同时正常组和高剂量组的红细胞变形指数显著低于模型组(P<0.05),且呈一定的量效关系,说明生化汤可明显降低正常大鼠的全血比黏度、全血还原黏度、红细胞聚集指数、红细胞电泳指数等一系列指标,提示生化汤具有一定改善血液流变性及血液淤滞状态的作用。他们又通过对生化汤诱导ADP大鼠血小板聚集率、血小板黏附率以及红细胞数、血小板数、血红蛋白浓度影响的观察,发现生化汤可抑制血小板的聚集和黏附且呈现一定量效关系;对于正常大鼠,生化汤能显著降低血小板聚集百分率及血小板黏附率,提高血小板抑制百分率,从而进一步说明了生化汤活血化瘀,缩短小鼠出/凝血时间的功效。胡小勤等运用免疫组织化学和RT-PCR方法,观察了生化汤不同剂量对血瘀证动物模型血管内皮细胞几种黏附分子及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,结果提示生化汤对血瘀证大鼠血管内皮细胞黏附分子蛋白及mRNA的表达,尤其对mRNA的表达,呈现出了明显的量效关系,从分子生物学和分子免疫学角度阐明了生化汤治疗血瘀诸证的作用。另外,宋金春等对生化汤补血作用进行了研究。通过实验观察得知生化汤能有效的提高失血性贫血小鼠的红细胞和血红蛋白;对环磷酰胺所致的小鼠骨髓有核细胞减少有明显的改善作用,对骨髓的造血机能有明显的促进作用;对小鼠的髓外造血有一定的促进作用。可见生化汤可以使本来就活跃的造血功能更加活跃,有明显的抗贫血作用,并能促进骨髓及脾脏的造血功能。宋金春等还通过实验观察到生化汤对健康大鼠细胞、血红蛋白、血小板在正常的波动范围内有一定的提升作用,这说明生化汤在改善血液流变性的同时还具有一定的补血、养血作用。综上所述可见,生化汤在对血液及心血管系统的作用表现为:明显缩短小鼠出/凝血时间,抗体外血栓作用,改善血液流变性,改善微循环,促进骨髓及脾脏的造血功能等作用,这些正好对应了其去瘀生新,既活血又止血的功效。1.3明生化汤治疗侯涿生等对生化汤抗炎作用进行了研究。在三批实验中,生化汤组有两只小鼠在给药后3h,巴豆混合液所致的肿胀完全消失,说明生化汤在对抗炎症的治疗中,能消除瘀血水肿,明显的减轻小鼠耳部的炎性肿胀。杨奎等对小鼠灌胃生化汤后,亦发现它能明显抑制醋酸所致的小鼠扭体反应(P<0.05)。另外杨奎等于小鼠分娩后24h开始,灌胃给药生化汤,1次/d,给药7d后小鼠子宫重量明显减轻,胎盘点消失快,对ICR种小鼠产后子宫复旧有明显作用(P<0.05),但对小鼠体重无明显影响。1.4家兔口服阿魏酸加生化汤后的药动学特征王雁梅等利用反相高效液相色谱仪,对健康女性志愿者口服生化汤后血清中的阿魏酸含量进行了药动学研究,结果显示健康女性服用生化汤后,体内药动学归属二室开放模型,T1/2Ka为11.19min,吸收速率常数Ka为0.062min-1,达峰时间为22.78min,说明生化汤复方有效成分自胃肠吸收迅速;T1/2α为18.72min,分布速率常数α为0.037min-1,说明复方中有效成分在体内分布较快;T1/2β为79.21min,消除速率常数β为0.009min-1,说明复方中有效成分在体内消除过程较快。此结果与宋金春等用高效液相色谱法对家兔口服生化汤后血浆药动学特征相比结果大致相同,后者的血药浓度-时间关系符合二室模型,只是家兔血药浓度达峰时间(12.74min)较晚。