DB43-T 959.1-2023 异种移植用无指定病原体（DesignatedPathogen Free,DPF）医用供体猪 第1部分：遗传质量控制

ICS

70.080CCS

B

43湖 南 省 地 方 标 准DB43/T

959.1—2023代替

.异种移植用无指定病原体（

Free,

DPF）医用供体猪第部分：遗传质量控制Medical

grade

DPF

donor

pig

for

xenotransplantationPart1:Genetic

quality

control2023

-

11

-

09

发布

2024

-

-

实施湖南省市场监督管理局

发

布DB43/T

959.1—2023 前言························································································································

Ⅲ引言························································································································

Ⅴ1

·····················································································································12

规范性引用文件······································································································13

术语和定义············································································································14

遗传分类及命名······································································································25

·····················································································································26

近交系异种移植用无指定病原体（DPF）医用供体猪的遗传质量监测··································37

封闭群异种移植用

医用供体猪的遗传质量监测·························································

4DB43/T

959.1—2023本文件按照

GB/T

—《标准化工作导则 第

1

部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件是

《异种移植用无指定病原体（Designated

Free,

DPF）医用供体猪》的第

1

部分。DB43/T

已发布了以下部分：——第

1

部分：遗传质量控制；——第

2

部分：微生物、寄生虫学等级与监测；——第

3

部分：配合饲料；——第

4

部分：病理学诊断规范；——第

5

部分：环境与设施。本文件替代

DB43/T

959.1—2014《异种移植用无指定病原体（Designated

Pathogen

Free,

）医用供体猪

第

1

DB43/T

959.1—2014

相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：a）

增加了“引言”一章；b）

更改了术语“近交系”定义（见

3.2，2014

3.2）；c）

更改了术语“封闭群”定义（见

3.3，2014

3.3）；d）

1

近交系异种移植用

DPF

4

封闭群异种移植用

DPF

、，2014

版的

、7.2）；e）

增加了近交系微卫星检测内容（见表

3）；f）

更改了封闭群微卫星检测内容（见表

5，2014

版的表

4）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省科学技术厅提出并归口。本文件起草单位：中南大学湘雅三医院，湖南赛诺生物科技股份有限公司。本文件主要起草人：王维、胡鹏志、马小倩、李桑、徐畅、王佳、石兴勇。本文件及其所替代文件的历次版本发布情况为：——2014

年首次发布为

959.1—2014；——本次为第一次修订。IIIDB43/T

959.1—2023 异种移植用无指定病原体（Designated

Pathogen

Free,

）医用供体猪标准化能更好的促进异体系中，DB43/T

959《异种移植用无指定病原体（Designated

Pathogen

DPF）医用供体猪》是指导湖南省异种移植用无指定病原体医用供体猪培育的基础性和通用性的标准。DB43/T

旨在确立环境设施的准则，拟由五个部分构成。——第

1

——第

2

生物安全性。——第

3

部分：配合饲料。目的在于保障异种移植用无指定病原体医用供体猪饲料的安全和营养。——第

4

内容和方法。——第

5

设施建设。好这项工作，湖南省在

年发布了有关异种移植用无指定病原体医用供体猪遗传质量控制规定的地方标准。DB43/T

959.1

发布实施已九年，这期间异种移植相关技术不断更新，供体猪遗传质量控制受

WHO

2018

长沙宣言》以及

959.1

DB43/T959.1，以不断适应国内外相关遗传质量控制检测的新变化以及异种移植用无指定病原体医用供体猪发展的新需求，确保高质量异种移植用无指定病原体医用供体猪的稳定发展。是检测标准。本次对

