肾上腺皮质激素与性激素课件

肾上腺皮质激素与性激素第十章 甾体激素类药物的分析The

Analysis

of

Steroid

Hormon

Drug张蕾中药分析教研室2基本结构：环戊烷骈多氢菲C31A4235B610

9111213D14871517161819第一节 基本结构和分类一、母核

1,4环上双键的表示方法：Δ双键位置

4

5

5(10)4二、分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素 孕激素雌激素雄性激素及蛋白同化激素51．肾上腺皮质激素皮质酮的衍生物Δ4-3-酮基：UV、与羰基试剂反应11C17位有α-酮醇基：还原性C11位有-OH或=O母核含有21个C6代表药物：可的松氢化可的松7人工合成药物：地塞米松氢化可的松结构的基础上1，2位间引入一个双键，9位上引入α-F，16位上引入α-CH3氢化泼尼松在氢化可的松结构的基础上1，2位间引入一个双键121291689结构特点：含有21个CA环：Δ4-3-酮结构（α,β-不饱和酮）ⅲ．17位：α-醇酮基，有还原性。人工合成品：1、2位间有双键，6α位，9α位引入卤素，16α位或16β位引入甲基，

16α位引入羟基等。2．雄性激素及蛋白同化激素睾丸素的衍生物结构特点：(1)母核含有19个C(2)A环的Δ4-3-酮(3)17位羟基\甲基\酯蛋白同化激素在C10位上一般无角甲基10代表药物：甲基睾丸素丙酸睾丸素苯丙酸诺龙113．孕激素结构特点：

(1)含有21个C(2)A环的Δ4-3-酮黄体酮

(3)17位甲酮基与亚硝基铁氰化钠反应124．雌激素—雌二醇、炔雌醇及衍生物炔雌醇雌二醇雌酮结构特点：母核含有18个CA环：苯环，3位Ar-OH10位无甲基17位：羟基、乙炔基13口服避孕药炔诺酮异炔诺酮安宫黄体酮1415小结甾体激素碳原子数A环17位取代基肾上腺皮质激素21Δ4-3-酮α-醇酮基雄性激素19Δ4-3-酮β-OHα-CH3孕激素21Δ4-3-酮甲酮基雌激素18苯环C3-酚OHβ-OHα-C≡CH第二节一、化学鉴别法(一)母核反应鉴别试验呈色甾体激素类

H2SO4

,

H3PO4

,

HClO4

,

HCl药物如：16(二)官能团的反应1、C17

–α–醇酮基强还原性TTC——氯化三苯四氮唑(又叫红四氮唑－RT)BT——蓝四氮唑（碱性酒石酸酮）沉淀反应17呈色反应2.

C3–酮基和C20–酮基:呈色羰基试剂甾酮类激素类药物＃常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼,异烟肼,硫酸苯肼,氨基脲,苯肼异烟腙（黄色）18CONHNH22NHCl黄体酮19异烟双腙（黄色）具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色①亚硝基铁氰化钠②间二硝基酚③芳香醛203.甲酮基孕激素特征反应。黄体酮蓝紫色+

2H2O4

-CH NO

CN

5

FeOC

O蓝紫色亚硝基铁氰化钠其他甾体淡橙色21如：

黄体酮22活泼次甲基反应（Zimmermann

反应）羰23基C3、C11、C20次甲基

C2、C12、C21羰

基

C17次甲基

C16可的松雌酮212羰基邻位的次甲基叫活泼次甲基。211716雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸4.

酚羟基5.