宋金春等又对家兔口服阿魏酸及口服阿魏酸加生化汤后阿魏酸的血药浓度进行了药动学比较,数据处理和模型拟合后得兔口服阿魏酸及兔口服阿魏酸加生化汤后的阿魏酸分布、代谢呈开放性一室模型,阿魏酸加生化汤对阿魏酸相对生物利用度为302.5%,药动学参数表明兔口服阿魏酸后,血中阿魏酸吸收非常迅速(Ka、T1/2Ka和Tpeak),消除缓慢[Ke、T1/2Ke和CL/F(s)];加服生化汤后,加快了阿魏酸的吸收(Ka、T1/2Ka、Cmax和AUC),减缓了阿魏酸消除[Ke、T1/2Ke和CL/F(s)],提高了阿魏酸的相对生物利用度达2倍。1.5生化汤对小鼠肝肾功能及组织形态的影响杨奎等按1.23g/kg和24.6g/kg生化汤的耐受量对大鼠灌胃给药,1次/d,连续14d,观察生化汤对动物生长发育情况和体重、肝功能、肾功能和血常规的影响,结果表明,生化汤对动物的生长发育、体重、肝功能、肾功能、血常规和对心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、卵巢及子宫形态组织均无明显毒性损伤作用。李喜香等根据有关文献进行了急性毒性试验,将新生化口服液按最大可给药浓度给小鼠灌胃给药,1d内给药3次,间隔时间4h,连续观察7d,小鼠未见死亡发生,也未见明显异常反应,计算得小鼠1日给药最大耐受量为临床成人用量的800倍,表明该药安全系数较大。1.6指纹图谱检测宋金春等运用血清药物化学方法对生化汤进入人体内以何种成分、何种形式发挥作用及其作用机制进行了初步研究。发现给药后血清指纹图谱中当归和川芎有较好的谱峰,其他各味药谱峰不理想,可能与当归和川芎为君、臣药有关,也可能是流动相不适合的关系;并发现了在生药中没有对应来源的峰。其结果初步阐明了生化汤血清的部分化学成分及来源,通过各单味药、生化汤和含药血清指纹图谱的比较,得知生化汤各效应成分并不是简单的加和关系,体外看似主要成分却并不一定是主要药效部位。2不同溶剂对生化汤药效学的影响因为阿魏酸为当归、川芎中所含的主要成分,所以多数配伍组方化学分析研究中均以阿魏酸为指标。宋金春等以阿魏酸为指标,用反相高效液相色谱法对生化汤各味药的配伍进行了研究,结果表明生化汤原方中阿魏酸的煎出量在各样本中最高;当归与川芎合煎,阿魏酸的煎出量有一定加和性,加入桃仁、甘草、干姜后阿魏酸的煎出量降低。王雁梅等用阿魏酸为指标,对生化汤单煎液和共煎液中阿魏酸含量进行了比较,发现生化汤共煎液中的阿魏酸的溶出量明显高于单煎液(P<0.01)。王雁梅等运用反相高效液相色谱法对生化汤用不同溶媒煎煮阿魏酸的煎出量进行观察,结果表明,不同溶媒煎煮的生化汤中,阿魏酸的溶出量存在极显著差异(P<0.01),阿魏酸溶出高低顺序为:(童便+黄酒)>(黄酒+童便+水)>(黄酒+水)>水;(黄酒+童便)、(黄酒+童便+水)与水煎组比,均可显著提高汤剂中阿魏酸溶出量(P黄酒+童便+水、P黄酒+童便<0.01);(黄酒+水)与水煎组无明显差别(P黄酒+水>0.05)。此前也有报道称用水200ml、黄酒100ml浸泡10min,煎煮,沸后20min,过滤,残渣加水100ml再煎煮,沸后10ml阿魏酸煎出率较高。王明军等观察了加味生化汤饮片共煎与单煎的药效学差异,发现不论是单煎还是共煎,药效大体一致,均可促进离体小鼠子宫肌肉的收缩,但是共煎组止血效应优于单煎组。王明军又对该方不同提取部位的时效关系进行了比较与分析,发现水提醇沉物具有促进子宫收缩的作用,不同提取部位对正常小鼠离体子宫肌活力产生的影响不同,复方挥发油的抗子宫收缩作用与水溶性成分醇提物的促子宫收缩作用反映了复方物质基础的多样性。关于炮制因素对生化汤方剂中有效成分的影响,王雁梅等做了研究。