959.1

的修订，重点考虑了近交系和封闭群的区分以及检测方法，明确了病原体医用供体猪的研发、生产和应用，推动异种移植临床研究发展。DB43/T

959.1—2023Designated

DPF

1

本文件规定了异种移植用无指定病原体（Designed

Pathogen

Free,

）医用供体猪的遗传分类、繁殖方法和近交系及封闭群的遗传质量标准。本文件适用于异种移植用

DPF

医用供体猪的遗传质量控制。2

规范性引用文件文件。GB

14923 实验动物

遗传质量控制NY/T

1673 畜禽微卫星

3

术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1异种移植用

DPF

医用供体猪

grade

DPF

pig

for

月龄体重宜不超过

50

织（World

Health

Organization，WHO）指定供体动物应排除的潜在感染或条件致病和感染性人畜共患体、科学研究、教学、生产和质量控制鉴定以及其他科学实验的小型猪。3.2近交系

strain一个动物群体中，任何个体基因组中

98.6％以上的座位为纯合的品系。

20

20

inbreeding

98.63.3封闭群

不引进外部动物、在群体内随机选择动物进行繁殖，以维持有限杂合度的实验动物种群。DB43/T

959.1—20234

遗传分类及命名4.1遗传分类根据遗传特点的不同，异种移植用

医用供体猪分为近交系和封闭群。4.2 命名4.2.1 近交系XENO

等。4.2.2 近交代数近交系的近交代数用大写英文字母

F

30

）。4.2.3 其它近交系亚系、支系、重组近交系、同源突变近交系、同源导入近交系的定义和命名按照

14923

执行。4.2.4 封闭群命名封闭群的命名按照

执行。5

5.1 近交系的繁殖5.1.1 选择近交系异种移植用

医用供体猪繁殖方法的原则是保持近交系小型猪的等位基因纯合性。5.1.2 作为繁殖用种子的近交系异种移植用

DPF

5.1.3 foundation

stock）、血缘扩大群（pedigree

expansion

stock）和生产群（stock群、血缘扩大群和生产群的具体繁殖方式按照

GB

14923

执行。5.2 封闭群的繁殖5.2.1 选择封闭群异种移植用

医用供体猪繁殖方法的原则是保持封闭群小型猪的遗传异质性及基因多态性，避免近交系数增速过快。测结果判定标准遗传概貌完全一发现遗传变异一个位点的标记基因与标准遗传概貌不一致传发生变异样数100100