乙炔基含炔基的甾体激素银盐沉淀AgNO324有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ6.有机卤素茜素氟蓝—硝酸亚铈HNO3—AgNO3AgCl↓25呈色茜素氟蓝蓝紫色F-26香7.水解产物的反应27特臭特臭2829（二）制备衍生物测定熔点（三）紫外分光光度法（四）红外光谱法（特征性强）中国药典上收载的甾体激素类药物均有红外光谱图。（五）薄层色谱法（六）HPLC30第三节 特殊杂质检查有关物质、硒、残留溶剂、游离磷酸盐（一）有关物质1、来源:

原料,中间体,异构体,降解产物2、方法:（具有一定分离能力）TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）31TLC法（高低浓度对比法）判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色HPLC法（高低浓度对比法）判定方法：规定杂质峰数目规定杂质峰面积醋酸氟轻松 检查 其他甾体取本品加氯仿-甲醇(9:1)制成3.0mg/ml作为供试液，精密量取适量，加氯仿-甲醇(9:1)稀释成0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱法，各取

5μl，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇（97

: 3）为展开剂，展开后晾干，在105℃干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视，供试品溶液如显杂质斑点，不1

得多于2个，其颜2

色与对照液的主斑点比较，不得更深。3233醋酸甲地孕酮 检查 其他甾体取本品适量，精密称定，以无水乙醇为溶剂，配制成每1ml含2mg的溶液（1）与每1ml含0.04mg的溶液（2），用含量测定项下的方法和溶液(0.16mg/ml)，取10μl注入液相色谱

仪，调整仪器灵敏度，使主成分峰高度达记录仪的满量程。再分别取溶液（1）和溶液（2）各10μl，进样。记录至主成分峰保留时间的2倍。溶液（1）显示的杂质峰数不得超过4个，各杂质峰面积及其总和分别不得大于溶液（2）主峰面积的1/2和3/4。二、硒剧毒1、来源：合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢2、原理3、方法3435对照品溶液的制备：精密量取标准砷溶液（每1mL相当于1μg的Se）5mL,置100mL烧杯中，加硝酸溶液

(1→30)

25mL和水10mL,即得。供试品溶液的制备：取本品50mg，照氧瓶燃烧法进行破坏后，将吸收液转移至100ml烧杯中，用水15ml冲洗燃烧瓶及铂丝，并入吸收液中，即得。检查法：将上述硒对照品溶液和供试品溶液分别用氨试液调节pH值至2.0±0.2后，转移至分液漏斗中，用水少量分次洗涤烧杯，洗液并入分液漏斗中，使成

60ml，各加盐酸羟胺溶液（1→2）1ml，摇匀后，立即精密加二氨基奈试液5ml，摇匀，在室温下放置100分钟，精密加环己烷5ml，强烈振摇2′，静置分层，取环己烷脱水后，测A378nm。规定

A供＜A对。醋酸氟轻松 检查

硒3637三、有机溶剂残留（甲醇和丙酮）GC法甲醇：0.3%丙酮：≤0.5%（g/g)38地塞米松磷酸钠 检查 甲醇和丙酮精密称取本品0.16g，置10

ml量瓶中，精密加内标溶液2ml，加水稀释至刻度，作为供试液；另精密量取甲醇10μl(≈7.9mg)与丙酮

100μl(≈79mg)置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，精密量取1mL，置10mL量瓶中，精密加内标溶液2ml,加水至刻度，作为对照液。取对照品溶液和供试品溶液，照残留溶剂测定法测定，应符合规定。39四、游离磷酸1、原理：对照品法地塞米松磷酸钠

氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠

氢化泼尼松磷酸钠40检查 游离磷酸地塞米松磷酸钠精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水

15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20℃放置30～50分钟，照分光光度法，在

740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理的吸收度比较，不得更大。（对照液0.0035%KH2PO4）（对照液0.0035%KH2PO4）4142第四节 含量测定一、HPLC,USP、BP、JP均采用,RP－HPLC（大多内标法）（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）特点:用样量少，灵敏度高，分离效果好黄体酮注射液的含量测定供试品溶液的制备取本品适量乙醚50mL量瓶精密量取5.0mL挥散乙醚振荡提取10min/次/4