他们考察了由甘草和干姜的不同炮制品与生化汤中其他三味药组合构成的4种样本中阿魏酸含量的变化,说明干姜、甘草的不同炮制方法对生化汤中阿魏酸的煎出率有影响,其中生化汤经典组方(炮姜+炙甘草)组阿魏酸含量最高。3内含量测定3.1测定条件及结果饮片及制剂中主要成分的含量测定多以质量控制为目的,以目前文献报道来看,高效液相色谱法是目前测定生化汤及其制剂主要成分含量应用最广泛的方法,此法具有测定样品范围广、样品制备步骤少、成本低、分离效率高、灵敏度高、测定结果准确等特点。报道中多以反相高效液相色谱为手段,多测定阿魏酸和川芎嗪含量,选择紫外检测器检测波长多为322nm,也有的选择280nm,以甲醇、水、冰醋酸以不同比例混合为流动相,外标一点法定量,超声或回流提取后测定。宋金春等以甲醇-水(7∶18)(含1%的冰醋酸)为流动相,C18ODS柱(250mm×4.6mm,5μm)为固定相,紫外检测波长为280nm,外标法定量,对阿魏酸和川芎嗪含量测定进行了研究,结果阿魏酸和川芎嗪分离完全,阿魏酸在8.06~64.48mg/L的浓度范围内线性关系良好,方程为Y=1811.32+1170.33X,r=0.9954,平均回收率为97.9%,RSD为1.4%;川芎嗪在4.03~20.15mg/L的浓度范围内线性关系良好,回归方程为Y=16.60+1401.94X,r=0.9941,平均回收率为101.9%,RSD为2.6%。另外,也有对甘草酸、水苏碱含量测定进行研究的。丁桂兰等采用高效液相色谱法,以C8分析柱(150mm×6.0mm,5μm)为固定相,流动相为甲醇-醋酸铵溶液(0.2mol/L)-冰醋酸(60∶40∶1),检测波长为250mm,流速为1.01ml/min,柱温为35℃,对生化汤丸中甘草酸进行了含量测定。结果甘草酸浓度在0.23~1.19μg/ml范围内与峰面积呈线性关系,r=0.9999,平均回收率为99.51%,RSD=0.53%(n=5)。冯守文等采用双波长扫描法,硅胶G薄层板以正丁醇∶盐酸∶乙酸乙酯(4∶1.5∶0.5)展开,稀碘化铋钾试剂显色,双波长(λs=510nm,λR=700nm,狭缝0.4mm×0.4mm,SX=3)反射式锯齿扫描,对新生化口服液中水苏碱的含量进行了测定,结果水苏碱含量在0.18~0.30mg/ml范围内与峰面积呈线性关系,r=0.9990,回收率为97.85%,RSD=1.8%。3.2家兔耳静脉生化汤紫外检测结果宋金春等用水浴法除去蛋白后,采用反相高效液相色谱,以甲醇-水(7∶18)(含1%冰醋酸)为流动相,C18ODS柱(4.6mm×250mm,10μm),紫外检测波长为280nm,同时测定了家兔耳静脉注射生化汤后血清中阿魏酸和川芎嗪的含量,结果阿魏酸与川芎嗪有较好的分离,阿魏酸在30.2~70.8μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.9974),川芎嗪在10.1~50.7μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=0.9922),回收率分别为100.3%、100.1%。4生化汤口服液成分检测生化汤方中当归为君药、川芎为臣药,中国药典中主要以阿魏酸含量控制当归、川芍的质量,但是中国药典未收录生化汤有关制剂质量标准,因此,多数饮片及制剂质量控制研究中以控制当归和川芎质量为主,并以阿魏酸作为含量测定指标。