DB43/T

959.1—20235.2.2 5.2.2.1 作为繁殖用种子的封闭群异种移植用

DPF

医用供体猪应遗传背景明确或来源清楚，有完整的5.2.2.2 根据繁殖方式，在保证每代近交系数增量不大于

1％的前提下，决定最小引种规模。如采用循环交配方式，引种数量不得少于

对无血缘关系（三代以内无共同祖先）的公母猪；若采用随机交配方式，引种数量不得少于

25

对无血缘关系的公母猪。5.2.3 封闭群保持封闭群异种移植用

方法按照

14923

执行。6

近交系异种移植用无指定病原体（DPF）医用供体猪的遗传质量监测6.1 检测方法采用微卫星

DNA

标记检测方法。具体方法按照

NY/T

1673

执行，各微卫星

标记的染色体位置、等位基因数、等位基因片段范围、引物序列、荧光标记、PCR

反应的

值、镁离子浓度等见表

3。6.2 抽样对基础群，凡在子代留有种猪的双亲动物都应进行检测。对生产群，按表

1

要求从每个近交系中随机抽取非同窝成年猪。表

1 表

1 近交系异种移植用

医用供体猪遗传检测抽样要求近交系异种移植用

医用供体猪遗传检测结果的判定按表

2

执行。表

2 表

2 近交系异种移植用

医用供体猪遗传检测结果判定标准所有样品检测微卫星

DNA

植用

医用供体猪近交系，否则判为不合格。6.5 检测频率近交系异种移植用

医用供体猪生产群每年至少进行一次遗传质量检测。序号座位染色体位置等位基因数（个）等位基因段范围bp荧光标记引物序列

5'3'Tm（℃）2+Mg

(mM)1CGA112250-320FAMF-ATAGACATTATGTAAGTTGCTGATR-GAACTTTCACATCCCTAAGGTCGT552.5SW76913553.0SW85714551.5S000510553.05SW24021192-114TAMRAF-AGAAATTAGTGCCTCAAATTGGR-AAACCATTAAGTCCCTAGCAAA581.5S03551514553.07SW7238100-116TAMRAF-ATCAGAACAGTGCGCCGTR-GTTTGAAAATGGGGTGTTTCC551.58S0090124244-251TAMRAF-CCAAGACTGCCTTGTAGGTGAATAR-GCTATCAAGTATTGTACCATTAGG551.59S0218X11158-196TAMRAF-AAGATCATTTAGTCAAGGTCACAGR-TCTGATAGGGAACATAGGATAAAT541.510SW2417896-121FAMF-CTTTGGGTGGAGTGTGTGCR-ATCCAAATGCTGCAAGCG551.5体数量样数量100

15100

30DB43/T

959.1—2023表

3 各微卫星

DNA

物序列（左侧：F，右侧：R7

封闭群异种移植用物序列（左侧：F，右侧：R7.1 检测方法采用微卫星

DNA

标记检测方法。具体方法按照

NY/T

1673

执行，各微卫星

标记的染色体位置、等位基因数、等位基因片段范围、引物序列、荧光标记、PCR

反应的

值、镁离子浓度等见表

5。7.2 抽样按表

4

要求从每个封闭群中随机抽取非同窝成年猪。表

4 表

4 封闭群异种移植用

医用供体猪遗传检测抽样要求群体内遗传变异采用平均杂合度指标或群体平衡状态方法进行评价。当平均杂合度在

0.5-0.7

序号座位名称染色体位置等位基因数（个）等位基因段范围bp引物序列

5'3'Tm（℃）2+Mg

(mM)1SW974117129-175F-GGTGAAGTTTTTGCTTTGAACCR-GAAAGAAATCCAAATCCAAACC582.02S009121496-174F-TCTACTCCAGGAGATAAGCCAGATR-CAGTGACTCCATCACAGTTATGA551.53SW24021192-114F-AGAAATTAGTGCCTCAAATTGGR-AAACCATTAAGTCCCTAGCAAA581.54SW1066319166-214F-GCAGGATGAACCACCCTGR-CTCTTGAGGCAACCTGCTG602.05SW1089410142-190F-TTTTCCCCTTCACTCACCCR-GATCAAAGTCCCTTACTCCGG581.5S000510200-248F-TCCTTCCCTCCTGGTAACTAR-GCACTTCCTGATTCTGGGTA553.07SW1057614142-191F-TCCCCTGTTGTACAGATTGATGR-TCCAATTCCAAGTTCCACTAGC582.08SW63279148-173F-TGGGTTGAAAGATTTCCCAAR-GGAGTCAGTACTTTGGCA542.09OPN812138-170F-CCAATCCTATTCACGAAAAAGCR-CAACCCACTTGCTCCCACC592.010SW29812133-187F-AGGGTGGCTAAAAAAGAAAAGGR-ATCAAATCCTTACCTCTGCAGC612.011SW911914151-178F-CTCAGTTCTTTGGGACTGAACCR-CATCTGTGGAAAAAAAAGCC602.012SW511912161-196AAGCAGGAATCCCTGCATCCCCAGCCACCAGTCTGAC621.513SWr1581018158-200F-TCCAATTCAACTCCTGGCTCR-GAATGTGCACATACCACATGC602.014SW9511014108-142F-TTTCACAACTCTGGCACCAGR-GATCGTGCCCAAATGGAC581.515SW271313111-144F-TTCCATGGCTTTCTTCR-CATTCATTCCCAGTGAAACTTG581.516S03861112155-178F-TCCTGGTCTTATTTTCTAR-TTTTTATCTCCAACAGTAT482.017S00681310210-256F-CCTTCAACCTTTGAGCAAGAACR-AGTGGTCTCTCTCCCTCTTGCT622.0DB43/T

959.1—2023封闭群异种移植用

医用供体猪群体。或用群体是否达到平衡状态来判定，如果没有达到平衡状态，

DPF

体方法按照

NY/T

1673

DNA

PCR反应的

Tm

值、