次甲醇上清液离心15

min内标溶液5.0mL残渣甲醇

25mL量瓶对照品溶液的制备黄体酮约25mg甲醇25mL量瓶精密量取5.0mL内标溶液435.0mL25mL量瓶测定与计算供试品溶液5

µL对照品溶液5

µLHPLCAi供，As供Ai对，As对44方法学验证（1）专属性—— “干扰”对照品色谱图阴性对照溶液色谱图缺黄体酮的模拟注射液供试品溶液的制备(不加内标)阴性对照溶液供试品溶液色谱图4546（2）仪器精密度——仪器稳定性（同一溶液6次测定的RSD）方法重复性——供试品制备工艺的稳定性（同一工艺下平行制备6份供试液测定值的RSD）标准曲线及线性范围X：Ci（黄体酮）y：Ai/As（待测物与内标物的峰面积比值）回收率试验——方法的准确度→发现量与加入量的接近程度→R=发现量/加入量≈1（6）耐受性47二、UV法△４-3-酮

240nm(±)肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯环

280nm(±)雌激素①适用于原料药。②样品中“其它甾体”不合格时，不适用。48三、比色法（一）异烟肼比色法（二）四氮唑比色法（三）kober反应比色法——

对照品比较法（一）异烟肼比色法1．原理C3—酮基及某些其他位置上的酮基能与羰基试剂异烟肼在酸性条件下形成黄色异烟腙，在一定波长下具有最大吸收，可用于定量49502、反应条件（1）溶剂：无水乙醇，无水甲醇（2）酸的种类、浓度及异烟肼的浓度常用HClHCl：异烟肼=2M:1M时，获最大吸收度。51（3）水分、O2、光线的影响含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓O2与光线无影响（4）反应的专属性反应条件下，△4-3-酮具有一定专属性C20—酮基反应慢，

C17—酮基反应慢；

C11—酮基不反应△4-3-酮—室温下，不到1h反应完全倍他米松磷酸钠的含量测定λ=

420

nm甲醇50mL量瓶供试液：取本品适量对照液：取倍他米松磷酸钠适量1.0mL精密量取 异烟肼溶液20

mL60℃水浴,1

h冷却25

mL量瓶摇匀52甲醇Ai肾上腺皮质激素类C17-α-醇酮基强还原性1、原理（二）四氮唑比色法2、四氮唑盐的种类：红四氮唑（缩写TTC

或RT）BP；

ChP蓝四氮唑：USP53不溶于水的三苯甲瓒↓深红氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（RT）54蓝四氮唑（BT）双甲瓒（暗蓝）554、讨论结构、反应温度和时间、水分、碱浓度、空气中氧、试剂类别和浓度等，对反应速度，呈色强度和稳定性有影响。（1）官能团位置的影响①

C11:V11C=O

>

V11C-OH可的松>氢化可的松5657（1）官能团位置的影响②C21：α-羟基（C21-OH）A:21-OH酯化后较母体羟基反应速度慢即：V游离体>V酯类如：可的松>醋酸可的松B：V简单酯>V复杂酯醋酸酯>磷酸酯>琥珀酸酯>三甲基醋酸酯（2）溶剂、水分的影响含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→几无反应醛

→A↑

—无醛无水乙醇—无水乙醇58（3）碱的种类及加入顺序的影响采用氢氧化四甲基铵能得到满意结果。

加入顺序：先加TTC或BT，后加(CH3)4N+OH-原因：皮质激素与(CH3)4N+OH-长时间接触，有部分分解。59（4）

O2与光线的影响反应过程反应产物怕光

→避光、快速O2影响颜色强度和稳定性隔绝空气—充N2快速6061（5）温度与时间t℃↑→ν↑→甲瓒分解↑→%↓ChP

25℃

40～45′BP

30℃

1h1.原理λmax=

465λmax=515雌激素类药物的特征反应62雌激素（三）Kober反应比色法雌二醇-3-甲醚λmax=465λmax=51563图：雌二醇Kober反应的吸收光谱64652、K