oxa浓度对凝固酶阴性葡萄球菌mrs型耐药的影响

oxa浓度对凝固酶阴性葡萄球菌mrs型耐药的影响

抗苯唑西林注射液（mrs）的检测对类黄酮类黄酮的治疗具有重要的预测性。MRS型耐药预示对于β-内酰胺类药物、β-内酰胺酶抑制剂、配能类药物,无论药敏结果是否敏感,均应报告耐药。1999年1月,美国临床实验室标准委员会(NCCLS)刊出的药物敏感试验执行标准中,更改了针对CNS的OXA药敏试验标准;但只有纸片扩散法(K-B法)和最低抑菌浓度(MIC)的执行标准,而无琼脂筛选法的标准。考虑到琼脂筛选法是检测MRS最可靠和较简便的方法,在筛选法中选择合适的苯唑西林(OXA)浓度决定了实验的可靠性。我们于2000年初,采用新版K-B法和MIC标准,对临床鉴定的141株CNS进行检测并辅以其它试验,旨在探索琼脂筛选法中适用的OXA的浓度。1材料和方法1.1细菌分离株的分离和测定141株CNS分离自本院住院和门诊病人的血液、痰液、尿液及各种脓性分泌物。其中溶血葡萄球菌37株、表皮葡萄球菌41株、松鼠葡萄球菌17株、腐生葡萄球菌12株、华纳葡萄球菌12株、孔氏葡萄球菌8株、人葡萄球菌6株、模仿葡萄球菌4株、木糖葡萄球菌3株、耳葡萄球菌1株。1.2a庆大霉素-gen、四环素、tet、氯霉素-chl-cmp封装OXA粉剂由苏州第二制药厂生产(失效期2001.1),克拉维酸(CA)由江西制药厂提供,OXA、庆大霉素(GEN)、四环素(TET)、红霉素(ERY)、环丙沙星(CIP)、氯霉素(CHL)纸片为天坛药物生物公司产品,用金黄色葡萄球菌(ATCC25923)质控;M-H琼脂为Oxoid公司产品,检测OXA时NaCl浓度调至40g/L。1.3oxa的cns抑菌圈直径按NCCLS标准(1999)执行。其中OXA对CNS的抑菌圈直径新标准为≥18mm为敏感(S),≦17mm为耐药(R)。1.4内酰胺酶试验用Vitek-32GPI-SV卡测试。1.5mic0.0.0.25、0.5、0.5、10.5、8.0、8.0按NCCLS标准(1999)执行。OXA浓度(μg/ml)分别为0、0.125、0.25、0.5、0.75、1.0、2.0、4.0、8.0。MIC≥0.5μg/ml为R,≤0.25μg/ml为S。质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC29213。1.6内酰胺酶抑制剂按OXA的MIC法在各浓度中分别加入4μg/mlCA,OXA/CA的MIC比OXA≤2个稀释度判为酶抑制试验阳性。1.7oxa抗癫痫药的表型分类见表1,OXA的MIC在0.5～1μg/ml之间的CNS菌株在本试验中按表1标准推断表型。2结果2.1均r/均r特性141株CNS中,两法均为S的45株,均R的85株;K-B法S而MIC法为R的11株,未出现K-B法R、MIC法S现象;两法符合率为92.20%。2.2l的低耐株类型苯唑西林MIC0.5～1μg/ml的低耐株共15株,根据表型特征推断,MRCNS2株、MSCNS8株、MOD-SA或其它5株。见表2。2.3产酶菌株mic检测在OXA低耐株中,9株MIC0.5μg/ml,其中7株为产酶MSCNS,2株为MOD-SA或其它;MIC0.75μg/ml的3株,1株为产酶MSCNS,2株为MOD-SA或其它:MIC1μg/ml的3株,1株为产酶MSCNS,2株为MOD-SA或其它。根据以上结果,OXA的筛选浓度选为0.75μg/ml较适宜。3k-b法与其他非-内酰胺类药物的交叉耐药目前,葡萄球菌对β-内酰胺类耐药主要分为三大类,第一类是由于枯草杆菌mecA基因转入葡萄球菌,编码产生了新的青霉素结合蛋白PBP2a而导致的耐药,其耐药机制为PBP2a与β-内酰胺类药物的亲和力较低,并能行使多种PBPs的功能,是造成葡萄球菌耐所有β-内酰胺类药物的根源,并常常表现为对非β-内酰胺类药物交叉耐药。第二类是由于产生较高的水平的β-内酰胺酶导致耐药,它们往往对酶抑制剂敏感。第三类是由于PBPs被修饰,致使其与药物亲和力下降,对OXA表现为R或S,酶抑制剂不能降低MIC,对非β-内酰胺类药物,常常不出现交叉耐药。1999年以前,NCCLS检测所有葡萄球菌耐OXA均采用同一标准,只是CNS延长至48h观察结果,1999年以后,对CNS执行了新的标准,估计因为带有mecA基因CNS对OXA的实验室表型比金黄色葡萄球菌要敏感,执行相同的标准会导致CNS中MRCNS的漏检,而且,新的标准可以在24h报告结果,缩短了检测时间,K-B法药敏试验由于方法本身的局限性,误差较稀释法高,而稀释法又因为操作繁琐,不易常规开展,琼脂筛选法既能较准确检测耐药水平,操作也较简便。建立该法的关键是选择一个相对合理的OXA筛选浓度,应尽可能避免错检和漏检。在本实验15株OXA低耐株中,若选择OXA0.25μg/ml为筛选浓度,那么,MIC≥0.5μg/ml的菌株将均被判断为MRCNS,则有8株MSCNS被误判为MRCNS。同理,选OXA0.5μg/ml为筛选浓度,则在MIC≥0.5μg/ml的菌株中将有1株MSCNS误判为MRCNS,若选OXA0.75μg/ml为筛选浓度则没有误判现象。在以上三种选择中,均会出现MOD-SA被判为MSS或MRS,考虑到MOD-SA型改变,OXA可以表现为S或R,很难用OXA试验分辨,需要参考Borderline现象,CA抑制试验及非β-内酰胺类药物的交叉耐药结果等做出综合评定,而目前这种耐药尚属少见。根据以上分