王祥等采用理化方法和薄层色谱法对生化口服液的主要成分益母草、当归、川芎进行鉴别,结果用理化方法鉴别益母草药材中益母草碱反应明显,薄层色谱中当归、川芎斑点清晰,阴性对照无干扰,对于控制生化汤口服液的内在质量具有实际意义。邱孟等以阿魏酸为指标对制剂中有效成分进行了测定,结果回收率高,线性关系良好。李喜香等对新生化口服液质量控制方法进行了研究,采用TLC法以硅胶G铺板,阿魏酸、红参对照药材、白术对照药材、辛弗林为对照品,对新生化口服液中的当归、红参、白术、枳壳进行了定性鉴别,结果显示能有效地检出其所含中药有效成分;他们还选择其方中君药益母草中的盐酸水苏碱为指标,采用双波长薄层扫描法对其进行了含量测定,结果满意。5制备工艺研究生化汤原方以汤剂为用,现阶段中成药剂型研究中基本上是在汤剂的基础上水提醇沉,进一步浓缩、除杂而制成,所以提取工艺多在醇沉浓度、加水量(水酒比例)、煎煮次数、煎煮时间上优化。宋金春等采用正交设计,选择阿魏酸含量为指标,对优化生化汤的提取工艺进行了研究,结果以水煎煮2次、溶剂量分别为12倍和10倍、再次煎煮时间为30min为优。汪国华等采用比较试验及正交实验法,以总固体得率、阿魏酸含量、挥发油提取率为考察指标对生化汤颗粒提取工艺进行了优选,结果药材粉碎度和蒸馏时间对挥发油提取率影响较大,以粉碎度20目,加12倍水浸泡1h,蒸馏3h,挥发油提取率最高;用70%乙醇浸渍药材36h后,以8倍量70%乙醇,1ml/min漉速,渗漉提取有效成分溶出量最高,且结果稳定。另外,李喜香等采用正交实验法,选择加水量、煎煮次数、煎煮时间、醇沉浓度4个因素,以水苏碱含量、药液色泽、澄清度、沉淀物为指标对新生化口服液提取工艺进行了优化,最佳方法为:煎煮3次,每次分别加水20、15、12倍量,每次2h,醇沉浓度为70%,但是加水量对有效成分提取无显著意义。之后他们同样又用正交实验法,以挥发油提取率为指标,加水量、浸泡时间、蒸馏时间为因素对新生化口服液中挥发油的提取工艺进行了研究,结果发现蒸馏时间对挥发油提取无显著影响,最佳工艺条件为:加水7倍量,蒸馏6h。6生化汤复方基础研究的建议及展望近年来,生化汤的药理、含量测定、制剂及其质量控制方面均取得了一定成就。药理学方面,虽然取得了一定进展,但还是主要侧重于生化汤在中医基础理论方面的研究,用药效学来印证中医理论中其化瘀生新、温经止痛之功效,对生化汤的体内吸收、分布、转化、排泄过程研究甚少,其有效成分及具体的药理作用位置、靶点尚不明确;另外,还没有对体内药物生物转化效应进行全面检测,只是对方中极个别的主要成分进行检测;分子生物学和免疫学方面的研究尚有许多空白;这些均影响了有效部位的研究与开发,给制剂工作者带来了难度。所以制剂方面,还是以与生化汤原方形式相似的口服液、颗粒剂、胶囊剂等原始制剂类型研究为主,提取工艺也只能满足现有剂型需要,对新剂型缺乏研究,缺乏先进性。质量控制方面主要是以阿魏酸为指标,但是这样是否科学,仍是一个难题。中药复方与天然组合化学库相似,作用呈多靶点、多层次,干扰因素多,因此也给中药及其复方的药理、药剂、质量控制等研究带来了一定困难。应借鉴现代药理学、药剂学、药物分析学的研究方法,结合中医药理论特色,从药物(复方、药材)、有效部位、有效水平(整体、动物实验、器官和组织细胞、分子生物学、免疫学)来研究中药物质基础和配伍理论及药效-药动的相关性。对今后的研究工作笔者提出个人的建议如下。6.1对生化汤复方的研究应遵循整体性原则。中医强调辨证施治,从脏腑的联系、人和自然关系等方面,